和田羊CERS 4基因克隆、生物信息学分析及雄激素对其在皮肤表达分布的影响

【目的】探究雄激素对和田羊皮肤结构的影响,了解神经酰胺合成酶4(ceramide synthases 4,CERS4)基因及蛋白在雄激素影响和田羊皮肤结构中发挥的作用。【方法】选择15只2岁和田母羊随机分为5组,每隔3 d分别对对照组和试验1、2、3、4组和田羊肌肉注射0、1、2、3、4 mg/kg睾酮,共处理42 d,在第42天采集背部皮肤组织。采用对照组和田羊皮肤样品进行CERS 4基因CDS区克隆和测序,构建和田羊CERS4蛋白氨基酸序列系统进化树,并分析和田羊CERS4蛋白的理化性质及蛋白质结构等。通过制作皮肤组织切片并进行马松染色,探究不同剂量睾酮处理和田羊后的皮肤结构变化;通过实时荧光定量PCR检测不同剂量睾酮处理后和田羊皮肤中CERS 4基因表达水平,采用免疫组化技术观察CERS4蛋白在和田羊皮肤中的分布。【结果】成功克隆和田羊CERS 4基因CDS区,长度为1182 bp,编码393个氨基酸。相似性分析表明,和田羊与绵羊的CERS 4基因相似度最高。系统进化树分析结果显示,和田羊与绵羊在进化上属于同一分支,与人和小鼠的亲缘关系最远。生物信息学分析显示,和田羊CERS4蛋白为亲水性蛋白,无信号肽且可能有5个跨膜结构域。和田羊CERS4蛋白大部分位于内质网和细胞质膜中,而在高尔基体、细胞核和线粒体中含量最少。该蛋白与W5Q2R1_SHEEP、ACER3、SGMS1等蛋白相关性高达95%以上。经睾酮处理后和田羊皮脂腺数量和面积显著增加(P<0.05),并且睾酮处理组和田羊皮肤样品CERS 4基因表达水平相比对照组均显著提高(P<0.05),CERS4蛋白主要在皮肤皮脂腺部位表达。【结论】试验成功克隆了和田羊CERS 4基因,雄激素处理促使和田羊皮脂腺面积增大、数量变多,并且显著提高皮肤CERS 4基因的表达水平。本研究为深入了解雄激素影响绵羊皮脂腺增殖分化的作用及机制提供理论依据,同时对解决由雄激素引起的皮肤健康问题具有理论意义。

山区型和田羊毛囊KIF2.9基因的克隆与生物信息学分析

为了探究毛囊KIF2.9基因对半粗毛型地方品种绵羊羊毛品质和性状的影响,试验以山区型和田羊为试验动物,提取毛囊总RNA,反转录成cDNA,PCR扩增毛囊KIF2.9基因,并定向插入pMD18-T克隆载体中构建pMD18-T-KIF2.9克隆质粒,经双酶切、PCR鉴定及测序分析正确后,将山区型和田羊毛囊KIF2.9基因连接到原核表达载体pET-28a(+)中,构建毛囊KIF2.9基因的pET28a(+)-KIF2.9原核表达重组质粒,检测其正确性,并运用DNAMAN、ProtParam、ExPASy、MEGA 5.0等软件对其核苷酸和氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明:山区型和田羊毛囊KIF2.9基因编码序列大小为1527 bp,编码509个氨基酸。与GenBank中美利奴羊比较,毛囊KIF2.9碱基序列有20处碱基发生突变,但仅造成第292位丙氨酸→缬氨酸,第414位谷氨酰胺→谷氨酸,第466位色氨酸→苏氨酸这3处氨基酸的变异。与美利奴羊毛囊KIF2.9基因的序列比对,其碱基同源性为98.69%,但氨基酸序列同源性高达99.41%。与美利奴羊毛囊KIF2.9基因蛋白结构比对,蛋白质一级结构中原子总数、分子质量、脂肪酸系数略高于美利奴,氨基酸数目、等电点、平均疏水性等无明显差异;蛋白质二级结构中α-螺旋、β-转角、无规则卷曲和延伸链所占比例没有明显差异;蛋白质三级结构中某些肽段结构发生了变化。KIF2.9基因分子系统进化树反映山区型和田羊与美利奴羊亲缘关系较近。说明山区型和田羊与美利奴羊的羊毛类型有差异,但毛囊KIF2.9基因在氨基酸水平上高度相似,亲缘关系较近。

挖掘设备潜力 提高电网运行质量

无功补偿是利用技术措施降低线损的重要措施之一。近年来,国家电网公司通过不断加强农网电压无功管理工作,农网供电电压质量获得显著提高,无功补偿能力和调控电压质量能力大幅度提升。有10个县公司被国家电网公司评为全国电压无功管理标杆单位。本期简要介绍启东和隆尧在电压无功管理方面工作流程、考核标准、技术措施。

文化绽放 点亮幸福之光——河北省隆尧县供电公司企业文化建设纪实

这里，是尧帝始封之地，李氏唐朝的故里；这里，曾经造就出宋朝词人范炎，现代作家尧山壁等文化名人。源远流长的三千年历史，孕育了隆尧人的智慧与胆识。邢台大地震的记忆，熔炼了隆尧人的果敢与坚毅。这里是河北省隆尧县，在这块历经文明传承和灾难考验的土地上，隆尧电力人凭借远见的卓识，顽强的作风，以诚信立企，以文化制胜，点亮了尧乡大地万家幸福之光!

和田羊KRT79基因克隆、生物信息学分析及雄激素对其在皮肤中表达分布的影响

[目的]克隆获得和田羊皮肤角蛋白79(keratin 79,KRT79)基因,探究雄激素对和田羊皮肤结构的影响,了解KRT79在雄激素影响和田羊皮肤结构过程中发挥的作用,为深入研究KRT79在绵羊皮肤中的功能及雄激素对KRT79基因表达调控的机制奠定基础。[方法]选取15只2岁和田母羊,随机分为5组,采用肌内注射的方法对对照组和田羊注射玉米油,对4个试验组和田羊分别注射1、2、3、4 mg/kg BW睾酮,每3天注射一次,共处理42 d,在第42天采集和田羊背部皮肤组织。从对照组和田羊皮肤中提取总RNA,PCR扩增、克隆KRT79基因CDS区序列并测序。利用DNAStar软件对和田羊KRT79基因序列与绵羊等物种相应的基因序列进行比对,采用Mega 5.0软件绘制各物种KRT79基因系统进化树。使用生物信息学在线网站分析KRT79蛋白的理化性质及结构特征。通过HE染色观察睾酮处理的和田羊皮肤结构变化,使用实时荧光定量PCR和Western blotting检测分析不同浓度睾酮处理的和田羊皮肤中KRT79基因和蛋白表达量的差异,并通过免疫荧光染色探究睾酮对KRT79蛋白在和田羊皮肤中表达分布的影响。[结果]和田羊KRT79基因CDS区序列长1 614 bp,与绵羊的相似性为99.9%。系统进化树分析表明,和田羊KRT79基因与绵羊的进化关系最近,与小鼠的进化关系最远。和田羊KRT79基因编码537个氨基酸,是一种不稳定的亲水性蛋白,KRT79蛋白的二级结构主要由α-螺旋和无规则卷曲组成。形态学分析结果表明,睾酮处理后和田羊皮肤中皮脂腺面积增大,数量变多。实时荧光定量PCR、Western blotting和免疫荧光结果表明,睾酮处理后和田羊皮肤中KRT79基因和蛋白的表达水平显著高于对照组(P<0.05),KRT79蛋白主要分布于和田羊皮肤的皮脂腺、表皮和毛囊区域。[结论]和田羊KRT79基因CDS区长1 614 bp,是一种不稳定的亲水性蛋白。雄激素刺激能显著促进和田羊皮肤的皮脂腺面积增大和数量变多,并促进皮肤中KRT79基因和蛋白的表达。研究结果为深入探讨雄激素对和田羊皮肤的影响及其作用机制提供了理论依据,同时为解决由雄激素引起的皮肤脂质代谢异常和角蛋白失调疾病治疗方法的研究提供了参考。