阿尔茨海默病风险人群的超早期β淀粉样蛋白沉积与默认网络模式的关联研究

目的 探讨阿尔茨海默病风险人群的超早期脑脊液β淀粉样蛋白(Aβ)沉积与默认网络(DMN)功能连通性的关系。方法 纳入阿尔茨海默病神经影像学计划从2010年7月至2018年12月在北美地区招募的轻度认知障碍受试者,根据36个月随访期脑脊液Aβ的变化将受试者分为Aβ下降组(25例)和稳定组(19例)。运用脑功能MRI技术研究脑脊液Aβ下降、DMN功能连通性和认知功能变化的关系。结果 相较于Aβ稳定组,Aβ下降组在随访过程中连线测试-B(TMT-B)时间延长(P<0.05)。在双侧枕中回和左侧颞中回,Aβ下降组DMN功能连通性低于Aβ稳定组(P<0.01);其中,左侧颞中回的功能连通性与TMT-B时间呈负相关(r<0,P<0.05)。结论 超早期Aβ沉积与颞枕叶DMN功能连通性下降密切相关,且导致了执行功能损害。

教育与载脂蛋白E基因交互作用调节轻度认知障碍患者的认知功能和脑网络活性

目的:受教育水平和载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因均可影响认知障碍的发生,但两者的交互作用尚不明确。本研究旨在探讨受教育水平和ApoE基因对轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)患者的认知功能和默认网络(default mode network,DMN)的交互作用。方法:本研究数据来源于阿尔茨海默病神经影像学计划数据集。根据受教育水平和ApoEε4等位基因(ApoEε4,ApoE4)状态将MCI受试者分为4组,运用协方差法分析两者对认知功能和DMN的作用。结果:教育和ApoE基因型对MCI患者整体认知功能存在显著交互作用(P<0.05):在低教育受试者中,非ApoE4携带者的整体认知功能优于携带者[23.00(22.50,25.50)vs.22.00(21.00,24.00)],而在高教育受试者中则相反[23.00(22.00,26.00)vs.25(22.75,26.25)]。另一方面,受教育水平与ApoE基因型对DMN的左侧颞中回的功能连接值(functional connectivity,FC)存在显著交互作用(P<0.05):在低教育受试者中,ApoE4携带者的FC显著高于非携带者(0.35±0.32 vs.0.15±0.28),而在高教育受试者中则相反(0.09±0.26 vs.0.25±0.23)。行为学关联分析发现左侧颞中回的FC与整体认知功能呈显著负相关(r=-0.560,P=0.030)。结论:高教育水平显著降低ApoE4等位基因对MCI患者认知功能的破坏作用,该认知保护作用可能与高教育水平降低异常的DMN活性相关。该结果强调基因与环境交互作用对认知障碍的重要影响。

青藤碱对骨关节炎的治疗作用及机制探讨

目的探讨青藤碱(SIN)对兔骨关节炎(OA)模型的治疗作用及机制。方法采用随机数字表法将15只体重在2.5~3.0 kg的普通级健康成年新西兰兔分为对照组、骨关节模型组(OA组)、青藤碱治疗组(SIN)组,每组5只。对照组应用生理盐水关节腔注射,OA组、SIN组分别用4%木瓜蛋白酶注射液和0.03 mol/L的L-半胱氨酸(2∶1)混合溶液以0.1 ml/kg关节腔内注射,分别于第1、4、7天共注射3次。造模2周后兔膝关节出现肿胀,活动障碍,造模成功。OA造模成功后SIN组给予盐酸SIN缓释片30 mg/(kg·d)灌胃,连续用药15 d,OA组、对照组不予特殊处理。4周后抽取兔血分别检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、MMP-13、Ⅱ型胶原(Collagen-Ⅱ)、软骨低聚物基质蛋白(COMP)水平,并行关节病理解剖学观察。取各组兔软骨组织行免疫组织化学检测软骨组织Collagen-Ⅱ、聚蛋白多糖及衰老相关基因p21、p53蛋白表达水平。结果4周后OA组血清中IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-13、Collagen-Ⅱ、COMP水平高于对照组(P<0.05);SIN组IL-1β、TNF-α、MMP-1、MMP-13、Collagen-Ⅱ、COMP水平低于OA组(P<0.05)。大体标本观察显示:对照组关节正常,OA组关节腔有中等量关节积液,滑膜充血水肿,关节软骨面毛糙,而SIN组关节腔积液少,滑膜充血改善。镜下显示:与对照组比较,OA组兔膝关节软骨关节面不光滑,软骨明显变薄,滑膜大量炎症细胞浸润,滑膜增生、水肿明显;SIN组滑膜炎症细胞浸润及水肿、软骨损伤均较OA组减轻。免疫组织化学检测显示:OA组p21、p53表达水平高于对照组(P<0.05),SIN组p21、p53表达低于OA组(P<0.05)。聚蛋白多糖表达结果显示:OA组较对照组下降,SIN组较OA组表达增加。各组Ⅱ型胶原蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论SIN对OA有治疗作用,与抑制炎症因子及MMP分泌相关,并抑制软骨细胞衰老,为SIN用于OA治疗提供理论依据。

偏头痛大鼠硬脑膜及三叉神经节上TRPV1的表达变化

目的:观察TRPV1在偏头痛大鼠硬脑膜及三叉神经节上的表达变化。方法:取健康成年雄性SD大鼠60只,按随机数字法分为对照组(control组)、实验复方致炎剂(inflammation soup,IS)1 d组(IS 1 d组)、实验IS 3 d组(IS 3 d组)和实验IS 6 d组(IS 6 d组)。在雄性SD大鼠硬脑膜上埋置PE-10管,实验组分别给予1 d、3 d、6 d IS 20μl/d及对照组给予6天等量生理盐水。采用WesternBlot、免疫荧光法和Real-Time PCR法检测TRPV1在硬脑膜及三叉神经节上的表达情况。结果:对照组和实验组大鼠硬脑膜及三叉神经节上均可见TRPV1表达;与对照组相比,实验组硬脑膜、三叉神经节上TRPV1蛋白表达量、阳性细胞数及mRNA明显升高,以实验IS 6 d组最高(P<0.05)。结论:TRPV1在偏头痛大鼠硬脑膜及三叉神经节上的表达增加。TRPV1表达上调可能是偏头痛外周敏化的重要机制之一。

致炎剂诱发清醒大鼠反复发作头痛及对PAG区c-Fos表达的影响

目的:采用复方致炎剂(IS)定期刺激大鼠硬脑膜,建立一种清醒状态下大鼠反复发作性头痛模型。方法:在雄性SD大鼠硬脑膜上埋置PE-10管,连续6天给予IS或等量生理盐水。采用von Frey毛测试大鼠眶周的压力疼痛阈值,将左侧硬脑膜行甲苯胺蓝染色观察肥大细胞脱颗粒比率,通过免疫组化染色技术对六次NS及IS和一次IS给药组大鼠的中脑导水管灰质(PAG)区域c-Fos阳性细胞进行计数观察。结果:随着IS刺激次数的增多大鼠的眶周压力疼痛阈值下降;肥大细胞脱颗粒比率较NS组明显增加(P<0.01);c-Fos阳性细胞数IS两组较NS组有显著差异(P<0.01),IS两组之间无差异(P>0.05)。结论:反复给予复方致炎剂可以成功诱导大鼠反复发作性头痛,为慢性头痛转变机制研究提供了一种较好的实验模型。

氟桂利嗪对原代培养大鼠皮质神经元钠离子通道电流的影响

目的探讨氟桂利嗪对大鼠皮质神经元电压门控钠离子通道电流的影响及机制。方法选择孕17~18d SD胎鼠培养皮质神经元,应用全细胞记录式膜片钳技术记录神经元钠离子通道电流,先加入0.1、1.0、10.0和100.0μmol/L氟桂利嗪刺激,后续实验使用1μmol/L氟桂利嗪刺激,比较加药前后钠电流相关曲线的变化。结果 0.1、1.0、10.0和100.0μmol/L氟桂利嗪对峰值电流抑制率分别为(14.70±4.39)%,(43.48±3.21)%,(61.91±7.41)%和(77.01±5.80)%,差异有统计学意义(P<0.05),氟桂利嗪达到半数最大抑制率时的药物浓度为0.94μmol/L。与加药前比较,加药后钠电流失活曲线向超极化方向移动了17.03mV;钠通道复活时间常数由(7.51±0.05)ms增至(19.46±0.03)ms,差异有统计学意义(P<0.05);10Hz、50Hz脉冲频率下,加药后钠电流较加药前减少幅度分别为[(21.63±7.36)%至(9.44±5.13)%]和[(45.83±10.04)%至(12.56±6.72)%,P<0.05]。结论氟桂利嗪对皮质神经元钠电流的抑制效应,或能解释其预防偏头痛发作的另一可能机制。

电刺激硬脑膜对三叉神经节连接蛋白40表达和痛阈的影响

目的:探讨三叉神经节中连接蛋白40在偏头痛发作中的临床意义。方法:将健康成年SD大鼠随机分为假手术组、对照组、实验0h组、实验12h组、实验24h组、实验48h组,采用电刺激大鼠上矢状窦区硬脑膜模型。应用免疫荧光和Westem blot技术观察各组三叉神经节连接蛋白40表达,应用von frey纤维丝测定大鼠眼周皮肤的痛觉阈值。结果:免疫荧光显示实验0h组、实验12h组、实验24h组连接蛋白40的表达均高于假手术组、对照组和实验48h组,于1 2h达表达高峰(P<0.05)。各组左右侧无统计学差异(P>0.05)。Western blot显示实验0h组、实验12h组、实验24h组连接蛋白40的表达均高于假手术组、对照组及实验48h组(P<0.05)。各组左右侧无统计学差异(P>0.05),于12h达表达高峰。Von Frey纤维丝测定显示实验组大鼠实验前1h、实验刺激后2h、12h、24h、48h左、右眼周皮肤的痛觉阈值呈先下降后上升的趋势,于12h达低点,48h基本恢复正常。结论:电刺激大鼠上矢状窦区硬脑膜可上调三叉神经节连接蛋白40的表达,降低大鼠面部的痛觉阈值,增强面部的痛觉敏化,表明连接蛋白40在偏头痛的发生及发展中可能起到一定作用。

滑膜组织在脐带间充质干细胞治疗骨关节炎中的作用及机制

目的探讨骨关节炎(OA)兔滑膜的改变及脐带间充质干细胞(UC-MSCs)对OA的治疗作用及相关机制。方法选取健康成年新西兰大白兔15只,分为对照组、OA模型组、UC-MSCs干预组3组,每组各5只。OA造模成功后给予干预组关节腔内注射UC-MSCs,干预4周后观察关节影像学改变及病理学改变;取各组滑膜组织通过免疫组化方法检测滑膜组织IL-6、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)等炎症因子的水平及细胞外信号调节激酶(ERK)等表达水平,并采用Western blot方法检测滑膜组织IL-6、MMP-13、ERK、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白等表达水平。结果磁共振检查显示,与对照组相比,OA模型组兔膝关节滑膜明显增厚,关节腔积液明显增多;UC-MSCs干预组关节滑膜增厚、关节腔积液均较OA模型组明显改善。病理学观察显示,OA模型组关节滑膜炎性细胞较对照组明显增多,滑膜增生、水肿明显,UC-MSCs干预组较OA模型组滑膜炎性细胞浸润减轻,滑膜增生、水肿明显减轻。免疫组化结果显示,OA模型组兔滑膜IL-6、MMP-13、ERK水平较对照组明显升高(P<0.05)。UC-MSCs干预组ERK、MMP-13水平较OA模型组下降,差异有统计学意义(P<0.05),IL-6水平较OA模型组下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。Western blot结果显示,模型组IL-6、MMP-13、MAPK、ERK表达水平均较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);UC-MSCs干预组IL-6、MMP-13、MAPK、ERK表达量较OA模型组明显下降(P<0.05)。结论OA病程中存在滑膜组织炎症反应改变,滑膜的炎症因子参与OA形成及进展;UC-MSCs对OA兔滑膜具有保护作用,与其抑制炎症反应相关。

氧化应激相关细胞衰老指标与骨关节炎的相关性探讨

目的 通过检测软骨细胞衰老相关指标,探讨软骨细胞衰老与骨关节炎(OA)发病的相关性。方法 选取2018年1月—2020年12月南京鼓楼医院骨科需手术住院的OA患者及非OA患者各6例,分离培养膝关节软骨细胞,分为正常软骨细胞组(对照组)、OA软骨细胞组(OA组),选P2代细胞分别进行β-半乳糖苷酶染色检测,收集细胞行流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位,定量PCR(qPCR)检测细胞P21、P53基因mRNA表达,采用Western blotting检测软骨细胞中P21、P53蛋白水平。结果 OA组软骨细胞β-半乳糖苷酶染色阳性率显著增高,OA组ROS水平[(24.72±2.40)%]较对照组[(4.96±0.14)%]明显升高(P<0.01),OA组JC-1染色绿色荧光强度[(21.87±3.03)%]即细胞线粒体膜电位下降明显高于对照组[(3.13±0.25)%,P<0.01];OA组P21、P53基因mRNA表达量(2.72±0.21、2.90±0.23),较对照组表达量(1.00±0.03、1.00±0.06)显著增加(均P<0.05)。OA组周期蛋白P21、P53表达量(0.51±0.02、0.55±0.03)亦较对照组表达量(0.40±0.03、0.45±0.02)显著增加(P<0.01)。结论 OA患者软骨细胞衰老较对照组显著,氧化应激诱导的细胞衰老可能在OA发病中起关键作用,抗氧化应激或可作为OA治疗的有效靶点。

老年高血压患者维生素D水平与晨峰血压关系的临床分析

目的研究老年高血压患者维生素D水平与动态血压相关参数及晨峰血压的关系。方法选择老年高血压患者102例，年龄60～81岁，其中男性59例，女性43例，根据患者25（OH）D3浓度，将患者分为两组≥50nmol／L的患者为维生素D充足组（充足组），〈50nmol／L的患者为维生素D缺乏组（缺乏组）。比较两组临床资料和血压相关指标，同时对25（OH）D3浓度与各变量间的相关性、晨峰血压相关因素及不同浓度25（OH）D。发生晨峰血压进行分析。结果维生素D缺乏组体质指数高于维生素D充足组，诊室收缩压、24h收缩压、日间收缩压夜间舒张压及血压晨峰值高于维生素D充足组，而夜间血压下降率低于维生素D充足组。25（OH）D3水平与空腹血糖、血压晨峰、体质指数、诊室收缩压、24h收缩压、日间收缩压、夜间收缩压及夜间血压下降率存在直线相关性（P〈0．05），其中与夜间血压下降率呈正相关。多元Logistic回归分析结果显示，25（OH）D3、体质指数是影响老年高血压患者发生晨峰血压的危险因素（P〈0．01）。随着血清25（OH）D3水平的降低，晨峰血压的发生率增加（0R值分别为3．306和4．019）。结论在老年高血压患者中25（OH）D3水平与空腹血糖、血压晨峰、体质指数、诊室收缩压、24h收缩压、日间收缩压、夜间收缩压、夜间舒张压呈负相关，与夜间血压下降率呈负正相关，随着血清25（OH）D3水平的降低，发生晨峰血压的发生率增加。

硬脑膜传入神经末梢敏化对初级感觉神经元电压门控型钙电流的影响

目的探讨化学刺激硬脑膜传人神经末梢对大鼠三叉神经节神经元的高电压激活钙电流（HVA．Ica）的调控效应。方法雄性SD大鼠16只按随机数字表法分为生理盐水（NS）组和致炎剂fIS）＋释放降钙素基因相关肽（CGRP）组（n=8），大鼠上矢状窦处脑膜给药造模1h后急性分离大鼠三叉神经节中小神经元．采用全细胞膜片钳技术记录电压门控钙离子通道（VGCC）电流。结果与NS组钙电流峰电流[（-49．5±5．18）pA／pF]比较，IS＋CGRP组[（-80．48±4．43）pA／pF]增高，差异有统计学意义（P〈0．05）；IS＋CGRP组神经元钙电流激活曲线的半数激活电压Va1/2为（-20．9±0．4）mV．较NS组[（-16．2±0．5）mV]向超级化方向移动了4．7mV，差异有统计学意义（P〈0．05）；IS＋CGRP组神经元钙电流的半数失活电压vi1/2为（-12．4±0．2）mV，较NS组[（-22．5±0．3）mV]向去极化方向移动了10．1mV，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论激活硬脑膜传人神经末梢诱导初级感觉神经元的外周敏化过程，突出表现为钙电流的增高。