家蚕丝素重链非重复区肽段在大肠埃希菌中的优化表达

丝素重链是家蚕丝素蛋白的主要组成部分,位于丝素重链中间的核心区域由12个重复区肽段和11个非重复区肽段组成,非重复区是含有大量极性侧基的亲水性肽段。为了研究丝素重链各重复区组成序列的结构及其在生物医学领域的适用范围,需要对其进行高纯度分离。克隆了丝素重链非重复区编码基因片段f(1)及其延伸片段f(4)和f(8),并构建重组质粒在大肠埃希菌(Escherichia coli)中诱导表达融合蛋白GST-F(1)、GST-F(4)和GST-F(8)。通过三点设计法优化诱导剂IPTG浓度、起始菌密度和诱导时间,采用SDS-PAGE电泳和BCA蛋白浓度检测法定性、定量分析融合蛋白的表达水平,确定了融合蛋白GST-F(1)、GST-F(4)和GST-F(8)的最佳诱导表达条件:起始菌密度D(600 nm)值分别为1.5、1.2和0.9,诱导剂浓度分别为0.2 mmol/L、0.2 mmol/L和0.3 mmol/L,诱导时间分别为3 h、4 h和5 h。在上述最佳诱导表达条件下,3种融合蛋白的表达量达到50~90 mg/L,可满足后续研究的需求。

基于计算工具模拟抛硬币实验

本文对抛硬币实验的模拟进行研究。利用计算工具的高效和算法的合理性,给出模拟抛硬币实验的方法,分别在Casio fx-991ESPLUS科学计算器、Microsoft Visual C++6.0以及MATLAB R2012a三种环境下进行数据的获取和总结,并优化了随机数的生成方法,验证了抛硬币正反面朝上概率相同的结论。该模拟方法不仅适用于概率论教学过程中的演示,也可为历史上其他相关数学实验的模拟和验证提供思路。

世界海运研究中心海外学习访问团赴港学习的体会与思考

在世界海运研究中心的组织下，大连海事大学海外学习访问团一行39人进行了为期7天的赴港交流和学习。在这7天里，访问团分别参观走访了香港政府组织、高等院校、航运企业、海事机构、培训机构、公益组织，赴港之行让学子们收获颇多，感触颇深。这次游学也让大家明白，以铜为镜，可以正衣冠；以史为镜，可以知兴替；以人为镜，可以明是非。正所谓：学，然后知不足。走出去是为了更好地拿来，未来更多地学到。

分析单克隆抗体电荷异质性的成像毛细管等电聚焦电泳技术平台方法的建立

目的 采用成像毛细管等电聚焦电泳技术（imaged capillary isoelectric focusing,iCIEF）建立分析单克隆抗体（单抗）电荷异质性的平台方法,并用不同亚型单抗（IgG1、IgG2、IgG4）确认该平台方法的适用性.方法 优化该平台方法的部分参数,包括两性电解质和阴极稳定剂体积、聚焦时间和尿素浓度.采用3种亚型单抗（IgG1、IgG2、IgG4）对该平台方法的专属性、精密度、线性、准确度和耐用性进行验证.结果 对样品（单抗）的处理条件为：3 mol/L尿素-0.5％甲基纤维素溶液70μl、两性电解质（pH3～10）4 μl、阴极稳定剂（500 mmol/L精氨酸）2 μl、等电点6.14和9.99 Marker各2μl,最终完成0.2 mg/ml单抗（样品）的制备.检测参数：预聚焦1 500V、1 min,聚焦3 000V、8 min.该平台方法的专属性良好,制剂缓冲液对检测无干扰.重复检测6份平行样品以及不同分析员于不同时间检测12份样品各成分含量的相对标准偏差均符合规定的要求.单抗（样品）终浓度为0.1～0.3 mg/ml时,主要和酸性成分的线性决定系数（R2）≥0.99,碱性成分的线性R2≥0.98.该平台方法检测样品各成分的准确度为92％～105％.耐用性实验设计结果表明,两性电解质（pH3～10）体积和毛细管批次对该平台方法有显著影响.结论 建立的iCIEF平台方法分离度较高,精密度、准确度和耐用性良好,为单抗制品的电荷异质性表征和质量控制提供了更有效的工具.