颞下颌关节骨关节病髁状突软骨细胞体外培养及细胞生物学特性研究

目的 :从兔的颞下颌关节骨关节病模型动物获得髁状突软骨细胞并行体外培养。方法 :采用部分关节盘手术切除的方法制造颞下颌关节骨关节病模型 ,组织大体观察、超微结构观察和组化检测方法确定骨关节病的存在。在此基础上 ,通过机械分离、胰蛋白酶和胶原酶联合消化的方法从骨关节病髁状突软骨组织中获得软骨细胞 ,进行体外环境下的贴壁培养 ;通过软骨细胞特异性蛋白的免疫组化方法进行细胞鉴定。四甲基偶氮唑盐法比较病理模型细胞与正常细胞的增殖能力差异。结果 :上述颞下颌关节骨关节病模型全面地模拟了骨关节病变关节软骨组织的特征 ;利用机械分离、胰蛋白酶胶原酶联合消化的方法成功地从骨关节病髁状突软骨组织中分离出软骨细胞并在体外贴壁条件下培养成活 ;应用特异性的Ⅱ型胶原多克隆抗体和聚合性糖胺多糖单克隆抗体对培养细胞进行免疫组化检测鉴定 ,均显示阳性。骨关节病髁状突软骨细胞的增殖能力高于正常细胞。结论 :成功地建立了骨关节病髁状突软骨细胞的体外模型 ;骨关节病早期的髁状突软骨细胞表现出增殖活跃的特性。

血管化自体颌下腺移植术后失神经支配腺体的病理变化

目的 :研究血管化自体颌下腺移植术后失神经支配腺体的病理变化 ,探讨其分泌机制。方法 :在摘除泪腺建立家兔角结膜干燥症模型的基础上进行血管化自体颌下腺移植 ,于移植术后分别对不同时间失神经支配腺体组织切片行HE染色、S 10 0蛋白抗体免疫组化染色 ,光镜观察 ,制做电镜标本透射电镜观察。结果 :移植后早期可见腺实质部份轻度萎缩变性样改变 ,神经节及神经纤维不同程度变性。长期观察腺体结构正常 ,腺体内可见健康的神经节及神经纤维。电镜观察见腺泡细胞内较多分泌颗粒。结论 :移植腺体能保持旺盛的分泌功能 ,失神经支配腺体未见萎缩。

转化生长因子β1在下颌骨牵引成骨过程中的作用

目的 :研究TGF β1在不同时期下颌骨牵引成骨过程中表达水平的变化 ,探讨其可能发挥的作用。 方法 :恒河猴 16只 ,10只行单侧下颌骨牵引 ,6只行双侧下颌骨牵引 ,采用下颌角部骨截开术 ,5d间歇期后以每天0 .5mm× 2次的速度牵引 ,共 15d。分别于牵引完成时、牵引后 2、4、6、12周时处死一组动物。将牵引区骨块制作脱钙石蜡切片 ,进行HE染色及TGF β1免疫组化染色。结果 :牵引完成后早期阶段 ,TGF β1阳性着色颗粒广泛分布于牵引区的纤维血管基质、成骨细胞及成软骨细胞中 ,尤其是在截骨断端的血肿区 ,TGF β1的阳性着色最强。在稳定期 ,牵引区TGF β1的阳性着色逐渐减弱 ,主要见于胶原纤维矿化、成骨细胞形成类骨质的区域 ,且主要位于血小板、血管内皮细胞及成骨细胞胞浆中。牵引完成后 12周 ,除骨髓腔中纤维血管基质可见少量TGF β1的阳性着色颗粒外 ,在骨外膜、骨基质及骨细胞内已见不到明显的TGF β1的阳性着色。结论 :TGF β1活跃参与了牵引区新骨的形成过程 ,它在刺激和诱导骨前体细胞及原始间充质细胞增殖分化 ,促进牵引区成骨细胞及血管内皮细胞增生方面可能发挥了重要作用。

颞下颌关节骨关节病动物模型的建立及组织病理学观察

目的 建立稳定的颞下颌关节骨关节病动物模型。方法 通过外科手术切除部分关节盘的方法 ,在成年兔上建立较为稳定的颞下颌关节骨关节病动物模型 ;分别于术后第 15天、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月和 6个月将实验兔处死 ,取实验侧髁突组织进行组织病理学观察 ;1%甲苯胺蓝染色 ,观察病变髁突组织中蛋白多糖的分布范围与水平变化。结果 本研究中的颞下颌关节骨关节病模型从组织病理学上先后观察到了关节盘损伤后早期关节软骨的应激性修复增殖 ,中期软骨基质渐进性损耗 ,后期软骨基质损耗丧失、纤维组织修复覆盖及骨赘形成等软骨退行性变过程。甲苯胺蓝染色显示 ,病变早期肥大增厚的软骨组织中蛋白多糖含量降低 ,且分布不均匀 ;病变晚期的髁突较深层软骨组织中仍可见有蛋白多糖的合成与分布。结论 本研究所建立的颞下颌关节骨关节病动物模型能较好地模拟骨关节病的组织病理学变化过程 ,且具有结果稳定。

颞下颌关节骨关节病髁突组织细胞凋亡的研究

目的 研究颞下颌关节骨关节病髁突组织中软骨细胞凋亡发生的特点,探讨细胞凋亡在颞下颌关节骨关节病发病机制中的作用。方法 通过手术切除部分关节盘的方法建立颞下颌关节骨关节病动物模型,15 d-6个月内采用TUNEL法标记髁突各相应时段的凋亡细胞,结合相应组织学变化,观察、分析颞下颌关节骨关节病髁突组织中细胞凋亡发生的特点。结果 关节盘损伤后软骨产生明显应激性修复增殖反应时,凋亡细胞主要集中于关节表面的纤维层中;随着关节软骨和骨组织不断改建,软骨组织中逐渐出现大量的细胞凋亡现象,主要发生于表面纤维层与增殖层,尤其集中在软骨细胞簇中;在软骨组织消耗严重时,浅表区域内的细胞凋亡现象逐渐减少,肥大钙化层中出现了较多的凋亡细胞。结论 颞下颌关节骨关节病髁突软骨组织中存在过量凋亡的现象,软骨细胞异常增殖与过度凋亡导致软骨基质自身调节机制的破坏可能是骨关节病发生的重要原因之一。

单侧下颌骨牵引成骨术对颞下颌关节的影响

目的 :探讨单侧下颌骨牵引成骨术 (mandibulardistractionosteogenesis,MDO)对颞下颌关节 (temporo mandibularjoint,TMJ)的影响。方法 :恒河猴 1 0只行右侧MDO ,间歇期 5d ,牵引速度 0 .5mm× 2次·d-1 ,共 1 5d。分别于牵引完成时、牵引后 2、4、6、1 2周时拍摄X线片并处死一组动物 ,取双侧TMJ制作脱钙石蜡切片 ,行HE染色及TGF β1免疫组化染色。结果 :术后恒河猴下颌中线明显偏向左侧 ,前牙开牙合、反牙合 ,右侧后牙重度开牙合 ,左侧后牙为反牙合。X线片上见右侧髁状突向后上方移位 ,左侧髁状突向前下方移位。切片上见术后早期双侧TMJ均发生变化 ,右侧髁状突退行性变及增生活动均较左侧明显 ,且变化累及软骨各层及软骨下骨组织。稳定期开牙合逐渐关闭 ,髁状突逐渐向正常位置移动。牵引完成后 1 2周右侧后牙开牙合基本关闭 ,前牙开牙合及反牙合仍较明显 ,髁状突位置略偏后 ,仍存在退行性变 ;左侧髁状突除软骨肥大层仍较厚外 ,其位置及组织学表现接近正常。稳定期不同阶段髁状突TGF β1阳性着色均较对照组显著增强。 结论 :MDO可造成TMJ解剖位置变化及组织形态较轻微的退行性变 ,但远期这些变化可以得到逐步修复。TGF β1在TMJ退行性变的修复重建过程中 ,可能发挥了一定作用。

涎腺腺样囊性癌细胞转移潜能与细胞外基质的关系

目的 了解不同转移能力的涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma ,SACC)细胞与细胞外基质粘附、对细胞外基质侵袭及趋化运动的能力。方法 MTT法测定SACC -LM ,SACC - 83,ACC -M ,ACC - 2与纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附 ,用改良Boydenchamber方法观察了SACC细胞对人工重组基底膜的侵袭以及趋化运动。结果 高转移的SACC -LM与细胞外基质的粘附低于SACC - 83,而ACC -M与细胞外基质的粘附高于ACC - 2。SACC与纤维粘连蛋白的粘附高于和层粘连蛋白、Ⅳ型胶原的粘附。SACC -LM ,ACC -M的侵袭和运动能力强于SACC - 83,ACC - 2。结论 不同转移能力的SACC细胞与细胞外基质的粘附能力不同。高转移潜能的涎腺腺样囊性癌细胞的侵袭能力。

动静脉瘘、动静脉畸形组织病理学观察

目的 研究动静脉瘘、动静脉畸形的组织病理学特征。方法 共包括 16只成年兔及 3例动静脉畸形病例。 16只兔中 14只为实验动物 ,包括A组 9只 ,B组 5只 ;余 2只作为空白对照。实验动物均形成颈部动静脉瘘 ,观察瘘形成后 1～ 3个月及瘘结扎后 1～ 3个月时瘘动静脉病理学变化。此外 ,尚对 3例动静脉畸形病例的动静脉标本作病理学研究。结果 动静脉瘘形成后 ,动脉弹力膜进行性破坏 ,而静脉胶原纤维增生 ,动静脉平滑肌均破坏且排列紊乱 ;瘘结扎后 ,动静脉弹力组织恢复不明显 ,而胶原纤维增生显著。动静脉畸形主要病理表现为胶原纤维的显著性增生和退变。结论 动静脉瘘形成后 ,弹力组织破坏持续加重 ,胶原纤维则修复性增生 ,使动静脉失去原有的弹性。瘘结扎后 ,胶原纤维增生较明显 ,但弹力组织未见恢复。

肿瘤转移抑制基因nm23在涎腺腺样囊性癌表达的研究

目的 探讨肿瘤转移抑制基因nm2 3与涎腺腺样囊性癌 (salivaryadenoidcysticcarcinoma,SACC)预后的关系。方法 采用免疫组织化学链亲和素法分析 5 2例SACC的nm2 3表达 ,并分析nm2 3与SACC病理学分型、临床分期、局部复发、远处转移和患者生存率的关系。结果 nm2 3表达与SACC病理学分型、临床分期、局部复发和患者生存率无明显相关 (P >0 .0 5 ) ,而与远处转移呈高度负相关关系 (P <0 .0 1)。结论 nm2 3能抑制SACC远处转移的发生 ,并可作为预后指标来预测SACC的远处转移 ,指导临床治疗。

改良牙冠延长术后组织愈合的动物实验研究

目的:明确改良牙冠延长术后的组织愈合方式,为改良牙冠延长术的临床推广应用提供生物学基础。方法:对5只比格犬的右上中切牙、左上中切牙和左上第一侧切牙分别进行翻瓣术、常规牙冠延长术和改良牙冠延长术,右上第一侧切牙为对照牙,不进行手术,术后36周获取标本进行组织学观察。结果:颊舌向软硬组织切片苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色发现翻瓣术的愈合方式为再附着,与对照组一致。常规牙冠延长术组5只比格犬的根面均存在薄片状的牙骨质缺损,其中4只比格犬的组织愈合为新附着,表现为牙骨质缺损区内有新牙骨质形成,胶原纤维呈一定角度插入其中;另1只比格犬的组织愈合方式为长结合上皮愈合,表现为长结合上皮根向移位止于牙骨质缺损区的根方水平。改良牙冠延长术组中4只比格犬根面存在牙骨质缺损(薄片状和浅台阶样缺损各2只),其中3只比格犬的组织愈合为新附着,但胶原纤维与根面平行,1只比格犬的愈合方式为长结合上皮愈合;另外1只比格犬因组织块未能完整分切而无法观察组织愈合方式。结论:改良牙冠延长术后的组织愈合方式与常规法相似,包括新附着和长结合上皮愈合两种方式,根面处理(根面平整或根面改形)以及根面缺损的类型(薄片状或浅台阶样牙骨质缺损)并未影响组织的愈合方式。

合创伤对家兔颞下颌关节的影响－X线及病理观察

对１１只创伤家兔和６只对照组家兔颞下颌关节的Ｘ线和病理组织学观察，发现创伤后家兔颞下颌关节出现了早期退行性改变，如：髁状突表层胶原纤维变性、松解、与关节盘粘连；增殖带和肥大带变薄；钙化软骨带消失。创伤５月的髁状突Ｘ线也出现明显的变化。表明，创伤可以导致颞下颌关节的退行性改变，从而支持因素为颞下颌关节紊乱综合症诸多致病因素之一的观点。

髁状突骨折后颞下颌关节内粘连的治疗及组织病理学观察

目的初步探讨髁状突骨折继发颞下颌关节内粘连的治疗及其病理组织学特点。方法髁状突骨折后持续开口受限病例6例,对其行开放及关节镜手术治疗。术中发现关节内粘连、手术切除粘连组织并取部分粘连组织行组织病理学检查。结果所有病例手术后开口度明显改善。早期粘连组织表现为血运丰富的疏松结缔组织,后期为致密结缔组织,其中可见软骨成分。结论髁状突骨折后关节内粘连组织早期为疏松结缔组织构成的纤维条索,后期为致密的纤维结缔组织,可有软骨化改变。手术是治疗此类病例的较佳选择。关节镜手术对部分病例有一定的应用价值。

金属硫因蛋白、增殖细胞核抗原和肿瘤抑制基因p53在涎腺腺样囊性癌表达的研究

本研究对金属硫因蛋白(metallothionein,MT)、增殖细胞核 抗原(proliferating cell nuclearantigen,PCNA)和肿瘤抑制基因p53与涎腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)患者预后之间的关系进行了研究。通过对50例SACC的MT、PCNA与p53免疫组织化学反应及临床资料分析,结果表明:MT的表达与SACC患者生存率明显相关(P<0.05),它能在一定程度上判断SACC患者的预后情况;PCNA是评价细胞增殖状态的指标,PCNA的表达与SACC远处转移存在明显相关(P<0.05),肿瘤细胞增殖能促进SACC的远处转移;p53基因在SACC的发生发展过程中的作用不明显,可能存在其它某种或多种基因发挥更重要的作用。

影响涎腺腺样囊性癌预后因素的探讨

目的：研究５０例涎腺腺样囊性癌（ｓａｌｉｖａｒｙａｄｅｎｏｉｄｃｙｓｔｉｃｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＳＡＣＣ）患者的肿瘤部位、临床分期、组织学分型及肿瘤转移抑制基因ｎｍ２３、组织蛋白酶Ｄ（Ｃａｔｈｅｐｓｉｎ－Ｄ，Ｃａｔｈ－Ｄ）、金属硫因蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）、增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）、肿瘤抑制基因ｐ５３的关系。方法：用免疫组织化学反应进行多因素分析，探讨它们与局部复发、远处转移和生存率的关系。结果：影响ＳＡＣＣ局部复发的因素太多，以上各指标均不能独立判断ＳＡＣＣ的局部复发情况；ｎｍ２３和Ｃａｔｈ－Ｄ与ＳＡＣＣ远处转移有明显相关性（Ｐ＜０．０５），表明ｎｍ２３和Ｃａｔｈ－Ｄ在ＳＡＣＣ远处转移中具有重要作用，是预测ＳＡＣＣ远处转移的两项独立指标；临床分期与ＳＡＣＣ患者的生存率有明显相关性（Ｐ＜０．０５）。结论：临床分期可作为一项独立作用的指标来评价ＳＡＣＣ患者的预后。

颞下颌关节急性钝挫伤的动物实验研究

目的观察一侧下颌骨遭撞击所形成的颞下颌关节急性钝挫伤不同时间的病理改变。方法实验动物为日本成年大耳白兔18只,将其中15只随机分成A、B、C、D、E5组,每组3只,另3只作为正常对照。用自行设计的撞击装置,撞击每只兔的右侧下颌角,按顺序分别在致伤后24小时、1周、2周、1月、2月处死A、B、C、D、E组动物,取双侧关节标本,常规制作病理组织切片,HE染色,光镜下观察。正常对照组3只动物不作任何处理,处死后,取双侧关节标本,其余步骤同上。结果创伤后24小时可发现撞击侧关节软骨撕裂,关节腔内积血。创伤后1周关节组织呈现破坏征。其后逐渐发生组织修复过程。对侧关节也出现不同程度的创伤后改变。结论一侧下颌骨撞击伤可导致双侧颞下颌关节钝挫伤,但以受打击侧关节损伤较重;急性钝挫伤可引起关节软骨撕裂、关节腔内积血等病变,后期可发生关节组织的修复反应。

低细胞密度状态下的人骨髓间质干细胞成骨能力研究

目的 研究低密度人骨髓间质干细胞(Humanbonemarrow -derivedmesenchymalstemcells,hMSCs)体内成骨能力及影响因素。方法 从人髂骨骨髓分离培养hMSCs。以不同细胞密度与块状和颗粒型磷酸钙陶瓷(HA/TCP)载体混合,移植于裸小鼠体内,分别观察2和3个月,组织学评价研究hMSCs异体体内成骨的最小细胞密度。按3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体的比例混合细胞与载体(HA/TCP和鼠尾胶原包被的HA/TCP) ,体外共培养一周后移植裸鼠皮下,3个月后,组织学评价细胞载体体系体外培养和胶原包被载体对hMSCs体内成骨能力的影响。结果 只有以3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体在体内移植3个月后可观察到在块状和颗粒HA/TCP表面有骨组织生成。用鼠尾胶原包被的颗粒HA/TCP和细胞与载体体外共培养并无明显促进骨组织生成作用。结论 保证hMSCs异体成骨的最小细胞密度为3.3×1 0 6个细胞/cm3 载体。在低密度hMSCs状态下,鼠尾胶原和细胞与载体体外共培养并不能提高hMSCs的成骨能力。

丹参对鼠齿槽骨破骨活动的影响

作者对4只受正畸力作用的S.D.大鼠上第一磨牙的局部粘膜下注射丹参注射液,在显微镜下作破骨细胞计数。发现局部注射丹参注射液侧破骨细胞数目明显较对照侧增多,其结果有统计学意义。且增多的破骨细胞常围绕在牙周膜内血管周围。推测丹参作为活血化瘀药物,有助于恢复由于正畸力所致的局部牙周膜内血液循环障碍,从而有利于破骨细胞随血流向齿槽骨组织的迁移。

多生牙与正常牙的组织形态学对比

目的 观察多生牙与正常牙组织学结构异同。方法 选择 32颗多生牙 ,在光镜下观察其切片及磨片的组织学结构并与正常牙对照。结果 切片观察多生牙见较多的球间牙本质 ,与成年牙比较钙化球不明显 ,牙髓组织与正常牙髓基本一致 ;磨片见釉质生长线、釉板常不明显 ,透光性低 ,童氏粒层无或少。未见典型细胞性牙骨质。结论 多生牙组织学形态基本正常 。

人骨髓间质干细胞的培养及成骨功能研究

目的 体外扩增人骨髓间质干细胞 (humanbonemarrow derivedmesonchymalstemcells,hBMMSCs) ,研究其生物学特征及体内、外成骨功能。方法 分离培养hBMMSCs,并对其形态、增殖动力学、碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase,ALP)表达及体内、外成骨功能进行研究。结果 hBMMSCs可在体外培养扩增 ,群体倍增时间约为 3 5d。ALP检测表明 ,未经矿化诱导的hBMMSCs可表达少量ALP ,诱导后其表达量明显增高。vonkossa染色证实在矿化诱导液作用下hBMMSCs在体外可形成钙结节。体内成骨实验证实 ,1× 10 5个hBMMSCs接种到 30mm3 块状HA/TCP载体移植BALB/C裸小鼠皮下 3个月 ,可观察到层板状骨组织生成。结论 hBMMSCs是一种具有成骨潜能的前体细胞 ,经培养、扩增、诱导后 ,在体外可形成矿化结节 ,体内可在载体表面形成骨组织。