胰腺癌18号染色体和20号染色体的不稳定性

目的检测胰腺癌细胞系基因组中18号染色体和20号染色体数目及结构的变化,探讨胰腺癌细胞染色体不稳定性的规律。方法选择18号染色体和20号染色体的染色体涂染(chromosome painting)探针,用与我院实验室自建的中国人胰腺癌细胞系PC-1、PC-2、PC-4、PC-7和来源于ATCC的人胰腺癌细胞系PANC-1、ASPC-1、Miapaca、BXPC-3共8株细胞系进行双色荧光原位杂交,分析胰腺癌细胞基因组中18号染色体和20号染色体发生非整倍体的特点。结果在8株胰腺癌细胞系中7株细胞系18号染色体为二倍体,1株为四倍体,2株有18号染色体长臂部分丢失,另有2株18号染色体与其他染色体发生重组:有3株细胞系20号染色体出现三倍体,其中2株同时有20号染色体重组发生,有3株细胞系20号染色体出现四倍体,其中1株伴有重组。结论中国人胰腺癌细胞18号染色体长臂部分丢失,并有18号染色体与其他染色体的重组发生;20号染色体扩增和重组是高频发生事件,这些染色体的非整倍体与胰腺癌发生可能有着密切的关系。

人卵巢浆液性及黏液性交界性肿瘤中k-ras基因第12、13密码子突变分析

目的探讨k_ras基因在卵巢浆液性及黏液性交界性肿瘤发病过程中的作用。方法选用k-ras基因高频突变区引物1对,对53例卵巢肿瘤(包括15例浆液性典型交界瘤、7例浆液性微乳头型交界瘤、14例浆液性经典型癌1、4例黏液性交界瘤3、例黏液性癌)用显微切割方法提取肿瘤细胞DNA,进行聚合酶链反应(PCR),直接测序分析PCR产物。结果在14例黏液性交界瘤中有3例检测到了k-ras基因突变,在黏液性癌及所有浆液性肿瘤中均未发现k-ras基因突变。结论k-ras基因突变在卵巢黏液性交界瘤的发生过程中可能有一定作用,在黏液性癌、浆液性交界瘤及经典型癌中的作用尚不明确。

中国人胰腺癌细胞系的染色体特征

目的分析中国人胰腺癌细胞系的细胞遗传学特征。方法对本实验室建立的中国人胰腺癌细胞系PC1、PC2、PC3、PC4和PC7进行染色体分析,并采用3号、13号、18号、20号染色体涂染探针验证染色体G显带核型分析结果。结果5株胰腺癌细胞系均为以亚三倍体为主的核型;染色体众数目分别为PC1:58,PC2:56,PC3:61,PC4:53,PC7:54;各细胞系中可见不同比例的双着丝粒染色体、双微体、环状染色体、无着丝粒染色体片段或复杂易位等多种畸变。结论胰腺癌细胞系的染色体为亚三倍体,而且存在着复杂的染色体数目和结构畸变。若要准确识别染色体异常,还需结合其他分子细胞遗传学技术。

中国人群胰腺癌与胃癌HER2/neu基因表达

目的探讨胰腺癌与胃癌组织中HER2/neu基因表达状态及其在治疗与评估临床结局中的作用。方法应用免疫组织化学和多色荧光原位杂交技术,检测北京协和医院手术切除的81例胰腺导管癌及癌旁胰腺组织和100例胃癌及癌旁胃组织标本中HER2/neu蛋白表达及基因状态的变化,分析HER2/neu蛋白表达与基因状态间的关系及其与胰腺癌和胃癌临床病理改变间的关系。结果免疫组织化学显示,81例胰腺癌组织中9例(11.1%)HER2/neu蛋白表达阳性(2+及3+),100例胃癌组织中13例(13%)HER2/neu蛋白表达阳性(2+及3+);荧光原位杂交结果显示,81例胰腺癌组织中15例(18.5%)HER2/neu基因扩增,100例胃癌组织中11例(11%)HER2/neu基因扩增。胰腺癌HER2/neu基因扩增与淋巴结转移有显著相关性(P=0.001)。胃癌组织中6例HER2/neu蛋白3+病例均显示HER2/neu基因扩增,且胃癌组织HER2/neu蛋白表达与其基因扩增有显著相关性(P<0.0001)。无论是癌旁胰腺组织还是癌旁胃组织均未检测到HER2/neu蛋白表达及基因扩增。结论胰腺癌组织HER2/neu蛋白表达与基因扩增不一致,而胃癌组织HER2/neu蛋白表达与基因扩增有显著相关性。HER2/neu基因异常可能在胰腺癌及胃癌的发生发展中起着重要作用,对胰腺癌及胃癌患者进行HER2/neu基因状态检测可能对其靶向治疗具有一定的指导意义。

肾上腺嗜酸细胞型皮质癌的临床病理特征及表皮生长因子受体基因状态

目的探讨肾上腺嗜酸细胞型皮质癌临床病理特征及其表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）蛋白表达、基因突变和基因拷贝数改变情况。方法回顾性分析2000年1月至2009年12月在北京协和医院手术切除的9例肾上腺嗜酸细胞型皮质癌的临床特点、组织形态学特征,并以9例肾上腺嗜酸细胞型皮质腺瘤为对照,应用免疫组织化学、Scorpion ARMS突变系统及荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）的方法分析EGFR在二者中的蛋白表达、基因突变和基因拷贝数改变的情况。结果 9例肾上腺嗜酸细胞型皮质癌中,Cushing综合征2例,无功能性皮质癌7例。病例随访时间6~56个月,皮质癌患者失访2例,死亡6例。肾上腺嗜酸细胞型皮质癌中EGFR蛋白过表达率为77.8%（7/9）,EGFR FISH阳性率为55.6%（5/9）;仅有22.2%（2/9）皮质腺瘤存在EGFR蛋白的表达,且EGFR FISH均为阴性。肾上腺嗜酸细胞型皮质腺瘤及皮质癌中均未检测出EGFR基因扩增及基因突变。结论肾上腺嗜酸细胞型皮质癌非常罕见,其诊断依据病理学及免疫表型,EGFR蛋白过表达和7号染色体的高多体性较腺瘤更常见,可能有助于与后者的鉴别诊断,也有可能成为今后临床分子靶向治疗的潜在方向。

乳腺腺样囊性癌的病理观察

腺样囊性癌是涎腺最常见的恶性肿瘤之一,也可发生于全身多个部位,如子宫、外阴、乳腺等。乳腺腺样囊性癌（breast adenoid cystic carcinoma,BACC）是浸润性乳腺癌的一种特殊亚型,相对罕见,占乳腺恶性肿瘤的比例不足0.1%。

石蜡包埋模具收纳清洁一体化装置设计与应用评价

目的:设计一种用于石蜡包埋的模具收纳清洁一体化装置,并评价其实际应用效果。方法:选取医院病理科同型号的400个包埋模具,采用随机数表法将其分为观察组和对照组,每组200个模具。观察组采用模具收纳清洁一体化装置收纳和清洁模具残蜡,对照组采用模具无序存放和集中脱水机清洁模具残蜡。200个模具依次使用完为1个包埋周期,连续3个包埋周期后,比较两组模具石蜡残留率、蜡块形状标准率和石蜡总包埋用时。结果:两组各200个模具经3个包埋周期后,观察组模具石蜡残留率为5%(30/600),明显低于对照组的52.5%(315/600),差异有统计学意义(x^(2)=123.754,P<0.05);观察组蜡块形状标准率为100%(600/600),明显高于对照组的67.5%(405/600),差异有统计学意义(x^(2)=102.801,P<0.05);观察组3个包埋周期平均用时为(51.3±3.5)min,明显少于对照组的(66.3±4.5)min。结论:石蜡包埋用模具收纳清洁一体化装置能够有效清除模具内外残留石蜡,优化模具清洁流程,且具有便捷性、可操作性和安全性,制作出的蜡块形状标准,利于后续切片,实际应用效果良好。

小细胞肺癌NTRK基因融合/变异检测分析

目的 探讨肺小细胞癌(small cell lung cancer, SCLC)中神经营养因子受体酪氨酸激酶(NTRK)的基因融合及基因变异情况。方法 回顾性收集北京协和医院2008—2021年间SCLC病例组织标本58例,并收集相应临床病理资料;采用免疫组化(immunohistochemistry, IHC)染色方法检测NTRK融合蛋白表达情况,对经IHC染色鉴定为NTRK阳性的病例,进一步采用荧光原位杂交(FISH)方法进行验证。此外,通过包含638基因的靶向测序检测58例标本的NTRK突变及融合变异。结果 本研究中共纳入58例SCLC病例。IHC检测结果提示6例(10.3%)样本NTRK阳性表达,但FISH及靶向测序检均未在此队列中发现NTRK融合基因;靶向测序结果提示11例样本(11/58,19.0%)检出12个NTRK突变,其中1例样本为NTRK1与NTRK3共突变,其余为单一NTRK突变,NTRK3突变6例(10.3%)、NTRK1突变3例(5.1%)、NTRK2突变1例(1.7%);2例伴有NTRK突变病例为IHC阳性表达。结论 本组SCLC缺乏NTRK基因融合,NTRK基因突变率为19%,通过IHC检测方法在SCLC中筛查NTRK融合蛋白表达具有较高的假阳性率,需要采用其他检测平台进行复验。

石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5／6、7、9、10外显子基因改变的检测

目的研究石蜡包埋胰腺癌组织中DPC4第5／6、7、9、10外显子基因的改变。方法用聚合酶链反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP)银染技术检测46例石蜡包埋胰腺癌组织及癌旁正常胰腺组织中DPC4基因的缺失和突变。结果 5例胰腺癌未扩增出DPC4条带,DPC4基因第75／6、7、9、10外显子的纯合性缺失率为10．9％(5／46)；1例胰腺癌可见异常泳动带,基因突变率为2．2％(1／46)。结合以前实验,DPC4基因所有外显子的纯合性缺失率为39．1％(18／46),基因突变率为23．9％(11／46),总改变率为58．7％(27／46)。27例有基因改变的胰腺癌除1例外均为中、低分化腺癌,中、低分化组与高分化组之间的差异有显著性(P<0．01)。结论 DPC4作为一种抑癌基因,其改变在胰腺癌的形成中可能起重要的作用。DPC4基因改变与胰腺癌细胞分化程度密切相关。

乳腺癌HER2与IGF-IR和PTEN表达的相关性

目的探讨中国人乳腺癌中HER2与IGF-IR和PTEN之间的相关性。方法分别在65例HER2(+)和108例HER2(-)的乳腺浸润性导管癌中,用免疫组化EnVision法检测IGF-IR和PTEN蛋白的表达。结果 HER2(+)组中,IGF-IR和PTEN阳性率分别为78.5%(51/65)和52.3%(34/65);HER2(-)组中,IGF-IR和PTEN阳性率分别为71.3%(77/108)和68.5%(74/108)。阳性组IGF-IR过表达率高于阴性组,但差异不显著(P>0.05);阳性组PTEN表达低于HER2阴性组,差异显著(P<0.05)。HER2阳性和阴性组中,IGF-IR过表达与各临床病理参数间均无相关性(P>0.05);但阳性组中,IGF-IR高表达与淋巴结转移密切相关(P<0.05)。对全部乳腺癌标本分析显示,PTEN表达与癌的组织学分级和淋巴结转移呈负相关(P<0.05),与ER表达呈正相关(P<0.05),与其他临床指标间无相关性(P>0.05)。PTEN表达与IGF-IR和HER2表达呈负相关(P<0.05)。结论 PTEN表达丢失与乳腺癌进展密切相关;HER2阳性的乳腺癌中常见PTEN蛋白表达丢失,且IGF-IR可能参与促进了癌细胞的转移过程。PTEN蛋白缺失与IGF-IR蛋白过表达均与乳腺癌进展相关联,其分子机制和相关意义有待于进一步研究。

卵巢癌分型及其分子遗传学研究进展

卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一,如何正确认识这类肿瘤一直备受关注。多年的病理形态学观察和临床病理资料积累,提示其各组织学亚型的生物学行为和发生、发展规律是有差异的。近年分子遗传学技术的应用为更客观的认识、诊断这类肿瘤和进一步指导患者的临床治疗、估价预后提供了新的研究方法和途径。本文对卵巢癌及其不同组织学亚型分子遗传学改变的研究进展进行综述。

2019-2020年中国病理科人员、设备、工作量的调研报告

为掌握近年来中国医院病理科发展现状,由国家病理质控中心管理组牵头对31个省(自治区、直辖市)的1859家单位病理科进行了包括人员配置、硬件设施、科室工作量、新技术使用情况在内的综合调查。本文旨在对中国医院病理科发展现状做一总结,以期为中国病理科的学科建设、人才培养和发展创新以及疫情常态化管理下的中国病理科的应对提供新思考。

HER2免疫组织化学结果为0的乳腺癌HER2 mRNA定量分析

目的探讨HER2免疫组织化学(IHC)检测结果为0乳腺癌患者HER2 mRNA的表达特征,初步分析以HER2基因表达水平分层乳腺癌HER2超低表达和HER2无表达(IHC无染色)的可行性。方法收集北京协和医院2020年1月至2023年3月手术的甲醛固定石蜡包埋的浸润性乳腺癌组织标本41例,包括21例HER2 IHC 1+和20例HER2 IHC 0(HER2超低表达12例,HER2无表达8例)。采用数字PCR方法,以荧光FAM(HER2)/VIC(内参基因)比值计算HER2 mRNA水平。结果HER2 IHC 1+、HER2超低表达及HER2无表达的HER2 mRNA表达分别为0.30~1.78(平均0.90,中位0.82)、0.55~1.51(平均0.93,中位0.90)及0.22~0.78(平均0.41,中位0.36)。每组HER2 mRNA表达的平均值和中位值,HER2 IHC 1+和HER2超低表达之间差异无统计学意义(P=0.757);HER2 IHC 1+与HER2无表达及HER2超低表达与HER2无表达之间差异有统计学意义(分别P=0.002,P=0.001)。结论根据HER2 mRNA水平,HER2无表达与HER2弱表达(HER21+和HER2超低表达)属于两组不同的肿瘤;而HER21+和HER2超低表达可能是同一组肿瘤。有必要进一步验证以HER2 mRNA精细分层HER2弱表达的能力及确定阈值。

HER2免疫组织化学结果不确定的乳腺癌原位mRNA表达特征

目的了解HER2免疫组织化学结果不确定的乳腺癌荧光原位杂交（FISH）阳性和阴性两组患者的原位mRNA表达特征，探索mRNA原位杂交（RNAscope）用于乳腺癌组织HER2检测的潜在可行性。方法收集北京协和医院2010年6月至2013年6月问手术获得的69例乳腺浸润性导管癌组织HER2免疫组织化学结果不确定（IHC2＋）的石蜡标本，并制作组织芯片，分别采用FISH和RNAscope技术检测其HER2基因状态和原位mRNA表达，计数100个癌细胞，按mRNA表达量从低到高的5个等级（0、1、2、3、4分）判读mRNA结果。分析FISH阳性和阴性两组患者HER2mRNA的表达特征。结果在69例标本中，FISH阳性共23例，其中RNAscope16例（70％，16／23）4分、6例（26％，6／23）3分、1例（4％，1／23）2分。96％的HER2FISH阳性标本为原位mRNA高表达（RNAscope≥3分），RNAscope4分的标本全部为FISH阳性。在FISH阴性的46例标本中，RNAscope17例（37％，17／46）3分、25例（54％，25／46）2分、4例（9％，4／46）1分。结论根据原位mRNA表达结果，可将IHC2＋乳腺癌病例进一步分类，其中以RNAscope4分为mRNA高表达的判读标准可能成为确认IHC2＋结果的检测技术。HER2原位mRNA检测可作为提示乳腺癌HER2基因扩增和蛋白质表达的候选检测手段，具有潜在的临床应用价值。

光谱染色体核型分析技术在胰腺癌研究中的应用

胰腺癌发病隐匿，仅20％左右的患者有手术机会，5年生存率不足5％，且发病率呈逐年上升趋势。寻找并确定可用于早期诊断的遗传学标记，是有效治疗胰腺癌的重要前提之一。经研究发现，除了基因水平上的改变以外，遗传的不稳定性是癌症发生的又一条重要通路。其中染色体不稳定性出现于癌症早期，

石蜡切片原位mRNA表达检测技术的应用初探

在实验操作层面上，利用石蜡标本进行肿瘤生物标志物检测的常规技术包括2类：一类不保留组织和细胞结构，如DNA或mRNA提取后进行的突变或表达检测；另一类保留组织和细胞形态，如基于石蜡切片的免疫组织化学（IHC）或荧光原位杂交（FISH）技术分别检测蛋白过表达和基因扩增及重排等。从检测内容层面上来讲，

激素受体阳性/HER2阴性女性乳腺癌PIK3CA基因突变特征分析

目的探讨激素受体阳性/HER2阴性浸润性乳腺癌PIK3CA基因突变谱, 为筛选潜在获益于靶向PI3K亚基特异性抑制剂的中国目标人群和制定检测策略提供参考。方法收集2017年1月至10月存档于北京协和医院的乳腺癌手术标本365例, 从中选取186例激素受体阳性/HER2阴性浸润性乳腺癌, 以二代测序技术检测其PIK3CA基因突变, 对比分析与已有报道变异类型之间的差异。结果从186例激素受体阳性/HER2阴性乳腺癌中检出PIK3CA基因突变40例(21.5%, 40/186)。其中位于第9号外显子和第20号外显子的突变占92.5%(37/40), 包括E545K、E545G、Q546K、E542K、Q546R、P539R、E547D、H1047R、H1047L、H1047Q和N1044Y, 仅有1例标本含有第7号外显子的C420R突变。另外, 还发现2例涉及第1号外显子和第5号外显子罕见位点突变的标本, 突变分别是F83C和G364R。研究共发现18种变异, 根据数据, 以伴随诊断方法可检出含已知突变的标本占比为85.0%(34/40)。在队列中, 25.0%(10/40)的患者同时具有2种或3种突变, 涉及的位点包括E726K/N345K、H1047Q/N345K、H1047R/G364R、H1047R/E453K、E545G/E726K、E542K/E726K、E542K/H1047R、E545K/H1047R/H1047L和E545K/E547D。PIK3CA突变型患者的淋巴结转移发生率明显高于PIK3CA野生型患者(P<0.05)。结论标本中除了常见位点占PIK3CA基因突变的绝大多数外, 还有新的罕见位点突变, 其临床意义尚待扩大样本量、开展多中心及临床疗效相关性等研究以进一步确认。

荧光原位杂交检测乳腺癌HER2基因状态

目的探讨荧光原位杂交(FISH),与免疫组织化学(IHC)染色(3+)和(2+)检测HER2基因状态的结果的一致性、导致两者差异的可能原因及FISH检测HER2基因状态的必要性和可行性。方法采用PathVysionTM探针试剂盒,以FISH方法,对28例IHCEnVision法染色分别为(3+)、(2+)、(1+)和阴性(-)的乳腺癌石蜡切片标本进行HER2基因状态的检测。结果HER2表达(3+)的12例标本中,10例HER2基因扩增,其中2例为17号染色体多体,另2例无扩增的病例均为多体;IHC为(2+)的10例标本中,7例为HER2基因扩增,其中1例为多体,另3例无扩增病例中2例为多体;IHC为(1+)的3例标本均无HER2基因扩增,其中1例为多体;IHC(-)的3例标本均无基因扩增,其中1例为多体。结论IHC是初步筛查HER2状态的首选方法;因IHC(2+)与FISH检测结果差异较大,所以这类患者应做FISH确诊;IHC(3+)存在假阳性,主要原因可能是由于17号染色体非整倍体,必要时这类患者也应做FISH。

乳腺癌HER2蛋白表达阳性者的基因状态分析

目的探索中国大陆女性乳腺癌 HER2蛋白过表达人群中 HER2基因状态、蛋白表达与基因扩增的一致性、17号染色体非整体性的发生情况及其意义。方法采用 PathVysion^(TM)探针试剂盒,以荧光原位杂交(FISH)方法,分析经免疫组织化学(IHC)方法(HercepTest^(TM)试剂盒)确认的120例 HER2蛋白表达阳性(IHC 2+者42例,IHC 3+者78例)的乳腺癌石蜡切片标本的 HER2基因状态和17号染色体非整体性的发生率。结果 HER2表达 IHC 2+的标本中,基因扩增率76.19%(32/42),其中低度扩增(比值2～4)26.19%(11/42),中度扩增(比值4～10)41.62%(20/42),高度扩增(比值>10)2.38%(1/42);IHC 3+的标本中,基因扩增率91.03%(71/78),其中低度扩增11.54%(9/78),中度扩增61.54%(48/78),高度扩增17.95%(14/78)。全部病例中具有17号染色体非整体性者69.17%(83/120),包括亚二体性(17号染色体平均数≤1.75)11.67%(14/120)、低多体性(17号染色体平均数2.26～3.75)43.33%(52/120)和高多体性(17号染色体平均数≥3.76)14.17%(17/120)。IHC 2+病例中17号染色体非整体性59.52%(25/42),包括亚二体性7.14%(3/42)、低多体性42.86%(18/42)和高多体性9.52%(4/42);IHC 3+病例中17号染色体非整体性74.36%(58/78),包括亚二体性14.10%(11/78)、低多体性43.59%(34/78)和高多体性16.67%(13/78)。IHC 2+者 FISH 阳性以 HER2基因中、低度扩增为主,而 IHC 3+者则呈中、高度基因扩增的趋势,两者差异有统计学意义(P=0.0003)。IHC 3+中,7例 FISH 阴性中6例有17号染色体非整体性;IHC 2+中,10例 FISH 阴性中5例有17号染色体非整体性。结论在本组中国大陆女性乳腺癌人群中,IHC 3+与 FISH 阳性的一致性较高;IHC 2+者 FISH 阳性率高于国外研究者的数据;HER2蛋白阳性乳腺癌中17号染色体非整体性发生比例较高;IHC 2+和3+者都具亚二体性、低多体性和高多体性特征,且两者均以低多体性为常见;IHC 2+者的 HER2基因扩增多为中、低度扩增,而 IHC3+中 FISH 阳性者则以高比值者居多。IHC 3+而 FISH 阴性的主要原因为17号染色体非整体性。

胰岛素瘤频发MEN-1抑癌基因及22q的杂合缺失及其意义

目的 探讨胰岛素瘤发病的可能机制 ,寻找鉴别胰岛素瘤良恶性的分子遗传学指标。方法 4 0个胰岛素瘤肿瘤标本 (8个恶性 ,32个良性 )经显微切割获取肿瘤组织和正常对照组织 ,并提取相应的基因组DNA。用聚合酶链反应 (PCR)检测MEN 1基因以及 2 2号染色体长臂 (2 2q)的杂合缺失 (LOH)。结果 4 0 0 %的肿瘤发生MEN 1的LOH ,75 0 %的肿瘤发生 2 2q的LOH。2 2q12 (D2 2S 92 9与D2 2S 2 80之间 )和 2 2q13 3是LOH的 2个频发区域 ,分别占 30个 2 2qLOH的 37 0 % (11/ 30 )和4 7 0 % (14 / 30 )。在D2 2S 2 80位点 ,有 8个肿瘤标本发生D2 2S 2 80LOH ,但无一例发生MEN 1LOH ,而无D2 2S2 80LOH的 30个肿瘤标本中 ,有 14个发生MEN 1LOH(47 0 % ) (P =0 0 16 )。在第 2个频发区中 ,14个发生LOH的肿瘤有 6个 (43 0 % )为恶性 ,2 6个无LOH肿瘤中有 2个 (8 0 % )为恶性(P =0 0 0 88)。结论 在D2 2S 2 80位点上发生LOH可能是一个与MEN 1基因无关的独立的胰岛素瘤致病因素。发生 2 2q13 3LOH可能与肿瘤恶性相关。