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靶向人表皮生长因子受体3的人源Fab抗体构建及鉴定
1
作者
张晶
刘玉杰
+5 位作者
万德有
刘蕴慧
王芳
武逸熏
付洁
宋海峰
《生物技术通讯》
CAS
2015年第5期595-599,共5页
目的:制备靶向人表皮生长因子受体3(HER3)的全人源Fab型抗体,并对其亲和力及生物学活性进行鉴定。方法:用Bsp QⅠ限制性内切酶分别将靶向HER3的全人源抗体的完整轻链、重链的可变区全长和CH1恒定区插入载体p3457,构建重组质粒;通过将轻...
目的:制备靶向人表皮生长因子受体3(HER3)的全人源Fab型抗体,并对其亲和力及生物学活性进行鉴定。方法:用Bsp QⅠ限制性内切酶分别将靶向HER3的全人源抗体的完整轻链、重链的可变区全长和CH1恒定区插入载体p3457,构建重组质粒;通过将轻、重链质粒瞬时共转染293E悬浮细胞进行表达,并利用镍柱纯化得到Fab型抗体蛋白;采用ELISA鉴定其与HER3胞外区是否结合,Forte Bio实验鉴定其亲和力,CCK8检测其对MDA-MB-453细胞增殖能力的影响。结果:分别获得表达轻链全长、重链可变区全长及CH1恒定区的HER3抗体重组质粒,并通过瞬时共转染293E悬浮细胞获得分泌型HER3 Fab抗体;ELISA实验证明其可与HER3胞外区蛋白直接结合;Forte Bio实验证明Fab型抗体与人源HER3胞外区蛋白具有一定的亲和力(KD=1.08×10-8mol/L);体外增殖实验表明,该抗体可显著抑制MDA-MB-453体外增殖。结论:通过293E悬浮细胞表达、镍柱亲和纯化,获得具有较高亲和力和功能活性的HER3 Fab型抗体,为HER3高表达型癌症的诊断、治疗提供物质基础。
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关键词
人表皮生长因子受体3
FAB抗体
亲和力
293E细胞
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题名
靶向人表皮生长因子受体3的人源Fab抗体构建及鉴定
1
作者
张晶
刘玉杰
万德有
刘蕴慧
王芳
武逸熏
付洁
宋海峰
机构
军事医学科学院放射与辐射医学研究所
广西医科大学
出处
《生物技术通讯》
CAS
2015年第5期595-599,共5页
基金
国家"十三五"重大专项定向委托课题(2015ZX09501008)
文摘
目的:制备靶向人表皮生长因子受体3(HER3)的全人源Fab型抗体,并对其亲和力及生物学活性进行鉴定。方法:用Bsp QⅠ限制性内切酶分别将靶向HER3的全人源抗体的完整轻链、重链的可变区全长和CH1恒定区插入载体p3457,构建重组质粒;通过将轻、重链质粒瞬时共转染293E悬浮细胞进行表达,并利用镍柱纯化得到Fab型抗体蛋白;采用ELISA鉴定其与HER3胞外区是否结合,Forte Bio实验鉴定其亲和力,CCK8检测其对MDA-MB-453细胞增殖能力的影响。结果:分别获得表达轻链全长、重链可变区全长及CH1恒定区的HER3抗体重组质粒,并通过瞬时共转染293E悬浮细胞获得分泌型HER3 Fab抗体;ELISA实验证明其可与HER3胞外区蛋白直接结合;Forte Bio实验证明Fab型抗体与人源HER3胞外区蛋白具有一定的亲和力(KD=1.08×10-8mol/L);体外增殖实验表明,该抗体可显著抑制MDA-MB-453体外增殖。结论:通过293E悬浮细胞表达、镍柱亲和纯化,获得具有较高亲和力和功能活性的HER3 Fab型抗体,为HER3高表达型癌症的诊断、治疗提供物质基础。
关键词
人表皮生长因子受体3
FAB抗体
亲和力
293E细胞
Keywords
human epidermal growth factor receptor 3
Fab antibody
affnity
293E cells
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
R392.1 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
靶向人表皮生长因子受体3的人源Fab抗体构建及鉴定
张晶
刘玉杰
万德有
刘蕴慧
王芳
武逸熏
付洁
宋海峰
《生物技术通讯》
CAS
2015
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