索拉非尼基于Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路介导细胞自噬在肝细胞癌中产生耐药机制研究进展

肝细胞癌(HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一,它的形成是一个复杂的过程,其具体形成机制尚不明确,由于大多数HCC患者被诊断出来时已是晚期,通常已丧失良好的手术时机。而靶向药物的出现给当前HCC患者带来了新的希望,同时还可作为术后治疗措施,在HCC中发挥着巨大的作用。索拉非尼是第一个被用于治疗HCC的靶向药物,它可抑制肝肿瘤组织血管生成和细胞增殖,可诱导肝肿瘤细胞凋亡,进而提高部分肝癌患者的生存率。但据目前研究显示,有50%~60%HCC经治患者对该药物出现了敏感性下降。主要是由于索拉非尼使用后会抑制体内相关信号通路,从而致使耐药的发生,故进一步探索索拉非尼耐药机制,使其逆转索拉非尼耐药对于改善肝癌治疗的预后具有极其重要的临床价值。近些年来,许多学者致力研究索拉非尼通过Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路介导细胞自噬与耐药性的产生有着密切联系。并探讨其耐药分子机制,使该领域获得了巨大的发展。因此,本篇文章主要从Hippo/YAP及PI3K/Akt/mTOR信号通路展开,探讨其与细胞自噬之间的关系以及介导的耐药机制,为索拉非尼治疗肝癌产生耐药性提供可靠的科学理论依据。

经皮置管冲洗引流治疗感染性胰周坏死

目的探讨感染性胰周坏死采用经皮穿刺置管配合冲洗引流治疗的临床疗效。方法2018年1月~2022年6月收治的感染性胰周坏死10例,采用穿刺置管冲洗引流治疗,记录病人引流时间、恢复情况及并发症发生情况。结果9例经穿刺冲洗引流处理后均痊愈,1例穿刺置管冲洗引流治疗失败行开腹清创术后治愈,住院平均冲洗引流时间32天,无并发症发生,治愈后未再复发。结论经皮穿刺逐级置换冲洗引流具有微创、效果明确等特点,可考虑单独用于部分病人感染性胰周坏死的治疗,值得推广。

m6A修饰的circRNA在肝细胞癌中的研究进展

N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)是一种可逆的表观遗传修饰,是真核细胞中最丰富的修饰物之一,在信使RNA和非编码RNA中被普遍报道。m6A修饰可调节RNA的转录、加工、剪接、降解和翻译等,在肿瘤生物学行为中发挥重要作用。缺乏5’帽子结构的circ RNA(circular RNA)一直被误认为是转录过程中偶然剪切生成的“垃圾序列”,然而研究发现,circ RNA可以通过micro RNA、结合蛋白、翻译多肽和m6A修饰等多种方式参与肿瘤侵袭和转移。本文就m6A修饰在circ RNA调控作用及其在肝细胞癌中的功能作一综述,并讨论其在该领域的潜在临床应用和可能的未来发展方向。

肝癌中环状RNA的表达模式及其编码潜能的研究

目的:环状RNA作为一类特殊的非编码RNA,近些年多有报道其可以通过编码多肽的方式参与多种恶性肿瘤的演变和进展,然而其在肝癌中的研究是有限的。本研究基于RNA-seq结合在线数据库,探讨肝癌中环状RNA的表达模式并评估其编码潜能。方法:应用Novaseq 6000 PE150高通量测序仪对3对肝癌与癌旁组织行circRNA测序。生物信息学分析寻找差异性表达的circRNA并行序列分析,应用GO、KEGG和Reactome分别进行功能、通路富集分析;联合在线数据库Transcirc和Ribocirc筛选可翻译的circRNA;应用IRES finder识别IRES元件;ORFfinder识别ORF序列;m6A SRAMP识别m6A位点序列;CPAT法评估编码潜能。qPCR检测上述寻找到的差异性表达circRNA表达情况。结果:本研究共发现了416个丰度相对可观的circRNA,包括35个上调和31个下调的circRNA(均P<0.05),序列分析提示这些基因多以小分子量(长度<1 000 nt)、外显子-外显子类型及(2-5)外显子个数构成为主。GO分析显示这些表达差异性的circRNA主要富集在GTP酶活性的调节(P<0.001)、小GTP酶介导的信号转导的调节(P<0.001)、GTP酶活性阳性调节(P<0.001)(生物学过程),核散斑(P=0.016)(细胞成分),GTP酶调节因子活性(P<0.001)、GTP酶激活因子活性(P<0.001)(分子功能)等;KEGG分析显示这些表达差异的circRNA主要富集在补体系统(P=0.002)、mRNA监测通路(P=0.003)和血小板激活(P=0.005)等;Reactome分析显示主要富集在RHO GTP酶周期(P=0.008)、RHOA GTP酶周期(P<0.001)和CDC42 GTP酶周期(P=0.001)等。进一步联合Transcirc和Ribocirc数据库交集获得17个circRNA,其中以hsa_circ_0000231、hsa_circ_0000417、 hsa_circ_0000745、 hsa_circ_0005455、 hsa_circ_0000847、 hsa_circ_0005552、 hsa_circ_0060849、hsa_circ_0008234、hsa_circ_0075796、hsa_circ_0001742及hsa_circ_0001686共11个基因编码潜能评分最显著且均大于0.9分。同时在10例肝癌和癌旁组织中qPCR验证提示:hsa_circ_0000231、hsa_circ_0000745、hsa_circ_0005552、和hsa_circ_0000847在肝癌组织中高表达,hsa_circ_0060849和hsa_circ_0008234呈低表达,差异具有意义(P<0.05)。结论:综合分析了肝癌中cicRNA的表达模式,发现了6个circRNA存在差异性表达且具有高的翻译潜能评分,值得进一步研究。

感染坏死性胰腺炎一例诊治分析

通过对1例感染坏死性胰腺炎(INP)患者的诊治过程进行记录与分析,并结合本中心的临床经验及对INP诊疗进展的文献综述,针对外科干预时机及策略进行讨论与总结。总结认为,对于INP的外科干预时机应尽量于4周后进行,而对于外科干预策略的决定应优先选择整体创伤较小的内镜或微创入路(腹腔镜或硬镜)清创,其次是开腹清创;但不应拘束于一种治疗模式,可结合自身条件在充分评估病情后进行升阶梯治疗。整体治疗策略应根据胰腺坏死性感染病灶的位置、累及范围、病程时期、患者一般情况等条件,由MDT团队制定个体化的治疗方案。

完全腹腔镜肝切除术在肝肿瘤治疗中的应用和评价

目的探讨完全腹腔镜肝切除术在肝肿瘤治疗中的安全性及临床效果。方法回顾性分析2010年12月至2012年9月期间在我科行完全腹腔镜下肝切除术的42例肝肿瘤的临床资料。结果 42例手术均获得成功,其中原发性肝癌35例、肝血管瘤5例,肝炎性假瘤2例。术式:左外叶切除(II,III段肿瘤)19例、左半肝切除(IVa,IVb段肿瘤)5例,V^VII段(V^VII段肿瘤)部分肝切除18例。手术时间30~290(90±30)min,术中出血30~1 000(350±80)mL,术后引流量为20~150(64±15)mL/d。术后引流管拔除时间2~5 d,下床活动时间术后第2~3天,2~3 d后胃肠道功能恢复,总住院时间5~12(8.5±1.7)d。未发生胆漏、大出血、气体栓塞等严重并发症,全组无死亡。随访35例肝细胞癌12个月以上,其中l例术后6个月、2例术后10个月出现肝内复发,其余均健在,均未见局部复发及腹壁戳孔种植性转移等。结论肝脏II、III、IVb、V^VII段的肿瘤行完全腹腔镜肝切除术是安全可行的,且短期随访效果良好,其他部位的肿瘤如遇操作困难可视情中转开腹。

HTPAP单体型与基因表达及肝细胞癌(HCC)预后的关系

目的拟通过分析不同HTPAP单体型与基因表达及肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)预后的关系,探讨HTPAP单体型对HCC术后复发及预后的影响。方法随机选取377例HCC样本,提取其中以AGCTAC、GCGGGT、AGCTGC和GCGGAT等4种主要HTPAP单体型组成的HCC RNA。绝对定量PCR检测HTPAP基因表达水平,免疫组化染色、RT-PCR和Western blot检测HTPAP蛋白表达水平,分析单体型与基因表达的关系。随机选取665例HCC样本并提取DNA,焦磷酸测序方法对6个单核苷酸多态性(singlenucleotide polymorphisms,SNPs)进行检测。单体型构建后,分析HTPAP单体型与HCC预后的关系。结果 377例HCC中有327例由上述4种主要单体型构成。基因表达分析提示,HCC中HTPAP在GCGGGT纯合子组和AGCTAC/GCGGGT杂合子组的表达低于AGCTAC/GCGGAT杂合子组、AGCTAC/AGCTGC杂合子组及AGCTAC纯合子组,但差异无统计学意义(P=0.062)。免疫组化染色发现GCGGGT纯/杂合子组HCC较其他单体型HCC的HTPAP表达显著降低(P=0.035)。Kaplan-Meier分析提示,GCGGGT纯/杂合子组HCC较其他单体型HCC术后易复发且预后差(P<0.001)。Cox风险比例模型发现GCGGGT单体型是HCC术后复发及预后差的独立相关因子。结论 HCC的不同HTPAP单体型在mRNA水平的表达差异无统计学意义,但在蛋白水平存在显著差异。GCGGGT单体型可作为HCC术后复发和预后差的预测指标。

单体型分析在肿瘤侯选基因研究中的应用

单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)是第3代分子遗传标志,由其构成遗传组合称为单体型。它决定基因的功能单位和人群遗传变异的内在特征。单体型的存在可以极大地减少疾病关联研究的工作量,以单个SNP为中心进行复杂性状疾病的易感基因研究常欠说服力,而利用相邻的SNP信息关联构成的单体型分析就越来越受到欢迎。目前多应用统计学方法进行单体型构建,常用来推断单体型的软件较多,各有优缺点,研究者需结合课题选择最佳方法。单体型分析在肿瘤候选基因中的应用目前主要在肿瘤发病的相关性研究方面,随着研究的深入和技术的进步,单体型分析被越来越多地应用于肿瘤候选基因的筛选与鉴定。对侯选基因进行单体型分析可为疾病的诊断及个体化治疗提供新的手段,并可能发现新的预后预测指标。

肝癌复发转移再切除治疗的疗效分析(附30例报告)

目的 :评价再手术在肝癌复发治疗中的地位。方法 :回顾分析 1 988年～ 1 999年 30例肝癌复发再手术切除的随访资料。结果 :首次手术后 1、2、3和 5年总生存率分别为 93 .3 %、73 .3 %、56 .7%和 36.7%。第一次再手术后 1、3和 5年生存率分别为 63 .3 %、2 3 .3 %和 1 3 .3 %。肺叶切除后 1、3和 5年生存率分别为 71 .4%、42 .9%和 2 8.6 %。结论 :肝癌复发病人再手术后的预后与复发时肿瘤大小、数目、类型相关 。

肿瘤抑制基因HTPAP单体型构建及其与肝癌转移潜能的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)患者肿瘤组织DNA的HTPAP基因单体型与肝癌转移潜能的关系。方法提取864例HCC手术样本DNA,应用焦磷酸测序行SNPs检测,并予单体型构建,分析其与肝癌转移潜能的关系。构建HTPAP启动子单体型pGL3质粒,并分别转染MHCC-97H、HepG2肝癌细胞和正常的肝Hela细胞,分析不同HTPAP启动子单体型对基因转录活性的影响。结果共发现6个SNPs位点[-1053A/G、+64G/C、+357C/G、+1648-/TAAG(无插入和插入TAAG等位基因分别以T/G示,后同)、+1838A/G、+3528C/T]。单体型构建发现HTPAP中共存在11个单体型,其中AGCTAC、GCGGGT、AGCTGC、GCGGAT四种单体型占94.75%。临床病理特征分析提示单体型GCGGGT与高转移潜能正相关(P=0.0003)。启动子序列中两个SNPs(-1053AG和+64GC)存在完全LD,故只有三种启动子单体型(-1053AA/+64GG、-1053AG/+64GC GC和-1053GG/+64CC);双荧光报告法发现三种单体型的HTPAP启动子都具有显著转录活性,其中-1053AA/+64GG单体型启动子转录活性较-1053GG/+64CC和-1053AG/+64GC单体型启动子强,差异具有统计意义(P=0.005,0.009)。结论肿瘤转移抑制基因HTPAP的GCGGGT单体型与HCC高转移潜能正相关。HTPAP启动子单体型对基因的转录活性有显著影响并与术后复发密切相关,提示HCC中HTPAP的不同SNP单体型可能是潜在侵袭转移和复发预后的预测指标。

减轻应激训练在肝癌患者中的应用对巨噬细胞集落刺激因子-1表达的影响

目的探讨减轻应激训练在肝癌患者中的应用对于巨噬细胞集落刺激因子(CSF)-1表达的影响。方法选择进行肝癌根治术治疗的肝癌患者92例,根据随机平行对照原则分为观察组与对照组各46例,对照组在围手术期给予常规护理,观察组在对照组护理的基础上给予加强应激训练,包括行为训练、心理干预和认知干预,观察CSF-1表达变化情况与预后情况。结果患者的手术全部顺利完成,观察组术后恶心呕吐的发生率、下地活动的时间以及肛门排气的时间都比对照组明显要少(P<0.05)。手术后2周将对照组与观察组的血清CSF-1值分别为(69.35±11.84)pg/mL和(103.98±18.14)pg/mL,都明显低于术前1 d的(255.35±18.83)pg/mL和(254.10±20.19)pg/mL(P<0.05),组内与组间对比差异都有统计学意义(P<0.05)。术前1 d两组HAMA和HAMD评分均差异无统计学意义(P>0.05),术后14 d观察组较术前1 d及对照组术后14 d HAMA和HAMD评分都明显降低(P<0.05)。结论减轻应激训练在肝癌患者中的应用能抑制血清CSF-1的表达,缓解患者的焦虑与抑郁情绪,从而促进患者的康复。

腹腔镜肝切除联合胆道镜及腹腔镜超声治疗肝内外胆管结石的价值

目的探讨腹腔镜肝切除联合胆道镜及术中腹腔镜超声治疗肝内外胆管结石的临床价值。方法回顾性分析2016年1月至2018年12月在我院行腹腔镜左肝(外叶)切除联合胆道镜及术中腹腔镜超声治疗的38例左肝内外胆管结石患者的临床资料,术中应用超声对结石的部位、大小、范围及胆管血管情况作预先评估,确定切肝平面,再联合胆道镜探查进行网篮取石。结果本研究38例患者均成功完成手术,手术时间(249.05±82.20) min,术中出血(351.35±86.12) m L,术后肛门排气时间(28.06±6.41) h,住院时间(12.05±3.25) d。术后出现胆漏导致的断面积液2例,胸腔积液3例,胆道出血1例。随访12~48个月,患者均无结石残留及肝功能衰竭,未见结石复发。结论腹腔镜肝切除术中联合胆道镜及术中腹腔镜超声辅助能够有效降低术后结石残石率及复发率,可提高手术的安全性和精准性。

肝癌的热疗方法与新进展

热疗是继手术、放疗、化疗和生物四大肿瘤治疗以外的第五种新生的疗法。经过深入应用和研究,其安全性与疗效性已毋容置疑。肝癌的热疗方法已存在多种并且还不断地更新和发展。近年我院开展的手术加术中温水浴疗治疗肝癌的方法是安全、可行的,疗效性已经得到了初步的肯定,长期疗效需要进一步研究证实,其有望成为一种肝癌综合治疗的好方法。

肝癌细胞仑伐替尼耐药的基因筛选及其通路研究

目的基于CRISPR/Cas9技术筛选肝癌仑伐替尼耐药相关基因并探究其潜在关系。方法应用CRISPR/Cas9 sgRNA全基因组文库技术结合Affymetrix表达谱芯片筛选肝癌对仑伐替尼耐药的相关基因。通过TCGA数据库分析这些基因在肝癌中的表达及预后的关系,最终确定采用THOC2为肝癌仑伐替尼耐药基因并用于后续研究。采用免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色、Western blotting、RT-PCR检测THOC2在肝癌细胞株(MHCC-97H、MHCC-LM3、SMMC-7721)及仑伐替尼耐药/敏感肝癌组织中的表达情况。通过慢病毒感染构建高表达THOC2的SMMC-7721-THOC2肝癌细胞,采用免疫共沉淀(Co-IP)等技术探讨THOC2介导肝癌仑伐替尼耐药的可能机制。结果发现7个与肝癌仑伐替尼抵抗密切相关的耐药基因,包括THOC2、CTNNB1(β-catenin)、MET(c-Met/HGFR)、HTATIP2、C10orf11、PRDX3、MAST4。TCGA分析提示THOC2在肝癌与癌旁中表达存在统计学差异,且与肝癌临床分期及预后密切相关。IHC染色、Western blotting、RT-PCR检测发现THOC2主要分布于胞核中,其在仑伐替尼耐药组患者中的表达水平高于药物敏感组患者;THOC2在高转移潜能的肝癌细胞株(MHCC-97H、MHCC-LM3)中的表达较在SMMC-7721中更显著;Western blotting、Co-IP进一步表明上调THOC2后Wnt/β-catenin通路下游靶点BAX、cyclinD1和c-myc蛋白水平显著增高,且THOC2与β-catenin存在相互作用关系。结论THOC2基因高表达可能通过Wnt/β-catenin通路参与调控肝癌对仑伐替尼的耐药。

miR-144脂质体复合物体外抑制肝癌细胞增殖和侵袭能力及对裸鼠种植肿瘤的抑制作用初步研究

目的研究mi-RNA-144脂质体复合物对HepG2和SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并观察其在体内的抑瘤作用。方法通过薄膜分散法制备DOTMA阳离子脂质体,与miR-144孵育得到miR-144脂质体复合物,通过摄取和转染实验确定DOTMP脂质体与miR-144的体积质量比;观察miR-144脂质体复合物对HepG2和SMMC-7721细胞杀伤、迁移和侵袭能力的影响。在裸鼠肝脏种植肿瘤模型,观察miR-144脂质体复合物的抑瘤作用。结果选择DOTMP脂质体与miR-144的体积质量比为3:1,得到的miR-144脂质体复合物粒径在200 nm左右,其多分散性指数(PDI)小于0.3;DOTMP脂质体与质粒的体积/质量比(μl/μg)为3:1时,转染效率最高(P<0.05);随着孵育时间的延长,miR-144脂质体复合物对SMMC-7721细胞和HepG2细胞的杀伤作用均增强(P<0.05);经miR-144脂质体复合物处理过的HepG2细胞和SMMC-7721细胞迁移和侵袭距离均显著缩短(P<0.01);与对照组比,经过miR-144脂质体复合物处理的肿瘤细胞接种肿瘤直径显著缩小(P<0.05)。结论 miR-144脂质体能够在体外和体内抑制肝癌细胞的侵袭,具有很大的应用前景。

氧调节蛋白150在人肝细胞癌中的过度表达及其对凋亡的作用(英文)

在前期研究中发现,氧调节蛋白150(ORP150)是与肝细胞癌相关的糖蛋白.进一步研究了ORP150的表达水平与肝细胞癌的相关性.免疫印迹、细胞免疫化学和定量PCR分别在蛋白质水平和mRNA水平检测了ORP150的表达.运用RNA干扰技术检测了其对凋亡和肝细胞癌侵袭性的影响.发现:无论是蛋白质水平还是mRNA水平,与正常肝细胞相比,ORP150在肝细胞癌中表达明显上调;经RNA干扰后,肝细胞癌的凋亡明显增加,但肿瘤细胞的侵袭性无改变.肝细胞癌中,ORP150表达上调,它可能抑制肿瘤细胞的凋亡而促进其生长.ORP150有可能成为肝细胞癌的治疗靶点.

索拉菲尼联合TACE治疗肝癌术后复发的临床疗效分析

目的对比肝动脉化疗栓塞与联合索拉非尼治疗肝癌术后复发患者的临床疗效。方法将2013年1月~2015年1月笔者医院收治的56例肝癌术后复发患者,根据治疗方式不同分为两组,对照组26例仅单纯行TACE治疗,观察组30例在行TACE治疗后1周开始服用索拉非尼,治疗后对患者的近期疗效、中位生存期及肝外转移情况进行随访。结果治疗1个月后,观察组总有效率(66.7%)优于对照组(38.5%),差异有统计学意义(P<0.05);随访至2016年12月,观察组中位生存时间15.8个月,大于对照组10.8个月(P<0.05),观察组肝外转移率3.33%小于对照组23.08%(P<0.05)。结论 TACE联合索拉非尼可有效延长肝癌术后复发患者肿瘤进展期,提高生存时间,降低远处转移率,有望使肝癌术后复发患者获益。

中晚期肝癌介入治疗后应用血必净的临床疗效观察

目的探讨中晚期肝癌介入治疗后应用血必净注射液的临床疗效。方法选取2015年6月至2016年6月海南省人民医院肝胆胰外科收治的中晚期肝癌患者80例为研究对象,按随机数表法将患者分为观察组和对照组各40例,两组患者均行肝动脉化疗栓塞术,术后常规予以护肝、护胃等对症处理,观察组在此基础上加用血必净注射液50 m L静脉滴注,2次/d,7 d为一个疗程,比较两组患者的临床疗效。结果观察组患者的发热、腹痛程度较对照组有所减轻,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患者的平均住院天数为(11.5±1.8)d,明显少于对照组的(14.6±2.5)d,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者术后3 d、7 d血清C反应蛋白,白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论中晚期肝细胞癌介入治疗后应用血必净注射液能有效缓解介入术后患者发热,腹痛症状,缩短住院周期,降低炎症反应,具有一定的临床应用价值。