抗CD_3单克隆抗体HIT3aⅠ.制备和特异性鉴定

利用鼠—鼠杂交技术获得1个单克隆抗体(McAb)HIT3a。经免疫学、细胞化学和生物化学分析,证实HIT3a是抗入成熟T细胞表面CD_3抗原McAb,具有亲和力高、活性稳定、能激活T细胞、在补体存在下溶解T细胞等特性,是1个理想的可用于免疫学研究和临床治疗的CD_3类McAb。

一个能封闭造血祖细胞对重组人IL3反应的单克隆抗体—HI98

本文报道一种抗髓系细胞分化抗原单抗HI98,属于 IgM,与90%以上人外周血粒细胞,72%单核细胞和56%骨髓细胞反应。与一些上皮细胞有交叉反应。HI98单抗能抑制胎肌浸液诱导的人 GM-CFU 集落形成,最大抑制率达75%。用基因重组的 IL3和 GM-CSF纯品研究证实 HI98单抗只能特异性地抑制IL3诱导的 GM-CFU 和 BFU-E 集落形成,而对 GM-CSF 诱导的 GM-CFU 和 BFU-E 集落形成没有影响。因而生物学试验的结果与Lewis 在今年维也纳会议上报告的 IL3结合抑制试验结果完全一致,表明 HI98单抗的特异性是针对人类 IL3受体,一是一个抗 IL3受体抗体;在国内外尚未见报道。为研究人 IL3受体的基因调控及其与造血细胞增殖、分化、癌变之间的关系和造血因子间的相互作用提供了一个重要的工具。

抗人CD3人/鼠嵌合抗体基因的构建

为了降低鼠源抗人CD3单抗的免疫原性,增加其在人体内的生物活性及治疗作用,使该抗体能更广泛更有效地长期多次用于人体治疗肿瘤、器官移植排斥反应及自身免疫性疾病.本文采用PCR技术从分泌抗CD3单抗的杂交瘤细胞HIT3a的mRNA中分离克隆了抗体的轻重链可变区基因的cDNA.以此轻重链可变区cDNA为特异探针从HIT3a基因文库中分离带有调控序列的功能性轻重链可变区基因;并将其插入到含有人κ轻链及人γ1重链恒定区基因的哺乳动物表达载体中成功地构建了抗人CD3人/鼠轻重链嵌合抗体基因,为研制人抗CD3人/鼠嵌合抗体完成了关键性的第一步.

抗CD_3鼠/人嵌合抗体基因的构建及表达 I.CD_3单抗重链可变区基因的克隆及序列测定

以人工合成的小鼠免疫球蛋白重链可变区(V_H)基因特异的寡核苷酸片段为引物,用PCR法成功地进行了HIT_3a(抗CD_3单克隆抗体)V_H基因的扩增,并将扩增片段克隆进了pGEM-7Zf(+)质粒DNA中,重组质粒序列测定的结果表明,片段大小为353 bp,基因重排方式为VDJ_4。

通过HIT_(8a)和HIT_(8b)两个单克隆抗体鉴定发现CD_8抗原有不同的表位

用间接免疫荧光法、免疫组化技术鉴定了HIT_(8a)和HIT_(8b)两个单克隆抗体(单抗)对各种正常组织、细胞系和各种白血病患者细胞的反应性,证明其反应模式与CD8单抗相似。HIT_(8a)、HIT_(8b)识别的胸腺细胞上抗原分子量分别为 59和60KD(未还原),也与CD8近似。然而,竞争抑制试验显示,9个国际命名的 CD8单抗中只有5个可以完全抑制 HIT_(8a)、HIT_(8b)-FITC与靶细胞结合,4个无作用。证实HIT_(8a)和 HIT_(8b)是 CD8样抗体,识别同一抗原位点。但也揭示 CD8抗原有不同表位。本文对此进行了讨论。