华蟾素注射液对人IL-2水平及LAK细胞活性的影响

体外试验华蟾素注射液12-5mg/ ml 时能促进健康献血者PBMC 在PHA 作用下分泌IL2 和LAK 细胞的活性。表明华蟾素注射液通过提高人IL2 水平,增强LAK

适用于疫苗株筛选的痘苗病毒载体的构建

为构建适用于疫苗株筛选的痘苗病毒载体,利用标记瞬时稳定的原理,在痘苗病毒单选择标记载体psc65的基础上,构建成带有neo和LacZ双选择标记的痘苗病毒载体pVI75。为检验载体pVI75的有效性,将HIV-1合成基因syngpnef插入到载体pVI75上,构建成转移质粒pVI75-syngpnef,并与天坛株752-1痘苗病毒共转染CEF细胞。筛选得到的重组病毒经PCR和Dotblot检验表明,标记基因已被删除,而目的基因被整合到痘苗病毒基因组上。Westemblot检测结果表明,目的基因的表达正确。痘苗病毒载体pVI75的构建使得疫苗株筛选的工作量大为降低,时间大大缩短,为利用痘苗病毒载体构建重组病毒疫苗株的研究提供了参考。

DNA-天坛痘苗复合型艾滋病疫苗小鼠体内生物分布研究

目的考察DNA-天坛痘苗复合型艾滋病疫苗在小鼠体内生物分布情况。方法采用定量PCR方法分别对复合疫苗免疫后DNA疫苗的分布情况以及复合疫苗组分HIV-痘病毒载体疫苗单独免疫后的生物分布情况进行测定。结果复合疫苗免疫后5d和30d,主要是在注射部位检测到质粒DNA残留,在免疫后第56d,各脏器均未检测到质粒DNA残留。HIV-痘病毒载体疫苗单独免疫后第5d,仅在给药部位检测到DNA残留,免疫后第36d,各脏器均未检测到DNA残留。结论复合疫苗免疫机体后短期只在注射部位分布,且随时间延长减少至消失,不会长期在机体内存留。

运用实时荧光定量RT-PCR和ELISA方法定量检测SHIV的对比分析

目的 建立一种实时、灵敏、特异的针对人／猴免疫缺陷病毒（SHIV）的RNA载量检测方法，通过与酶联免疫吸附试验（ELISA）进行比较，成为监测SHIV病毒体外复制过程的常用方法。方法 体外转录制备RNA标准品，利用TaqMan EZ逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）试剂盒的反应体系和针对SHIVgag保守区91个碱基的Taq—Man探针与引物，建立一步法实时荧光定量RT—PCR。三种SHIV感染性分子克隆体外转染293T细胞，在不同的时间点采样，通过实时荧光定量RT—PCR和ELISA两种方法监测SHIV病毒复制过程。结果两种方法监测的病毒复制过程基本一致，转染后2～48小时病毒复制出现明显的对数生长期，之后进入平台期，p24浓度大约100pg／ml，而RNA载量大约在100拷贝／ml。两者具有很好的相关性（r^2=0．834；P〈0．001）。实时荧光定量RT＋PCR灵敏度更高，检测范围更广，费用更低。结论 所建立的一步法检测SHIV病毒载量的实时荧光定量RT—PCR方法，可以作为监测SHIV体外扩增的常用方法。

两种机型的流式细胞仪测定CD_4T细胞计数的比较研究

目的多种流式细胞仪机型应用于艾滋病防治工作中,比较不同机型间的免疫数据乃是当前迫切需要解决的问题。方法应用BD FACS Calibur和Beckman Coulter XL两种主流机型流式细胞仪,对阜阳市现场采集的183份标本[正常人41份,艾滋病病毒(HIV)阳性感染者142份]进行平行检测,观察上述两种机型对检测同一标本CD4绝对计数的影响。结果BD和XL两种机型的绝对计数结果比较显示,正常人CD4绝对计数在两种机型间的差异范围:≤10%的占57%,而>10%占43%;检测142份HIV阳性标本,CD4绝对计数差异≤10%的占84%;而差异>10%的占16%。在正常人标本组两机型数据间相关系数r=0.97;HIV阳性标本组数据间相关系数r=0.98,回归方程X系数均接近1。统计学检验显示,两种机型检测数据无显著性差异(P>0.05)。结论两种机型间数据高度相关且数值相近,所测定的HIV感染者CD4细胞绝对计数可以互用。

威麦宁抑制DENA诱发小鼠肺肿瘤发生的实验研究

实验结果表明:灌胃威麦宁的Ⅲ Ⅳ组(预防组)小鼠的死亡率和肺肿瘤总诱发率、恶性肿瘤发生率、自行死亡鼠诱瘤比(诱发肿瘤鼠数/自行死亡鼠数)均明显低于单纯皮下注射DENA诱发肿瘤的实验Ⅰ组;后者胸腺萎缩,周围血中ANAE阳性淋巴细胞水平显著降低,提示威麦宁有保护胸腺,利于T细胞增殖、发育,降低肺肿瘤诱发率,抑制靶细胞的肿瘤性转归等作用。

痘苗病毒对马属动物细胞的感染性研究

目的研究痘苗病毒天坛株是否能够感染马属动物细胞,并诱导免疫马产生免疫反应。方法首先采用重组绿色荧光蛋白(GFP)的痘苗病毒WR株感染驴胎皮肤细胞(FDD)后,通过流式细胞仪定期检测GFP表达水平(病毒感染率),探索最佳感染时间,进而用重组HIV-1 Gag蛋白的痘苗病毒天坛株感染FDD,通过免疫印记实验确认Gag蛋白在细胞内表达,并且进行胞内染色,通过流式细胞仪监测病毒的复制进程;使用痘苗病毒天坛株空载体接种实验马并监测其诱导的免疫反应。结果痘苗病毒感染FDD使产生病变效应,在其内表达外源蛋白,最佳时间为48h;使实验马产生针对病毒的结合抗体。结论痘苗病毒对FDD易感,痘苗病毒天坛株能使实验马感染,提示痘苗病毒重组EIAV抗原的载体疫苗可用于马体接种免疫。

HSV-1载体在小鼠及猴体内抗体检测方法的建立

目的为了对以HSV-1为载体的基因工程产品在动物体内药物安全评价检测抗体的需要建立一套ELISA检测方法。方法将重组HSV-1抗原作为包被抗原,对HSV-1抗原的最佳包被稀释度、包被效率、阴性和阳性血清标本的最佳稀释度进行了考察。并根据建立的检测方法,对2种动物(Balb/c小鼠和恒河猴)在给予HSV-1载体后得到的阴性血清(小鼠:30份;恒河猴:24份)和阳性血清(小鼠:120份;恒河猴:96份)进行了血清抗HSV-1抗体检测。结果(1)HSV-1抗原的最佳包被稀释度为1∶800(4.5μg),包被效率为82%;(2)阴性和阳性血清标本的最佳稀释度均为1∶100;(3)用所建立的检测方法,能够较好的在小鼠和恒河猴的阳性血清中检测出抗HSV-1的抗体。结论该方法能全面满足以HSV-1为载体的基因工程产品在药物安全评价中抗体的检测需要,该检测方法的建立能够为该类产品或相关基因工程产品的药物安全评价研究中抗体的检测分析提供一定的参考依据。

红色徽章文化融入高职院校校园文化建设的路径研究--以贵州航空职业技术学院为例

高职院校的校园文化建设,对于坚定高校学生的理想信念、树立正确的人生价值观,有着不可低估的作用。随着社会的发展,红色文化的推广和弘扬成为热潮,红色徽章作为独特的红色文化资源不仅是解读红色文化的特殊密码,更是工匠精神和思政育人生动的载体。本文立足于红色徽章文化的资源优势,阐述红色徽章文化融入高校校园文化建设的可行性和必要性,并从制度文化建设、精神文化建设、行文文化建设几个方面探讨其融入高校校园文化的实施路径。

He-Ne激光诱导HL-60细胞凋亡

探讨He-Ne激光幅照诱导肿瘤细胞凋亡而抑制肿瘤的生长。采用He-Ne激光处理HL-60细胞,流式细胞仪检测DNA含量及细胞凋亡百分率。发现在57.24 J/cm2的He-Ne激光作用下,HL-60细胞的凋亡百分率为12.83%。同时细胞周期发生改变,G1期减少,S期降低,G2期增加。结果表明在一定剂量He-Ne激光照射下,导致细胞DNA断裂,诱导HL-60细胞凋亡并抑制肿瘤细胞生长。

重庆地区浓雾对人肺功能的影响

［目的］ 了解重庆地区浓雾对人体肺功能即刻影响。［方法］ 对在浓雾中呼吸２ ｈ 的２８ 例受试者即刻检测肺功能， 并与晴日作对照。［结果］ 健康组ＦＥＶ１ 和Ｖ７５较晴日明显降低（Ｐ＜ ０．０２， Ｐ＜ ０．０５）， 患病组Ⅲ相斜率较晴日明显增高（Ｐ＜ ０．０５）， 雾日ＳＯ２、ＮＯ２ 对气道影响的浓度明显低于国外人工气室内分别所测出的阈值。［结论］ 重庆地区浓雾对健康人的即刻影响以大气道为主， 对慢性支气管炎、肺气肿患者则以小气道为主。

蜂王浆与LAK细胞联合杀伤Hela细胞的研究

本研究用１～１０ｍｇ／ｍｌ浓度的蜂王浆分别处理ＬＡＫ细胞和Ｈｅｌａ细胞，然后共同孵育。结果低浓度的蜂王浆对ＬＡＫ活性的诱导具有促进作用。

8q24 rs1447295基因多态性与不同族群前列腺癌易感性的Meta分析

目的通过Meta分析系统评价8q24染色体rs1447295基因多态性与不同族群前列腺癌(prostate cancer,PCa)患病风险的相关性。方法检索万方、中国知网、PubMed、Science Direct、Web of Science、Wiley Online Library和中国生物医学文献数据库中涉及8q24 rs1447295基因多态性和PCa易感性的病例-对照研究。2位独立研究者按标准筛选文献,运用Cochrane工具及Stata 15.0软件行Meta分析,计算OR值、95%CI并进行偏倚风险评价。结果最终纳入相关文献36篇,涉及研究41项,包含25715例PCa患者和27018例健康对照者。结果显示,在5类基因模型中,等位基因模型、显性遗传模型、隐性遗传模型、纯合子遗传模型与杂合子基因模型显示8q24 rs1447295基因多态性均与PCa易感性之间存在显著相关性,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步亚组分析显示,在高加索人种和亚洲人种中,8q24 rs1447295基因多态性与PCa易感性相关,且差异均有统计学意义(P<0.05),在非裔和拉美裔群体中未显示有统计学关联。结论8q24染色体rs1447295基因多态性与PCa患病风险有关,该相关性在高加索人种和亚洲人种中较为显著,在非裔和拉美裔群体关联性无显著差异。

表达HIV-I CN54株gagpol基因重组痘苗病毒疫苗株的构建

为研制不带筛选标记的HIV活载体疫苗,首先构建含有neo基因和lacZ基因双重筛选标记的pVI75转移质粒,并将HIV-Ⅰ中国主要流行株B’/C重组株CN54 gagpol基因置于pVI75的启动子pE/L下,构建重组质粒pVI75-Gagpol。重组质粒与痘苗病毒天坛株共转染鸡胚细胞。前三轮通过G418加压,噬斑纯化,得到既含目的基因又含筛选标记的蓝色重组痘苗病毒;后三轮在无G418选择压力下,筛选只含目的基因而缺失了筛选标记的白色重组痘苗病毒。结果表明筛选到了一株重组病毒,经PCR和Dot blot检测确认该株重组痘苗病毒的neo基因和lacZ基因已丢失;PCR鉴定表明目的基因已插入重组痘苗病毒中;抗体染色和Western blot结果证实该重组病毒能很好地表达目的蛋白。

基于NX-Fluent的矿浆处理器管路出口流量分析

浮选机精煤生产以后,煤矿矿浆流出量与循环量对于生产产量有着重要影响,需要对进入浮选机的流量进行计算,从而为整个管路循环的设计选型及管路管径选择提供理论支持。

HIV复制型痘苗病毒载体疫苗免疫原性分析

目的 分析比较HIV复制型痘苗病毒载体疫苗在小鼠和家兔体内的免疫原性。方法 HIV痘苗病毒载体疫苗vTKgpe以肌内、皮下、皮内 3种途径接种小鼠 ,每周采血检测HIV特异性抗体和针对痘苗病毒载体的抗体 ,4周时取脾细胞用流式细胞仪检测细胞免疫。此外vTKgpe皮内途径接种 2只家兔 ,每周采血检测抗体。结果 肌内和皮下免疫的小鼠在 2周时开始出现HIV特异性抗体 ,4周时开始消失 ;针对痘苗病毒载体的抗体滴度在 4周时急剧升高 ;血清吸附实验表明痘苗病毒抗体的升高对HIV特异性抗体检测有一定的掩盖。细胞免疫仅在皮内免疫的小鼠中检测到。家兔的HIV特异性抗体在 2周时出现 ,并能维持一段时间。结论 在小鼠体内 ,肌内和皮下注射 2种途径倾向于诱导体液免疫 ,而皮内接种则以诱导细胞免疫为主。家兔对痘苗病毒的敏感性要高于小鼠。

缺失IFN-γ受体基因的天坛株减毒重组痘苗病毒载体的构建

目的 构建缺失IFN γ受体基因的天坛株重组痘苗病毒载体 ,初步研究其毒力的改变及B8R缺失区插入外源基因表达的稳定性。为研制表达多价抗原重组痘苗病毒载体、提高痘苗病毒载体安全性进行探索。方法 采用PCR技术、多步克隆构建带有天坛株痘苗病毒B8R基因外左右侧同源臂、痘苗病毒启动子序列pE L、p7 5及下游LacZ序列的转移质粒pSKB8R、pSKB8RLacZ。将痘苗病毒VTT与转移质粒pSKB8RLacZ共转染CEF细胞进行同源重组 ,经蓝白斑筛选、连续单斑纯化、鉴定获得B8R基因 (IFN γ受体基因同源序列 )缺失为LacZ所取代的重组病毒VTT△B8RLacZ。结果 经酶切、测序鉴定转移质粒构建正确 ,核酸水平、外源基因生物学活性检测表明VTT△B8RLacZ在CEF细胞连续培养传代中B8R基因的缺失和插入外源基因LacZ表达均很稳定。VTT△B8RLacZ在细胞中的繁殖复制水平与VTT相当。兔皮内毒力实验表明B8R基因缺失显著降低VTT的毒力。结论 本研究表明B8R基因缺失可显著降低痘苗病毒天坛株的毒力并可作为外源基因的插入区 ,缺失B8R基因的重组痘苗病毒可能作为新一代的表达多价抗原痘苗病毒载体。

IL-12对HIV痘病毒载体疫苗毒性和免疫原性的影响

目的探讨提高HIV痘病毒天坛株载体疫苗(vTKgpe)的免疫原性及细胞免疫反应。方法用同源重组方法在HIV痘病毒天坛株载体疫苗基因组中插入鼠白介素12(IL12)基因,获得重组病毒vTKgpe-IL12。首先经鼻腔免疫检测其毒力,然后以酶联免疫斑点实验(ELISPOT)和胞内因子染色(ICS)检测vTKgpe-IL12的细胞免疫反应,以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测体液免疫应答。结果重组病毒vTKgpe-IL12能正确表达mIL12和HIV抗原。mIL12对vTKgpe毒性和体液免疫应答无影响。相对vTKgpe而言,vTKgpe-IL12在末次免疫后10d,对细胞免疫应答的强度没有影响;在末次免疫后30d,针对Env的细胞免疫应答有所提高,针对gag-pol的细胞免疫应答略有下降。vTKgpe-IL12诱导的细胞免疫反应30d时比10d显著下降,尤其是针对gag-pol的细胞免疫应答显著降低。结论应用DNA初免-痘病毒加强免疫策略时,在痘病毒重组疫苗中加入IL12增强了对env的细胞免疫反应,而降低了对gag-pol的细胞免疫反应。