大鼠源卡氏肺孢子菌p55抗原基因克隆和序列分析

目的克隆大鼠源卡氏肺孢子菌55kDa抗原(p55)基因。方法取肺孢子菌病大鼠肺组织制备肺孢子菌DNA,并以此模板扩增p55基因,将PCR产物与pGEM-T载体连接,转化E.coli DH5a,在含氨苄青霉素(Amp)的LB培养基上筛选出重组子,提取质粒进行PCR扩增、酶切鉴定、序列测定及序列比较分析。结果p55基因体外扩增产物长度为1286bp,重组质粒经PCR及酶切鉴定结果表明获得正确重组子,测序结果与文献报道同源性为99.8%。结论成功扩增了p55基因,并插入克隆载体pGEM-T中。p55基因的克隆为进一步建立基因分型、疫苗等研究打下基础。

卡氏肺孢子虫感染大鼠肺肝脾微量元素的测定

目的 研究卡氏肺孢子虫(Pc)感染对大鼠肺、肝、脾组织中6种微量元素(Ca2+、Mg2+、Fe2+、Cu2+、Zn2+、Mn2+)的影响。 方法 30只SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组每只大鼠皮下注射地塞米松1 mg/次,每周2次,诱导Pc感染。10 wk后处死大鼠,检查Pc包囊,实验组分为Pc感染组和Pc阴性组。取肝、肺、脾组织,用原子吸收分光光度计测定其微量元素的变化。 结果 与Pc阴性组及对照组相比较,Pc感染组肺组织Zn2+含量明显低于对照组(P<0.05),Ca2+、Mg2+含量明显高于对照组(P<0.05),Fe2+、Cu2+、Mn2+含量变化不明显;感染组肝组织Zn2+含量明显低于对照组(P<0.05),Mg2+的含量增加(P<0.05),Ca2+、Fe2+、Cu2+、Mn2+的含量变化不明显;感染组脾脏中Zn2+、Cu2+的含量明显低于对照组(P<0.05),Ca2+、Mg2+、Fe2+、Mn2+的含量变化不明显。 结论 Pc感染大鼠肺、肝、脾组织微量元素的含量发生改变。

McAbDot-ELISA检测卫氏并殖吸虫循环免疫复合物

应用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法，以抗卫氏并殖吸虫囊蚴单克隆抗体ＩＦ８Ａ３检测了卫氏并殖吸虫感染犬血清循环免疫复合物动态。感染后１～２ｗｋ可以检测到免疫复合物，３～４ｗｋ阳性滴度逐渐上升，５～６ｗｋ处于较高水平，第８ｗｋ达高峰，然后较快地下降。研究结果表明，卫氏并殖吸虫囊蚴抗原特异的循环免疫复合物具有明显的期特异性；单克隆抗体Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测特异的循环免疫复合物，可用于卫氏并殖吸虫病的早期诊断和活动性感染的诊断。

大鼠卡氏肺孢子虫包囊的二维数据分析

目的探讨大鼠卡氏肺孢子虫包囊的形态学参数特征。方法采用图像分析仪测量大鼠感染的卡氏肺孢子虫包囊的长径、短径、周长、面积、等效直径、圆球度、体积等参数。结果长径最大值7.598μm、最小值3.75μm、平均5.112μm;短径最大值5.94μm,最小值2.94μm、平均4.438μm;周长平均值16.234μm;面积平均值为17.696μm2。结论本研究结果为比较不同宿主来源的卡氏肺孢子虫包囊提供了科学数据。

卫氏并殖吸虫感染犬循环免疫复合物和循环抗原的动态比较

卫氏并殖吸虫感染犬循环免疫复合物和循环抗原的动态比较段义农，邵义祥，朱顺星，彭光仁，张耀娟，章子豪，侯敏，吴观陵卫氏并殖吸虫病是我国流行较广的寄生虫病之一，病原学诊断较为困难。近年来，以虫源性ＣＡｇ为检测靶标的肺吸虫病血清学诊断技术，在早期诊断、指示...

免疫耐受对日本血吸虫虫卵肉芽肿形成的影响

目的 探讨免疫耐受对小鼠肝脏虫卵肉芽肿形成的影响。 方法 分别用 10、10 0、和 10 0 0 μg的日本血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA)腹腔注射 1周龄小鼠 ,诱导其对虫卵抗原产生免疫耐受性。在感染日本血吸虫尾蚴后 42、5 6、70和 84d分批剖杀小鼠 ,取出肝脏作病理切片测量肉芽肿的大小。 结果 10 0～ 10 0 0 μg SEA可诱导小鼠产生一定程度的免疫耐受性 ,使虫卵肉芽肿反应减轻。但是随着时间的延长 ,这种耐受性逐渐减弱或消失。 结论 SEA诱导的免疫耐受性可以减轻血吸虫感染早期的肝脏肉芽肿反应 ,但对慢性期的作用较弱。

医学寄生虫学考试智能组卷系统的研究

目的 为了提高教师命题与组卷的质量 ,研究开发了医学寄生虫学考试智能组卷系统的应用软件。方法 该系统采用结构化分析与设计技术、面向对象技术 ,并使用关系型数据库语言VFP实现。结果 本系统含有试题库管理、试卷管理和智能组卷三大模块。题库中有 10种题型 ,2 5 0 0多道试题。试题库实行开放式管理。该系统操作简单 ,组卷快捷。既能自动随机组卷 ,又可人工逐题浏览组卷。组成的试卷图文并茂。文中对试题库建设的意义、命题原则及题型设置等进行了讨论。结论 该系统适用于医学寄生虫学考试智能化组卷。

大鼠肺微量元素变化与卡氏肺孢子虫感染关系的探讨

目的 检测卡氏肺孢子虫感染对大鼠肺组织 6种微量元素 (Ca+ + 、Mg+ + 、Fe+ + 、Cu+ + 、Zn+ + 、Mn+ + )的影响。方法 30只SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组每只大鼠皮下注射地塞米松 1mg/次 ,每周 2次 ,诱导卡氏肺孢子虫感染。 10周后将大鼠处死 ,取肺组织 ,用原子吸收分光光度计测定其微量元素的变化。结果 与PCP阴性组及对照组相比较 ,感染组肺组织中Zn+ + 的含量明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,Ca+ + 、Mg+ + 的含量明显高于对照组 (P <0 0 1～ 0 0 5 ) ,Fe+ + 、Cu+ + 、Mn+ + 的含量变化不明显。结论 卡氏肺孢子虫感染能引起大鼠肺组织微量元素的变化。

卫氏并殖吸虫对嗜酸性和中性粒细胞的体内趋化作用

应用体内试验将卫氏并殖吸虫成虫分泌排泄产物和成虫浸出液注入豚鼠背部皮内，观察对豚鼠嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的影响。在注射后２～４ｈ，注射部位可见少量嗜酸性粒细胞，在８ｈ细胞数达高峰，然后很快下降，２４ｈ后只见少量嗜酸性粒细胞。在注射后１ｈ，注射部位的中性粒细胞开始增多，４ｈ细胞数最多，然后细胞逐渐减少，４８ｈ降至最低。本研究结果证明，卫氏并殖吸虫对豚鼠嗜酸性粒细胞在体内具有明显的趋化活性。

卡氏肺孢子虫感染大鼠脾微量元素的测定

目的 探讨卡氏肺孢子虫 (PC)感染对大鼠脾脏中 6种微量元素 (Ca+ + 、Mg+ + 、Fe+ + 、Cu+ + 、Zn+ + 、Mn+ + )的影响。 方法 将 30只 SD大鼠随机分为实验组和对照组。实验组每只大鼠皮下注射地塞米松 1mg/次 ,每周 2次 ,诱导 PC感染。10周后将大鼠处死 ,取脾脏 ,用原子吸收分光光度计测定各组微量元素的含量。 结果 与对照组相比较 ,PC感染组脾脏中 Zn+ +、Cu+ +的含量 (2 3.82 μg/ g干重、18.31μg/ g干重 )明显低于对照组 (45 .4 9μg/ g干重、2 6 .35 μg/ g干重 )(P<0 .0 5 ) ,Ca+ + 、 Mg+ + 、Fe+ + 、Mn+ + 的含量 (2 18.5 5μg/ g干重、2 34.78μg/ g干重、2 17.96μg/ g干重、0 .96μg/ g干重 )变化不明显。 结论 卡氏肺孢子虫感染大鼠脾脏中微量元素发生了变化。

卫氏并殖吸虫成虫的嗜酸性粒细胞和中性粒细胞的体外趋化性

本文用改良的Boyden微孔滤膜小室法,证实卫氏并殖吸虫成虫浸出液和分泌排泄产物对嗜酸性粒细胞和中性粒细胞有明显的趋化性。其趋化性随蛋白浓度的增加而增强,但高浓度则出现抑制。文中对嗜酸性粒细胞趋化因子在肺吸虫感染中的可能作用进行了讨论。

卡氏肺孢子虫肺炎病原学检查的实验研究

目的 :比较卡氏肺孢子虫的染色效果。方法 :给 SD大鼠皮下注射地塞米松。制作肺泡灌洗液的涂片和肺组织印片 ,采用姬氏染液、甲苯胺蓝和六亚甲基四胺银进行染色 ,油镜观察。结果 :姬氏染液染色后 ,肺孢子虫包囊结构清晰可辨。结论 :姬氏染色法可作为卡氏肺孢子虫的常规诊断方法。

卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒构建与表达

[目的]构建大鼠源卡氏肺孢子虫MSG抗原基因片段真核表达质粒,进行表达。[方法]以卡氏肺孢子虫DNA为模板,应用PCR扩增MSG基因片段,连接至pGEM-T Easy载体,再克隆至PCDNA3.1(+)载体。构建的重组表达质粒经酶切、PCR鉴定后转染至COS-7细胞,并进行大量增殖。RT-PCR验证转染基因的表达。[结果]重组表达质粒PCDNA3.1(+)/MSG经酶切及PCR鉴定结果表明构建成功。RT-PCR结果显示MSG基因片段成功转染至COS-7细胞,并在其中进行基因表达。[结论]成功构建了PCDNA3.1(+)/MSG重组质粒,并在COS-7细胞中表达,为进一步进行核酸疫苗的研究打下基础。

卡氏肺孢子虫P55抗原表位与蛋白特性的分析

目的预测p55抗原表位及蛋白性质。方法运用生物信息学方法推测p55抗原表位及蛋白性质,分析预测结果。结果p55蛋白存在多个潜在的抗原表位,T细胞表位按预测积分高低排列位于141-158,54-68,123-137,349-364,397-414位氨基酸残基;B细胞表位在37-41,74-79,111-119,148-161,199-210,240-250,256-266,295-314,322-360位氨基酸残基等部位。P55重组融合蛋白为可溶性蛋白的概率是92%。结论p55抗原表位可能主要存在于148-161、295-320、337-356氨基酸序列区域内或其附近。该预测p55抗原表位可以有目的地克隆重组基因片段,为研究高效的表位疫苗奠定基础。

锌对大鼠感染卡氏肺孢子虫的影响初探

目的探讨锌对大鼠感染卡氏肺孢子虫的影响。方法将30只SD大鼠随机等分为A、B、C三组。A、B二组每只大鼠皮下注射地塞米松1mg/次,每周2次,诱导感染卡氏肺孢子虫。B组同时给予硫酸锌。C组为对照组。第8周将各组大鼠处死,取肺组织印片,检查包囊。结果锌对诱导产生的大鼠卡氏肺孢子虫肺炎的严重程度有所减轻。结论锌对大鼠感染卡氏肺孢子虫有一定影响,值得进一步深入研究。

1个新的白介素-32剪接异构体的克隆与表达

目的对白介素-32(interleukin-32,IL-32)的不同剪接异构体进行克隆及表达。方法设计保守引物,以Jurkat细胞的cDNA为模板进行PCR扩增,克隆IL-32不同剪接异构体;DNA测序扩增产物,计算机辅助分析IL-32基因序列特征;构建IL-32原核及真核表达重组质粒,并利用SDS-PAGE和Western blot检测其表达情况。结果克隆得到已知的IL-32的6个剪接异构体(α、β、γ、δ、ε、ζ),还克隆得到1个新的IL-32剪接异构体,将其命名为IL-32η,Genbank登录号JN546102。IL-32η编码区长度为336 bp,编码的蛋白含111个氨基酸残基,其理论相对分子质量为12 560。IL-32η原核表达产物主要以可溶形式位于宿主菌的周质腔。亲和纯化了重组IL-32η,利用重组IL-32η制备了兔多克隆抗体,该抗体能够识别IL-32全部的7个剪接异构体。结论克隆得到1个新的IL-32剪接异构体IL-32η,它的发现将为全面理解IL-32的功能提供新思路。

大鼠源肺孢子菌p55基因片段真核表达质粒的构建及表达

目的构建大鼠源肺孢子菌抗原p55基因片段真核表达质粒,并研究该质粒在真核细胞COS-7中的有效表达。方法以含有p55全长基因的质粒为模板,通过PCR扩增p55基因片段,克隆至pGEM-T载体中,经酶切后再将p55基因重组至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-582,经限制性内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,应用脂质体转染技术转染入COS-7细胞,RT-PCR检测其基因转录情况,SDS-PAGE鉴定其表达相应的目的蛋白质情况。结果成功扩增了p55基因片段,酶切和测序证明正确构建了重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-582,RT-PCR和SDS-PAGE方法证实该片段能在COS-7细胞中有效表达目的蛋白质。结论成功构建了大鼠源肺孢子菌p55基因片段的真核表达质粒载体,并在COS-7细胞中表达,为进一步进行核酸疫苗的研究奠定了基础。

卡氏肺孢子菌55kDa抗原的原核表达与纯化

目的体外扩增卡氏肺孢子菌(Pneumocystis carinii,Pc)55kDa抗原(p55)570bp的基因片段,构建原核表达载体pGEX-570,诱导表达并纯化重组蛋白。方法以卡氏肺孢子菌DNA为模板,扩增其基因片段,连接至pGEM-T载体,随后构建pGEX-570重组表达质粒,经双酶切、PCR及测序鉴定后将其转化入BL21大肠杆菌中,经IPTG诱导表达融合蛋白。采用透析袋电泳法纯化融合蛋白。结果重组表达质粒pGEX-570经酶切,PCR鉴定及测序结果表明构建成功。IPTG诱导表达融合蛋白GST-p55/570,分子量约为47kDa。用透析袋电泳法纯化重组蛋白,经SDS-PAGE确认正确。结论本研究成功构建了pGEX-570原核表达载体,诱导表达并纯化GST-p55/570融合蛋白。为进一步开展肺孢子菌55kDa抗原的研究奠定了基础。