小鼠囊胚胞外囊泡对子宫内膜上皮细胞E-cadherin和vimentin表达的影响

目的:探讨小鼠囊胚细胞外囊泡(EVs)对小鼠子宫内膜上皮细胞(mEECs)上皮钙黏素(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)表达的影响。方法:以孕4.5 d的BABL/c小鼠囊胚为材料,利用超高速离心分离纯化小鼠囊胚EVs,粒度仪分析粒径,透射电子显微镜观察形态,Western blot分析Tsg101和CD63的表达;酶消化结合差速贴壁筛选法制备原代mEECs,流式细胞术分析细胞角蛋白8(CK8)的阳性率鉴定mEECs纯度。建立囊胚EVs与mEECs共培养模型,共聚焦显微镜观察PKH26标记的囊胚EVs进入mEECs的形态过程,Western blot和细胞免疫化学法分析共培养中mEECs中E-cadherin和vimentin表达的变化。结果:(1)小鼠囊胚EVs平均粒径(226.6±3.8) nm,表现囊泡超微形态,表达Tsg101和CD63蛋白标志物。(2)原代mEECs形态均匀,CK8阳性细胞率80%以上。(3)与0 h相比,mEECs与囊胚EVs共培养48和96 h时E-cadherin表达水平显著降低(P<0.01),vimentin表达水平显著升高(P<0.01)。结论:小鼠囊胚EVs可下调E-cadherin表达,上调vimentin表达,诱导mEECs发生上皮-间充质转化。

黑色素瘤细胞外泌体对成纤维细胞侵袭和MMP2、MMP9表达的影响

目的探究黑色素瘤外泌体对成纤维细胞侵袭和MMP2、MMP9表达的影响。方法采用超速离心法提取黑色素瘤细胞外泌体,采用Western blot、透射电镜及粒度检测鉴定外泌体表面标志物及形态大小,采用流式检测及激光共聚焦显微镜观察外泌体被成纤维细胞摄取的过程,Transwell实验检测黑色素瘤外泌体对成纤维细胞侵袭能力的影响,Western blot与免疫细胞化学检测外泌体对成纤维细胞MMP2、MMP9蛋白表达水平的影响,qRT-PCR检测对MMP2、MMP9基因水平的影响。结果电镜下可观察到黑色素瘤外泌体形态呈双层膜,中空,圆形或椭圆形,并且阳性表达外泌体标志物TSG101和黑色素瘤标志蛋白TYRP2。与正常成纤维细胞相比,黑色素瘤外泌体处理的成纤维细胞侵袭能力显著增加(P<0.01),MMP2、MMP9表达显著上调(P<0.05)。结论黑色素瘤外泌体可能通过诱导成纤维细胞MMP2、MMP9的表达,促进成纤维细胞侵袭。

小鼠黑色素瘤细胞外泌体促进成纤维细胞表达Rac1蛋白

目的:探讨小鼠黑色素瘤细胞外泌体对成纤维细胞表达Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)蛋白的影响。方法:超高速离心法分离小鼠黑色素瘤B16-F10细胞外泌体,电镜负染色观察外泌体的形态,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)测定外泌体的粒径分布,Western blot鉴定外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,Tsg101)和酪氨酸酶相关蛋白2(tyrosinase-related protein 2,Tyrp2)的表达;激光共聚焦显微镜观察在共培养过程中小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)摄取外泌体的过程;免疫细胞化学染色和Western blot实验分析MEF表达Rac1蛋白的情况。结果:B16-F10细胞外泌体在电镜下呈典型茶托状形态,NTA测得其粒径范围在141~255 nm,Western blot测出其标志蛋白Tsg101和Tyrp2。激光共聚焦显微镜观察结果显示,与共培养0 h相比,共培养12 h的MEF内有少量的外泌体,且共培养24和36 h的MEF内聚集了大量的外泌体。Western blot结果表明,与共培养0 h相比,共培养24和36 h的MEF中Rac1蛋白表达水平显著增加(P<0. 01)。免疫细胞化学染色结果表明,与共培养0 h相比,共培养12、24和36 h的MEF中Rac1蛋白阳性表达水平显著增加(P<0. 05或P<0. 01)。结论:小鼠黑色素瘤细胞外泌体可促进成纤维细胞表达Rac1蛋白。

细胞外囊泡RNA的多样性特征

细胞外囊泡是一类可携带蛋白质、核酸、脂质等内含物的新型细胞间通讯介质。可向邻近及远处细胞传递生物信息分子,调控受体细胞正常生理及病理发展过程。在肿瘤发生与发展、疾病的诊断治疗、细胞分子生物学研究等方面发挥着越来越重要的作用。作为基因表达的重要调节剂,RNA是细胞外囊泡中一类丰富的内含物,且细胞外囊泡RNA种类繁多,分布及分类水平不等,对其的研究极具挑战性。该文重点讨论细胞外囊泡RNA的多样性特征,由此回顾细胞外囊泡RNA的研究进展。