siRNA介导的LPXN沉默可抑制SHI-1细胞增殖及增强SHI-1细胞药物的敏感性

目的探讨LPXN表达下调对人急性单核白血病SHI-1细胞增殖及药物敏感性的影响。方法将荧光标记的不同浓度FAM-siRNA序列转染SHI-1细胞后FCM检测转染效率,并优化转染条件。合成LPXN基因特异的siRNA序列(LPXN-siRNA)并转染SHI-1细胞,Western blot筛选能有效干扰LPXN蛋白表达的siRNA序列以及细胞内p-MAPK的表达。CCK-8检测LPXN-siRNA转染后SHI-1细胞的增殖以及细胞对姜黄素(Cur)或阿糖胞苷(Ara-C)药物敏感性的改变。结果当细胞接种密度为4×105/m L且siRNA/Lipofectamine 2000混合比例为200 pmol/1μL时,FAM-siRNA转染入SHI-1细胞的最高效率达到74.5%,且筛选出L2-siRNA为有效下调LPXN表达的siRNA序列。在N-siRNA转染的阴性对照组SHI-1细胞增殖抑制率为8.247±1.003,而在下调LPXN表达的L2-siRNA转染组细胞增殖抑制率增加至(27.043±2.051)%(P<0.05);并且各组进一步添加(0~25μmol)Cur或(0~2.0μmol)Ara-C药物后,L2-siRNA转染组的细胞增殖抑制率、p-JNK和p-P38 MAPK的表达均明显高于N-siRNA对照转染组。而p-ERK的表达水平则各组基本一致。结论 siRNA特异性干扰下调LPXN蛋白表达后,可能通过激活MAPK家族的JNK及P38 MAPK蛋白酶,从而抑制人急性单核白血病SHI-1细胞的增殖,增强SHI-1细胞对Cur或Ara-C药物的敏感性。

仙连解毒方对结直肠癌原位瘤小鼠肿瘤增殖的抑制作用及机制探讨

目的:探讨仙连解毒方对结直肠癌(CRC)原位瘤小鼠肿瘤的抑瘤作用,并对其作用机制进行探讨。方法:建立CT26原位瘤小鼠模型,按体质量随机分为正常组、模型组、5-FU给药组、仙连解毒方给药组,连续给药28 d,隔日观察小鼠状态。处死小鼠后剥取瘤组织,HE染色观察组织病理形态学变化;免疫组织化学染色法检测小鼠瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达;TUNEL染色观察仙连解毒方对原位肿瘤细胞凋亡的影响;Western Blot检测原位瘤组织内糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、p-GSK-3β、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达的变化。结果:与模型组比较,仙连解毒方可以显著减少原位瘤的体积(P<0.01),HE及TUNEL染色结果显示仙连解毒方使肿瘤组织凋亡及坏死细胞增加;免疫组织化学染色结果显示,仙连解毒方给药组小鼠瘤组织内PCNA的蛋白表达减少。Western Blot染色结果显示,仙连解毒方给药后小鼠瘤组织内p-GSK-3β/GSK-3β比值显著下降(P<0.01),β-catenin蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论:仙连解毒方具有抑制小鼠CRC原位瘤增殖的作用,其作用机制与干预Wnt/β-catenin通路,抑制肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞凋亡有关。