前列腺癌人源性肿瘤异种移植模型的发展与应用

前列腺癌(prostate cancer,PCa)是最常见的男性生殖肿瘤之一,治疗前若能通过体内外实验准确地反映患者的肿瘤特征、合理预测最佳治疗方案与预后,将有效提高治疗效率。人源性肿瘤异种移植(patient-derived tumor xenograft,PDX)模型是将不同个体来源的肿瘤直接移植至免疫缺陷的动物体内,被广泛应用于肿瘤临床前及精准医学研究。本文就PDX模型的构建方案、研究进展及在男性PCa中的应用进行综述。

利用条件性重编程细胞技术构建前列腺癌原代细胞库

目的利用条件性重编程细胞(CRC)技术培养人源性前列腺癌细胞,为前列腺癌体外实验研究建立个体化原代细胞库。方法 2019年1—4月共获取3例新鲜的前列腺癌病理组织标本,将标本分为2份,一份经术中快速冰冻病理检查确定为癌组织;另一份用0.25% EDTA酶消化为分散的悬浮单个的癌细胞,利用CRC技术对癌细胞进行培养。培养方法:将原代细胞与经30 Gy照射的3T3-J2小鼠成纤维细胞共培养于条件性培养基中,观察癌细胞克隆团生长情况。使用差异性消化对原代细胞进行传代:先用0.25% EDTA胰酶消化1 min去除饲养层细胞,PBS清洗后再用0.25% EDTA胰酶消化原代细胞。待癌细胞稳定后,通过免疫荧光、免疫组化染色、免疫印迹和荧光原位杂交技术等实验,验证所培养的癌细胞性质。结果体外利用CRC技术建立3例前列腺癌原代细胞株,细胞培养约15 d建系成功,并可持续稳定传代。细胞鉴定结果显示,所培养的细胞均表达AR、CK5、CK18和P504s,同时也弱表达PSA。荧光原位杂交技术显示细胞出现≥1.6%的TMPRSS2/ERG基因融合,这些现象符合前列腺癌的细胞特征。结论利用CRC技术能稳定地体外持续培养前列腺癌原代细胞。

基于苯丙氨酸的聚酯酰胺纳米递药系统制备及其体外抗前列腺癌的研究

目的探究基于苯丙氨酸的聚酯酰胺的纳米递药系统的制备及其对体外培养前列腺癌细胞的抑制效果。方法采用纳米沉淀法制备聚酯酰胺纳米粒,利用透射电镜和纳米电位仪测量纳米粒的形貌和大小分布,利用破碎沉淀法与荧光磷光光谱仪测定其载药量和包封率。采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法测定载药纳米粒对前列腺癌细胞LNCaP的抑制效果,采用膜联蛋白V-APC/7AAD双染法并用流式细胞仪测定其对肿瘤细胞的凋亡诱导作用。结果采用纳米沉淀法成功制备了空白及包载多柔吡星(DOX)的载药聚酯酰胺纳米粒,粒径约为90~110 nm,大小分布较为均匀。空白纳米粒在不同浓度下均显示出良好的生物相容性,高浓度100μg/ml的材料作用下,LNCaP的细胞活力仍保持在(95.32±3.97)%。与DOX组的IC50(3.29±0.63)μg/ml相比,载药纳米粒对前列腺癌细胞活性抑制明显,IC50为(1.21±0.43)μg/ml,差异具有统计学意义(t=6.693,P<0.001)。流式细胞仪检测载药纳米粒能有效诱导前列腺癌细胞进入中晚期凋亡,对照组、DOX组与DOX@8p6组凋亡率分别为2.32%、29.16%和61.62%,后两组间差异具有统计学意义(χ^2=2217,P<0.001),且DOX@8p6组凋亡情况多于DOX组(t=11.238,P<0.001),显示出载药纳米粒对前列腺癌细胞LNCaP更高的促凋亡效率。结论基于苯丙氨酸的聚酯酰胺纳米粒具有良好的生物相容性,其作为递送抗肿瘤药物多柔吡星的纳米药物载体时能有效地直接抑制前列腺癌肿瘤细胞活性及诱导肿瘤细胞凋亡。