冷缺血时间对不同疾病类型肝组织质量的影响

目的 高质量的肝脏组织样本对肝脏疾病的研究至关重要,冷缺血时间(CIT)是影响组织样本质量的关键因素,探讨冷缺血时间与不同疾病类型肝组织样本质量的相关性,为获得高质量肝组织样本提供标准。方法 选取天津市第一中心医院进行手术治疗的肝癌(HCC)和胆道闭锁(BA)患者各30例,手术切除肝组织后,室温放置0、0.25、0.5、1、2、3、5和6 h后,分别从基因水平、蛋白水平及形态学水平对组织质量进行检测,提取总RNA及基因组DNA,分别检测浓度、纯度及完整性(RIN/DIN值),荧光定量PCR检测组织样本冷缺血0、6 h后ALB基因表达水平;免疫组化方法检测组织样本冷缺血0、6 h后Hep Par1、CK19、CD34、Vimentin蛋白表达情况,Westernblot检测组织样本冷缺血0、6h后ALB蛋白表达水平;HE染色观察组织样本冷缺血0、6 h后组织及细胞形态学变化。结果 DNA产量、RNA纯度和RNARIN随时间变化,时间效应具有统计学意义。组间效应不显著,表明肝癌和胆道闭锁组间没有差异。DNA产量和RNA RIN的交互效应有统计学意义,说明时间的影响随着组别不同而有所不同。与冷缺血0 h相比,肝癌、胆道闭锁组织样本冷缺血6 h后ALB基因表达水平降低,差异具有统计学意义(P <0.05);免疫组化方法检测组织样本冷缺血0、6h后Hep Par1、CK19、CD34、Vimentin蛋白表达情况均无变化,Western blot检测显示组织样本冷缺血0、6 h后ALB蛋白表达水平无显著变化;石蜡切片HE染色显示样本冷缺血0、6 h后组织及细胞形态学无变化。结论 冷缺血时间对肝组织样本中核酸质量具有显著影响,缩短冷缺血时间可获得高质量肝组织样本。

冷缺血时间与胆道闭锁肝组织RNA质量的相关性分析

目的分析冷缺血时间与胆道闭锁肝组织样本中RNA浓度、纯度及完整性(RIN)的相关性,为获得高质量肝组织样本提供标准。方法选取天津市第一中心医院30例因胆道闭锁行肝移植术患者的肝组织,室温放置0、0.25、0.5、1、2、3、5和12 h后分别加入RNAlater,4℃过夜,提取总RNA,检测RNA浓度、纯度及RIN值,根据浓度计算出产量,运用单因素方差分析分析冷缺血时间与胆道闭锁肝组织样本中RNA产量、纯度及RIN值的相关性,典型相关分析分析不同冷缺血时间后组织样本RNA产量、纯度及RIN值之间相关性。结果组织样本冷缺血0、0.25、0.5、1、2、3、5和12 h后,每10mg组织样本的RNA产量分别是(9.123±0.530)、(9.220±0.606)、(9.000±0.862)、(9.067±0.498)、(9.027±0.523)、(9.143±0.627)、(9.113±0.446)和(9.193±0.492)μg(P=0.78)。RNA纯度的比值分别为1.914±0.065、1.896±0.060、1.904±0.053、1.907±0.057、1.896±0.057、1.888±0.050、1.908±0.060和1.899±0.059(P=0.74)。RIN值分别为9.077±0.104、8.777±0.138、8.650±0.187、8.197±0.188、7.963±0.227、7.597±0.301、4.433±0.272和3.747±0.236(P=0.000)。单因素方差分析显示冷缺血时间与RNA的产量和纯度均无相关性,与RIN值显著相关。典型相关分析显示不同冷缺血时间后组织样本RNA产量与纯度、产量与RIN值及纯度与RIN值之间均无相关性。结论冷缺血时间与胆道闭锁肝组织RNA质量具有显著相关性,缩短冷缺血时间可获得高质量RNA。

维生素D_(3)对阿尔茨海默病患者认知功能及外周炎性因子的干预研究

目的评估维生素D_(3)干预12个月后对阿尔茨海默病(AD)患者认知功能和外周血炎性因子标志物的影响.方法将210例AD患者随机分为干预组和对照组,每组各105例患者,干预组给予维生素D_(3)(800 U/d)补充12个月,对照组给予安慰剂;采用重复测量方差分析对两组患者基线、6个月和12个月时的认知功能评分以及外周炎性因子水平进行干预效果评估.结果随访期间,干预组血清25-羟基维生素D_(3)[25(OH)D_(3))]水平和1,25-二羟维生素D_(3)[1,25(OH)_(2)D_(3)]水平与对照组相比具有显著上升趋势(F=712.086、372.038,均P<0.001);干预组全智商、言语智商以及操作智商评分的变化在组别、时间以及两者的交互作用中的差异均具有统计学意义(均P<0.001);与对照组比较,干预组白细胞介素-6(IL-6)水平(F=341.344,P<0.001)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(F=9.580,P<0.001)水平呈明显下降趋势,Aβ40/Aβ42比值显著上升(F=4.617,P=0.010),组别和时间具有交互效应;除干预效应外,25(OH)D_(3)的基线浓度与全智商(β=0.016,P=0.031)和言语智商(β=0.017,P=0.031)得分有显著的相关性.结论补充维生素D_(3)(800 U/d)12个月可改善AD患者的认知功能,并降低外周血炎性因子的水平.