CCL21通过上皮间质转化促进胰腺癌Panc-1细胞的迁移

目的研究C-C趋化因子配体21(CCL21)促进胰腺癌细胞迁移的作用机制。方法 TranswellTM检测不同浓度CCL21对胰腺癌Panc-1细胞的趋化作用;实时定量PCR检测穿梭到下室的胰腺癌细胞C-C趋化因子受体7(CCR7)mRNA的表达水平;Western blot法和免疫荧光法检测穿梭至TranswellTM下室胰腺癌细胞CD133及上皮间质转化(EMT)的特定蛋白表达。以TranswellTM小室的上室细胞作为对照组。结果在(0、50、100、200)ng/m L CCL21的趋化作用下,穿梭到下室的Panc-1细胞数分别为(13.00±3.00、78.00±9.00、161.00±11.00、281.00±17.00),四组细胞数差异具有统计学意义;随着CCL21浓度增高,穿梭到下室的细胞数增多;CCL21趋化到下室的Panc-1细胞比未穿梭的上室Panc-1细胞CCR7 mRNA的表达水平增高。穿梭到下室的Panc-1细胞CD133、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、波形蛋白(vimentin)、上皮性钙黏素(E-cadherin)蛋白相对表达量分别为(0.46±0.03、0.42±0.04、2.94±0.15、0.12±0.02),与上室细胞相比,差异均具有统计学意义。结论 CCL21对高表达CCR7的胰腺癌干细胞具有趋化作用。CCL21通过EMT及上调MMP-9促进胰腺癌干细胞的转移。

精氨酸酶1在食管癌患者外周血的表达及其临床意义

目的检测精氨酸酶1(arginase1,Arg1)在食管癌中的表达,分析其与髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressorcells,MDSCs)消长的关系,探讨癌症患者机体免疫抑制状态的可能机制。方法应用流式细胞术检测30例食管癌患者PBMC中的MDSCs比例;实时荧光定量PCR检测PBMC中Arg1、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆Arg1,IL-6和TNF-α含量。结果食管癌患者外周血PBMC中MDSCs比例及Arg1的mRNA水平均明显高于健康对照组(P<0.05),而IL-6和TNF-α的mRNA水平均低于健康对照组(P<0.05)。食管癌患者血浆Arg1含量高于健康对照组(P<0.05),而IL-6和TNF-a含量与健康对照组相比无明显差异(P>0.05)。此外,食管癌患者Arg1 mRNA水平和蛋白水平均与MDSC含量呈正相关(P<0.01)。结论 Arg1在食管癌患者外周血中的高表达与MDSCs水平和食管癌的发生、发展有着密切的关系,其检测将有助于临床食管癌的辅助诊断和预后判断。

老年冠心病患者血栓弹力图与常规凝血试验的相关性

目的分析不同病情老年冠心病患者凝血功能特点,探讨血栓弹力图(TEG)各参数与常规凝血功能指标的相关性。方法回顾性分析133例老年冠心病患者TEG和常规凝血功能检测结果,分为稳定型心绞痛(SAP)组32例、不稳定型心绞痛(UAP)组53例和急性心肌梗死(AMI)组48例。比较各组凝血功能指标的差异性,并进一步分析TEG参数与常规凝血功能指标之间的相关性。结果各组TEG参数凝血反应时间(R值)、凝血块形成时间(K值)、血凝块形成速率(α角)、血凝块形成后最大振幅(MA值)、血凝块力学强度(G值)和凝血综合指数(CI)比较差异均有统计学意义(均P<0.05,P<0.001)。各组R值:SAP组>UAP组>AMI组,CI值:SAP组<UAP组<AMI组,差异均有统计学意义(均P<0.001);AMI组K值明显低于SAP组和UAP组,AMI组α角明显高于SAP组和UAP组,AMI组MA值、G值均明显高于SAP组,差异均有统计学意义(均P<0.05,P<0.001)。各组活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体(D-D)及血小板计数(PLT)比较差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.001),各组凝血酶原时间(PT)和国际标准化比值(INR)比较差异无统计学差异(P>0.05)。AMI组和UAP组APTT明显低于SAP组,差异有统计学意义(P<0.05);AMI组FIB、D-D和PLT均明显高于SAP组,差异均有统计学意义(P<0.05),AMI组TT明显低于UAP组,UAP组TT明显高于SAP组,差异均有统计学意义(均P<0.05),AMI组高凝图形出现的比例明显高于SAP组及UAP组,差异有统计学意义(P<0.001)。TEG参数R值与PT、INR、D-D及PLT呈负相关(均P<0.05);K值与INR、FIB、D-D、PLT呈负相关,与TT呈正相关;α角与TT呈负相关,与PT、INR、FIB、D-D、PLT呈正相关;MA值与G值与FIB、PLT呈正相关,与TT呈负相关;CI与FIB、D-D、PLT呈正相关,与TT呈负相关。结论AMI和UAP患者,特别是AMI患者存在高凝状态,血栓形成具有更高风险。老年冠心病患者TEG参数与常规凝血功能指标存在一定相关性,TEG可以有效评估冠心病患者的病情,用于监测其凝血功能具有较高的价值。

胶原诱导的关节炎小鼠脾脏髓样抑制细胞检测

研究髓样抑制细胞(myeloid-derived suppressor cell,MDSC)在II型胶原诱导的关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠发病过程中的动态变化。使用牛II型胶原建立DBA/1J小鼠CIA模型并进行关节炎指数评分。在CIA诱导的第21d、28d、35d、40d和45d,采用流式细胞术检测CIA小鼠及正常对照小鼠脾脏中CD11b+Gr-1+的MDSC比例动态变化。采用流式细胞术检测第35dCIA小鼠和正常小鼠脾脏MDSC表面CD80、CD86和MHCⅡ分子的表达水平。结果发现,CIA造模小鼠脾脏中MDSC比例在第二次免疫时(第21d)即明显增高,至第28d达最高峰(P均<0.05)。CIA诱导第35天脾脏中MDSC比例和绝对细胞数较正常对照组明显升高(P<0.05)。CIA小鼠脾脏MDSC CD80和CD86的表达水平高于正常对照组(P<0.05),但MHCⅡ的表达水平在模型组与正常对照组间无显著差别(P>0.05)。MDSC在CIA小鼠造模和发病过程中呈现规律性的变化,提示MDSC可能参与了类风湿关节炎发展的免疫病理过程。

无需抽提RNA直接定量血浆microRNAs的实时荧光定量PCR方法的建立与评价

目的建立无需抽提RNA直接以血浆中的microRNAs（miRNAs）作为模板进行实时荧光定量PCR检测的新方法。方法方法学建立。采集健康人EDTA—K，抗凝静脉血并分离血浆，取7．5μl血浆用等量含2．5％（体积比）Tween20的缓冲液处理后进行逆转录及PCR，建立血浆miRNAs直接检测法。用该方法检测健康人血浆标本中U6snRNA、miR-24—1—5p和miR--4634表达水平，评估其扩增的特异性和扩增效率。同时与传统的抽提RNA定量PCR检测法的阈值循环数（cq）值进行比较并作相关性分析。另外，应用建立的血浆直接检测法，比较了混合引物和单个引物逆转录法检测健康人血浆标本中U6snRNA、miR-24—1—5p和miR-4634结果的一致性。结果血浆直接检测法融解曲线显示健康人血浆标本中U6、miR-24—1—5p和miR-4634扩增产物分别在8l、83、84．2℃时出现单一峰，无引物二聚体峰和其他非特异峰出现。血浆直接检测法检测miR．24—1—5p扩增效率为1．1，同一份样本中U6、miR-24—1—5p和miR-4634这3种基因的扩增曲线平行，说明扩增斜率一致。直接检测法检测miR-4634的cq值为30．98±0．17，高于RNA抽提法的29．22±0．21，差异有统计学意义（t=8．475，P〈0．01），而2种方法检测u6（直接检测法32．43±0．08，RNA抽提法32．57±0．06；t=1．354，P〉0．05）、miR-24—1-5p（直接检测法20．73±0．14，RNA抽提法21．064-0．21；t=1．749，P〉0．05）结果差异均无统计学意义。2种方法检测U6（r=0．8605，P〈0．01）、miR．24—1—5p（r=0．7289，P〈0．05）和miR-4634（r=0．7485，P〈0．01）结果具有较好的相关性。混合引物和单个引物逆转录后PCR的cq值之间无明显差异。结论建立的血浆直接检测法只需对血浆标本进行简单的预处理，并可使用混合引物进行逆转录定量PCR，具有操作简便、检测成本低等优点，值得进一步推广应用。（中华检验医学杂志．2014，37：119－122）

小鼠骨髓及脾脏髓源抑制细胞Notch分子表达分析

为研究Notch信号途径相关分子在小鼠髓源抑制细胞(MDSC)中表达水平,以CD11b+和Gr-1+为表面标记,采用流式细胞术分选出小鼠骨髓与脾脏MDSC,进而采用定量RT-PCR技术检测Notch 4种受体、5种配体及其下游靶基因Hes-1的mRNA表达水平。结果发现,骨髓中CD11b+Gr-1+细胞(MDSC)比例远高于脾脏,达总细胞的46%,而脾脏MDSC仅占总细胞的4.4%左右。骨髓与脾脏MDSC表达Notch四种受体分子,四种受体分子在两种MDSC中表达水平未见明显差异(P>0.05)。骨髓MDSC Dll4表达水平明显高于脾脏MDSC(P<0.001),而Jagged1、Jagged2和Dll1三种配体分子在来源于两种淋巴器官的MDSC中表达水平未见明显差异(P>0.05),二者均不表达Dll3。与骨髓MDSC相比,脾脏MDSC Hes-1mRNA表达明显增高(P<0.01)。结果提示Notch信号途径可能在MDSC成熟与迁移中发挥一定的作用。