某院精神科住院患者艰难梭菌定植的分子流行病学特征

目的研究精神科住院患者艰难梭菌定植的分子流行病学特征,并探讨定植的相关因素。方法于2020年6月1日至9月30日期间,收集丽水市第二人民医院精神科住院患者的粪便样本。分离培养艰难梭菌,并进行毒素基因鉴定、多位点序列分型和抗生素敏感性试验。结合患者的临床资料,分析艰难梭菌定植的相关因素。结果共收集粪便样本442份,分离到24株(5.4%)艰难梭菌。其中,20株为TcdA和TcdB毒素基因阳性、二元毒素基因阴性(A+B+CDT-),3株为A-B+CDT-,1株为A+B+CDT+。共鉴定出14种序列分型(ST),包括1株高毒力ST11型。所有菌株对甲硝唑、万古霉素、利福平和哌拉西林敏感,但对环丙沙星(95.8%)、克林霉素(87.5%)和红霉素(62.5%)的耐药率较高。二元Logistic回归分析结果显示,在不同科室中,年龄(≥60岁)、住院天数(>200 d)和服用劳拉西泮片与老年精神科患者艰难梭菌定植具有显著相关性(OR=3.762~15.556,P<0.05),而住院天数(>20 d)与早期干预科患者艰难梭菌定植具有显著相关性(OR=0.004,P<0.001)。结论研究发现精神科住院患者存在5.4%的艰难梭菌定植率,年龄较大、住院天数较长且长期服用精神治疗性药物的患者与艰难梭菌定植间存在相关性,需加强院内感染防控监测进而遏制艰难梭菌在精神科的暴发和传播。

橄榄苦苷对D-半乳糖诱导衰老小鼠的抗衰老作用研究

目的:探讨橄榄苦苷抗衰老作用及其机制。方法:采用小鼠皮下注射D-半乳糖复制衰老模型,将30只昆明种小鼠随机分3组:正常组、模型组和橄榄苦苷组,每组10只,分别给予生理盐水、D-半乳糖、橄榄苦苷+D-半乳糖;42 d后测定胸腺、脾脏指数,取血、肝、脑、肾、脾测定丙二醛(MDA)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)以及晚期糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)的含量。结果:与模型组比较,橄榄苦苷能显著提高衰老模型小鼠胸腺指数(P<0.05)和脾脏指数(P<0.01);显著降低MDA含量(P<0.01)和AGEs水平(P<0.05)并提高T-SOD(P<0.05)、GSH-Px(P<0.05)和CAT活力(P<0.01)。结论:橄榄苦苷可通过增强机体免疫功能、提高抗氧化能力等发挥其延缓衰老的作用。

艰难拟梭菌甲基化酶CamA蛋白的原核表达、纯化及其活性

目的 原核表达具有甲基化酶活性的艰难拟梭菌CamA(Clostridiodies difficile adenine methltransferase A,CamA)蛋白。方法 PCR扩增艰难拟梭菌1870标准菌株CamA蛋白的基因序列,克隆至质粒pGEX-4T-1-MBP中,转化至大肠埃希菌HB101,经1 mmol/L IPTG诱导表达重组目的蛋白,利用Amylose Resin纯化后,CamA蛋白再经烟草蚀纹病毒(tobacco etch virus,TEV)蛋白酶酶切,采用体外MTase-GloTMMethyltransferase Assay分析技术验证其甲基化活性。结果 PCR测序结果显示克隆的CamA基因序列正确,未发生碱基突变;重组表达质粒pGEX-4T-1-MBP-CamA经EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后显示1 731 bp的CamA基因已连接至载体上;表达的重组蛋白相对分子质量约为108 800(含1个MBP标签),经Amylose Resin纯化后,纯度达90%以上;在20μmol/L DNA和20μmol/L S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine,SAM)的条件下室温反应30 min,0.5μg CamA能产生浓度约为101.60 nmol/L的S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosyl-L-homocysteine,SAH),酶活性为(0.339±0.027)U/mg。结论 成功表达并纯化了艰难拟梭菌CamA蛋白,其具有甲基化酶活性,为后续进一步研究CamA的功能及其在艰难拟梭菌感染发生、发展及治疗中的作用奠定了基础。