自噬基因Beclin1与上皮性卵巢癌发生、发展的相关性研究

背景与目的:有研究表明自噬的抑制与肿瘤的发生有关,沉默自噬基因Beclin1可导致多种恶性肿瘤的发生。本研究探讨Beclin1基因在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用,并分析其过表达对人卵巢癌细胞株SKOV3体外生长的影响。方法:用免疫组化检测25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织的Beclin1表达;构建真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,脂质体法分别将质粒pcDNA3.1/Beclin1、pcDNA3.1转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,并用流式细胞仪检测凋亡情况。结果:正常卵巢组织和良性卵巢肿瘤组织中Beclin1表达的积分光密度(integrated optical density,IOD)值均较高,两者之间的差异无显著性(P>0.05);交界性卵巢肿瘤组织中Beclin1的表达降低,而在上皮性卵巢癌中Beclin1表达的IOD值最低,与正常卵巢组织比较差异有显著性(P<0.05)。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后细胞生长抑制率为(68.75±5.10)%,而pcDNA3.1转染组为(10.91±4.20)%,两者之间差异有显著性(P<0.05)。pcDNA3.1/Beclin1转染后72h SKOV3细胞的凋亡率为19.07%,高于pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有显著性(P<0.05)。结论:Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下调,可能与上皮性卵巢癌的发生、发展有关;自噬基因Beclin1的过表达可抑制人卵巢癌细胞SKOV3的增殖,并诱导其凋亡。

自噬基因Beclin1对上皮性卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用

目的观察自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞株SKOV3中过表达对肿瘤细胞在体内、体外生长活性的影响。方法脂质体法将重组质粒pcDNA3.1/Beclin1转染人卵巢癌细胞株SKOV3,MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,流式细胞仪检测转染后肿瘤细胞的凋亡及自噬情况。将重组质粒pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后,接种到裸鼠皮下,观察体内致瘤活性及生长情况;免疫组化检测瘤组织Beclin1蛋白的表达。结果Beclin1在SKOV3中的过表达后抑制肿瘤细胞在体外的生长,抑制率为58.68%;pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3的凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有显著性(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞MDC平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。重组质粒pcDNA3.1/Beclin1使SKOV3细胞在裸鼠体内成瘤时间延长,瘤体体积及质量明显小于空质粒组和空白对照组,抑瘤率为50.27%。结论自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可抑制SKOV3在体内、体外的增殖,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。

上皮性卵巢癌中自噬基因Beclin 1的表达及其调控相关信号传导途径的研究

目的研究自噬基因Begin1及其调控相关信号传导途径磷酸肌醇-3激酶／蛋白激酶B（P13K／PKB）与上皮性卵巢癌发生发展之间的关系。方法用免疫组化的方法对25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织进行Beclin1、ClassⅠP13K（p110α）、ClassⅡP13K（hvps34）及其下游的磷酸化PKB（p-PKB）的表达水平进行检测。结果Beclin1、hvps34在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织中表达较高，在交界性卵巢肿瘤组织中开始下降，在上皮性卵巢癌中的表达最低（P＜0．05）；p110a、P-PKB在交界性卵巢肿瘤组织中开始升高，在上皮性卵巢癌中的表达高于其它3组（P＜0．05）。卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期、高中分化、淋巴结无转移的卵巢肿瘤组织中Beclin1的表达分别高于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结有转移者（P＜0．05），而p110α及P—PKB的表达则分别降低（P＜0．05）。结论自噬基因Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达下词，对自噬起调控作用的P13K／PKB信号通路中的成分p110α、hvps34、P—PKB存在表达异常，可能与上皮性卵巢癌的发生、发展及临床预后有关。

人工流产术后阴道流血45天

1病历摘要患者，33岁，已婚，G3P2。因人工流产术后阴道流血45天于2011年12月20日人我院。患者末次月经：2011年9月16日，停经35天时出现早孕反应，自测尿HCG（＋），于2011年11月5日到私人诊所行“人工流产术”，术前行阴道B超（具体不详）。术后一直有少量阴道流血，早孕反应未消失，遂于2011年11月23日到云南私人医院行B超检查，提示：宫腔内液性暗区（考虑宫腔积液，变形孕囊待鉴别），考虑“人工流产不全”，行“清官术”，术后仍有少量阴道流血。

胎盘早剥45例临床分析

目的评价胎盘早剥的高危因素以及对母儿结局的影响.方法回顾分析我院收治的胎盘早剥患者45例.结果在13例重度胎盘早剥中,新生儿窒息9例,发生率为69.23%,围产儿死亡7例,发生率为53.85%,均高于轻度胎盘早剥组,差异有统计学意义(P<0.05).子宫胎盘卒中组中新生儿窒息、围产儿死亡的发生率分别为90%、70%,明显高于无卒中组,差异有统计学意义(P<0.05).重度胎盘早剥、子宫胎盘卒中组产后出血的发生率明显高于轻度胎盘早剥、无子宫胎盘卒中组,差异有统计学意义(P<0.01).结论胎盘早剥的程度及有无子宫胎盘卒中与母儿结局有密切关系,早期诊断、正确处理对母儿预后极为关键.

上皮性卵巢癌组织中Beclin1、PTEN的表达及其临床相关性研究

目的探讨上皮性卵巢癌自噬基因Beclin1和PTEN蛋白的表达及其临床相关性.方法采用免疫组化方法检测25例正常卵巢组织、25例良性卵巢上皮性肿瘤、19例卵巢交界性肿瘤及69例卵巢上皮性癌组织中Beclin1及PTEN蛋白表达,比较四组组织中Beclin1及PTEN表达水平,以及与卵巢癌临床病理特征之间的关系.结果(1)Beclin1、PTEN蛋白在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织中表达较高,在交界性卵巢肿瘤组织中开始下降,在上皮性卵巢癌中表达最低(P<0.05);(2)Ⅰ～Ⅱ期、高中分化、淋巴结无转移的卵巢癌组织中Beclin1、PTEN的表达高于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结有转移者,差异有统计学意义(P<0.05).结论Beclin1、PTEN在上皮性卵巢癌中表达下调,可能与卵巢上皮性癌的发生、发展及临床预后有关.

孕妇宫颈三种病原体感染对妊娠结局的影响

本研究随机筛查妊娠 37w～ 4 1w的孕妇 136例 ,对其宫颈管分泌物进行CT、UU、NG的检测 ,并追踪观察其妊娠结局 ;另外选择 4 0例妊娠 32w～ 4 1w的胎膜早破患者 4 0例 ,与胎膜未破者进行病例对照研究 ,比较两组间CT、UU、NG的感染情况。结论 CT感染与胎盘粘连有关 (P <0 0 5 ,OR 2 70 6 3) ,CT、UU、NG混合感染时胎盘粘连发生的危险性明显增加 (P <0 0 5 ,OR 16 .80 0 0 ) ;UU感染是子宫内膜炎的高危因素 (P <0 0 5 ,OR 3 4 2 6 5 ) ;CT、UU感染增加胎膜早破发生的危险性 (P <0 0 5 ,OR分别为 4 2 75 0、4 0 133) ,故产前应常规筛查、治疗CT、UU、NG感染、改善妊娠结局。

自噬基因Beclin 1在SKOV3细胞中的表达及其调控相关信号传导途径的研究

目的探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达后自噬相关信号调控通路PI3K/PKB途径中ClassⅠPI3K(p110α)、p-PKB和ClassⅢPI3K(hvps34)的表达变化以及对肿瘤细胞的自噬活性的影响.方法将自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞;分别用荧光定量RT-PCR和Western blot在mRNA和蛋白水平检测用流式细胞仪检测Beclin1、p110α、hvps34和p-PKB的表达;在电镜和荧光显微镜下观察自噬现象,用流式细胞仪检肿瘤细胞自噬情况.结果 pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞Beclin1表达在mRNA和蛋白质水平明显高于转染空质粒pcDNA3.1和未转染细胞;PcDNA3.1/Beclin1转染后hvps34表达上调,而p110α、p-PKB的表达下调.PcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在在电镜下可见大量自噬囊泡形成.在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC阳性细胞明显增加.流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞MDC平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组.Beclin 1在SKOV3中的过表达后抑制肿瘤细胞在体外的生长,抑制率为58.68%.结论自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可使ClassⅢPI3K(hvps34)表达上调,ClassⅠPI3K(p110α)及其下游的p-PKB表达下调,诱导肿瘤细胞自噬活性增加,抑制SKOV3在体外的增殖.

论著上皮性卵巢癌中p110α、hvps34及p-PKB的表达及临床意义

目的研究信号传导途径PI3K/PKB中的成分p110α、hvps34、p-PKB在上皮性卵巢肿瘤中的表达及其与卵巢癌临床病理参数之间的关系.方法应用免疫组化检测25例正常卵巢组织、25例良性上皮性卵巢肿瘤、19例交界性上皮性卵巢肿瘤及69例上皮性卵巢癌组织中ClassⅠPI3K(p110α)、ClassⅢPI3K(hvps34)及其下游的磷酸化PKB的表达水平,并分析它们与临床病理参数之间的关系.结果(1)hvps34在正常卵巢组织与良性卵巢肿瘤组织中表达较高,在交界性卵巢癌组织中开始下降,在上皮性卵巢癌中的表达最低;p110α、p-PKB在交界性卵巢癌组织中开始升高,在上皮性卵巢癌中的表达明显高于其它3组,差异有统计学意义(P<0.05);(2)卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期、高中分化、淋巴结无转移的卵巢癌组织中p110α及p-PKB的表达均低于Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结有转移者,差异有有统计学意义(P<0.05).结论在上皮性卵巢癌中PI3K/PKB信号通路中的成分p110α、hvps34、p-PKB存在表达异常,可能与上皮性卵巢癌的发生、发展有关.

自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中的蛋白表达及其临床意义

目的探讨自噬基因Beclin 1在宫颈鳞癌中的蛋白表达以及与肿瘤发生发展的关系。方法采用免疫组化SP法检测81例宫颈鳞癌、20例宫颈上皮内瘤样病变（CIN，Ⅱ～Ⅲ级）和20例正常宫颈组织中自噬基因Beclin 1的蛋白表达。结果宫颈鳞癌组织中Beclin 1阴性、弱阳性、强阳性表达率依次是43．2％（35／81）、34．6％（28／81）、22．2％（18／81），与正常宫颈和宫颈上皮内瘤样病变组相比，Beclin 1在宫颈鳞癌中的表达显著下调（P=0．011）。宫颈鳞癌中Beclin 1的表达在不同FIGO分期、年龄、宫颈肌层浸润深度、宫颈肿瘤大小、大体类型间的差异无统计学意义。但在有无盆腔淋巴结转移、不同肿瘤分化程度间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论自噬基因Beckn 1在宫颈鳞癌中蛋白表达下调，并与宫颈鳞癌盆腔淋巴结转移和肿瘤分化程度有关。

静脉超声造影对子宫腺肌症和子宫肌瘤的鉴别诊断价值

目的探讨静脉超声造影对子宫腺肌症和子宫肌瘤的鉴别诊断价值。方法对2017年12月至2019年12月就诊于昆明医科大学第一附属医院妇产科133例子宫肌瘤和子宫腺肌症的患者实施常规超声检查及静脉超声造影检查;与术后病理检查结果对照,对比常规超声与静脉超声造影检查之间的准确性差异,分析子宫肌瘤与子宫腺肌病之间的超声影像学特点。结果(1)常规超声、超声造影诊断子宫肌瘤的准确率分别为92%,98%,二者差异有统计学意义(P<0.05);诊断子宫腺肌症的准确率分别为91%,100%,二者差异有统计学意义(P<0.05);(2)静脉超声造影检查,子宫腺肌症患者开始时间早于子宫腺肌瘤患者,达峰时间早于子宫肌瘤患者,峰值强度低于子宫肌瘤患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论(1)静脉超声造影在子宫腺肌症与子宫肌瘤的诊断中优于常规超声检查;(2)子宫腺肌症与子宫肌瘤在超声造影检查中有各自不同特征性改变,可作为鉴别两者的要点。

顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬和凋亡的研究

目的:研究顺铂诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬和凋亡的发生情况,并探讨可能的发生机制。方法:顺铂干预卵巢癌SKOV3细胞后,用MDC染色荧光显微镜观察自噬囊泡及流式细胞仪检测自噬率;AnnexinV-FITC/PI双染色流式细胞仪检测凋亡率及TUNEL法检测凋亡指数;Western blot检测自噬蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ和凋亡蛋白caspase9,caspase3的表达。结果:顺铂干预SKOV3细胞后,MDC阳性细胞数明显增多;自噬率提高(P<0.05);凋亡率提高(P<0.05);凋亡指数提高(P<0.05);自噬蛋白Beclin1,LC3-Ⅱ和凋亡蛋白caspase9,caspase3表达均增强(P<0.05)。结论:顺铂不仅可诱导卵巢癌SK-OV3细胞凋亡,而且可诱导卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。

自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其对宫颈癌细胞HeLa生长的作用

目的构建自噬基因Beclin 1小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,探讨Beclin 1抑制后对宫颈癌HeLa细胞生长的作用。方法根据人Beclin 1 mRNA编码序列,设计RNA干扰靶点,构建Beclin 1 shRNA表达质粒,脂质体法转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响。MTT法分析其对细胞增殖、流式细胞仪检测其对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果构建的shRNA表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染质粒的细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低。结论成功构建了针对自噬基因Beclin 1的shRNA表达载体,通过转染HeLa细胞,可有效抑制细胞中Beclin 1的表达,并促进细胞生长,抑制凋亡。

自噬基因Beclin1抑制宫颈癌HeLa细胞裸鼠移植瘤生长的研究

目的:研究自噬基因Beclin1对裸鼠宫颈癌细胞株HeLa移植瘤的抑制作用。方法:将自噬基因Beclin1真核表达质粒pcDNA3.1(+)-Beclin1经脂质体包裹后转染人宫颈癌HeLa细胞,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Westernblot检测其mRNA及蛋白水平的表达,MTT法检测细胞生长抑制率;将HeLa细胞接种于裸鼠右前肢腋下建立裸鼠人宫颈癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分别以重组质粒pcDNA3.1(+)-Bec-lin1、pcDNA3.1(+)和生理盐水200μl每两天1次直接瘤内注射,连用3周后,测量3组肿瘤大小并观察肿瘤组织形态学改变。结果:pcDNA3.1(+)-Beclin1能使HeLa中Bec-lin1mRNA及蛋白表达增加(P<0.05),并显著抑制HeLa细胞的生长,呈现时间依赖性,与其余两组相比,有显著统计学差异(P<0.05);经重组质粒治疗21天后,裸鼠皮下移植瘤生长缓慢,相对于对照组瘤体明显缩小、瘤重明显减轻(P<0.05),病理检查可见,pcD-NA3.1(+)-Beclin1处理组瘤块内细胞坏死减少,结缔组织增生,而对照组中癌细胞分布呈弥漫性。结论:自噬基因Beclin1可以抑制HeLa移植瘤的生长。

自噬基因Beclin1在宫颈鳞癌中的表达及其与HPV感染的关系

目的探讨自噬基因Beclin1在宫颈鳞癌中的蛋白表达以及对人乳头状瘤病毒(HPV)16E6、E7感染的影响。方法采用免疫组化SP法检测81例宫颈鳞癌、20例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)Ⅱ-Ⅲ级和20例正常宫颈组织中自噬基因Bec-lin1的表达,采用PCR扩增法检测宫颈鳞癌组织中HPV16E6、E7的DNA状况。结果宫颈鳞癌组织中Beclin1阴性、弱阳性、强阳性表达率依次是43.2%(35/81),34.6%(28/81),22.2%(18/81),分别与正常宫颈组15.0%(3/20)、30.0%(6/20)、55.0%(11/20)和宫颈上皮内瘤样病变组20.0%(4/20)、30.0%(6/20)、50.0%(10/20)相比,Beclin1在宫颈鳞癌中的表达存在显著下调(P=0.009,P=0.033)。HPV16E6、E7在宫颈鳞癌中的阳性率分别为66.7%和58.0%,HPV16E6、E7感染与宫颈鳞癌中Beclin1蛋白的表达无相关性(r=-0.126,P=0.262;r=-0.125,P=0.270)。结论自噬基因Beclin1在宫颈鳞癌中表达下调,其表达对HPV16E6、E7感染无明显影响。

自噬基因Beclin 1 shRNA表达质粒的构建及其下调凋亡因子caspase-9效应的研究

构建自噬基因Beclin 1的小发夹RNA(shRNA)真核表达质粒,脂质体包裹后体外转染人宫颈癌HeLa细胞株,通过荧光定量PCR(RT-PCR)和Western blot检测其对HeLa细胞自噬基因Beclin 1 mRNA及蛋白表达的影响,并检测细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡情况以及凋亡因子caspase-9 mRNA及蛋白表达的变化。结果表明shRNA真核表达载体可以使HeLa细胞中自噬基因Beclin 1的mRNA及其蛋白含量降低,转染后细胞生长增殖速度加快,凋亡率降低,并伴有caspase-9 mRNA及蛋白量的显著下调。因此,Beclin 1不仅与自噬调控通路有关,而且可以调控凋亡的发生,同时参与两种程序性细胞死亡的过程。

HPV16基因联合细胞角蛋白对宫颈鳞癌淋巴结微转移检测的意义

目的探讨高危型人类乳头状瘤病毒16(HPV16)和细胞角蛋白(cyto keratin,CK)对宫颈鳞癌淋巴结微转移的诊断价值。方法以HPV16 E6/E7特异引物通过PCR方法,检测81例宫颈鳞癌组织及435枚盆腔淋巴结中HPV16DNA;采用免疫组化SP法检测上述组织中CK的表达。结果①宫颈鳞癌组织中HPV16的检出率为62.96%(51/81);CK的表达率为100%(81/81)。②HE染色有转移的淋巴结中,HPV16阳性检出率为90.38%(47/52),CK阳性表达率为100%(52/52);HE染色无转移的淋巴结中,HPV16阳性检出率为11.75%(45/383),CK阳性表达率为7.05%(27/383)。③盆腔淋巴结中HPV16存在和CK表达与患者的FIGO分期、年龄、宫颈肌层浸润深度、宫颈肿瘤大小、大体类型、肿瘤分化程度等临床病理特征均无相关性(P>0.05)。结论宫颈鳞癌中HE染色无转移的淋巴结内存在HPV16基因和CK阳性表达可以提示淋巴结微转移。

正常妊娠妇女、妊娠期高血压及妊娠期糖尿病患者血脂变化的探讨

目的研究正常妊娠妇女、妊娠高血压疾病及妊娠期糖尿病患者的血脂变化.方法选择正常未孕妇女48例,正常孕妇101例,妊娠高血压疾病68例,妊娠期糖尿病48例,分别测定其血脂水平.结果正常妊娠及妊娠期糖尿病的各项血脂总胆固醇(totalcholesterol,TC)、甘油三脂(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoproteincholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-densitylipoproteincholesterol,LDL-C)、载脂蛋白A(apolipoproteinA,ApoA)和载脂蛋白B(apolipoproteinB,ApoB)均比正常未孕妇女升高(P<0.05),差异有显著性.妊娠高血压疾病组除HDL-C外,其余各项均比正常未孕妇女升高(P<0.05),妊娠高血压组与正常妊娠组比较,前者HDL-C和ApoA降低(P<0.05).妊娠期糖尿病和正常妊娠组比较,ApoA降低(P<0.05),子痫前期HDL-C较妊娠高血压降低,而ApoB较妊娠高血压升高(P<0.05).结论血脂代谢异常可能在妊娠高血压疾病和妊娠期糖尿病的发病中起一定作用.