目的:以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因为报告基因,类枯草菌素蛋白酶(sub-tilisin-like protease,Pr1)基因为目的基因,分别构建含有EGFP-Pr1和Pr1-EGFP融合基因的原核表达载体。方法:将Pr1基因分别...目的:以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因为报告基因,类枯草菌素蛋白酶(sub-tilisin-like protease,Pr1)基因为目的基因,分别构建含有EGFP-Pr1和Pr1-EGFP融合基因的原核表达载体。方法:将Pr1基因分别连接到EGFP基因的上游和下游,插入质粒pTWIN1,构建表达载体pEGFP-Pr1和pPr1-EGFP。结果:经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,重组菌株在长波紫外线的照射下,均能发出明亮的绿色荧光,并且诱导菌株破碎后均可检测到Pr1蛋白酶的活性。结论:应用基因工程技术成功构建pPr1-EGFP和pEGFP-Pr1融合基因表达载体,EGFP作为Pr1生物标记分子,有利于进一步开展Pr1基因的特异性功能研究。展开更多
目的:观察灭蚊真菌贵阳腐霉产生类胰蛋白酶(Pr2)所需的诱导条件。方法:通过单因素诱导物、温度、pH值等比较试验摸索其产生Pr2的适宜条件。结果:贵阳腐霉产Pr2的适宜条件是在100 m l基本盐培养基中,以1%蝉蜕为唯一碳氮源,在26℃,初始pH...目的:观察灭蚊真菌贵阳腐霉产生类胰蛋白酶(Pr2)所需的诱导条件。方法:通过单因素诱导物、温度、pH值等比较试验摸索其产生Pr2的适宜条件。结果:贵阳腐霉产Pr2的适宜条件是在100 m l基本盐培养基中,以1%蝉蜕为唯一碳氮源,在26℃,初始pH值8.0,1%的菌丝接种量。结论:本研究初步确定的贵阳腐霉的Pr2产酶条件,为该酶的进一步研究提供了有价值的参考。展开更多
文摘目的:以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)基因为报告基因,类枯草菌素蛋白酶(sub-tilisin-like protease,Pr1)基因为目的基因,分别构建含有EGFP-Pr1和Pr1-EGFP融合基因的原核表达载体。方法:将Pr1基因分别连接到EGFP基因的上游和下游,插入质粒pTWIN1,构建表达载体pEGFP-Pr1和pPr1-EGFP。结果:经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,重组菌株在长波紫外线的照射下,均能发出明亮的绿色荧光,并且诱导菌株破碎后均可检测到Pr1蛋白酶的活性。结论:应用基因工程技术成功构建pPr1-EGFP和pEGFP-Pr1融合基因表达载体,EGFP作为Pr1生物标记分子,有利于进一步开展Pr1基因的特异性功能研究。
文摘目的:观察灭蚊真菌贵阳腐霉产生类胰蛋白酶(Pr2)所需的诱导条件。方法:通过单因素诱导物、温度、pH值等比较试验摸索其产生Pr2的适宜条件。结果:贵阳腐霉产Pr2的适宜条件是在100 m l基本盐培养基中,以1%蝉蜕为唯一碳氮源,在26℃,初始pH值8.0,1%的菌丝接种量。结论:本研究初步确定的贵阳腐霉的Pr2产酶条件,为该酶的进一步研究提供了有价值的参考。