盐生盐杆菌启动子DNA片段的特征序列及其功能分析

利用启动子探针质粒 p KK2 3 2 - 8从古菌盐生盐杆菌中分离到许多具有细菌基因启动子功能的 DNA片段 .对其中 3个片段 RM0 7、RM0 8和 RM13的序列测定 ,发现这 3个片段上均具有典型的细菌基因启动子的保守序列 ( - 3 5和 - 10区 ) ,其中的 2个片段 RM0 7和 RM13还分别具有古菌或真核生物启动子的典型特征序列 .利用大肠杆菌 -酵母菌启动子探针穿梭载体 p YL Z- 2将 3个片段分别导入大肠杆菌和酵母菌中 ,通过检测 ( -半乳糖苷酶活性 ,进一步从功能上获得了确证 .这是首次从结构和功能上发现并证实了来自古菌的 DNA片段上具有二界或三界生物的特征 ,从而为进一步揭示古菌之谜和丰富生物的系统发育和进化关系提供了新的信息和途径 ,并有可能为构建双功能表达载体提供新的启动子来源 .此外 ,在所获得的 3个片段上还发现了类似于细菌σ54启动子的典型序列 ,这是否暗示古菌为了适应极端环境所进行的转录调控有关 ,还有待进一步的研究 .

嗜盐古菌染色体DNA片段在大肠杆菌中的启动子功能(英文)

以启动子探针质粒pKK232-8为载体,用微量量热法研究了源自盐生盐杆菌R1染色体的RM13DNA片段在大肠杆菌HB101中的真细菌启动子功能,该启动子RM13 DNA片段的大小为1000bp(碱基对),它能启动探针质粒pKK232-8上的氯霉素乙酰水解酶基因(即:氯霉素抗性基因Cm),氯霉素抗性水平可达到150 mg·L^(-1),抗性水平较高,启动活性较大.研究结果表明,在盐生盐杆菌染色体上可能存在具有双功能或多功能的启动子DNA片段,这对系统发育、微生物遗传学和生物热化学等均有重要的意义.

具有真细菌基因启动子活性的古生菌DNA片段

以大肠杆菌启动子探测质粒pKK232-8 为载体,用4 组限制性内切酶分别消化古生菌盐生盐杆菌R1(Halobacterium halobium )的染色体DNA,在体外进行重组,转化E.coliDH-5α感受态细胞,得到12 个转化子(T1～T12),其抗性水平分布在10～500 m g/L的区间内. 将这些转化子所含质粒分别命名为pSX1～pSX12,限制性酶切分析表明,这些质粒各插入了一段不同的外源DNA 片段,杂交分析表明,抗性最强的转化子T11 所含质粒pSX11 上插入了一段来源于盐生盐杆菌R1 染色体的DNA 片段. 该DNA 片段在大肠杆菌中具有启动子功能.

盐生盐杆菌DNA片段RM07的-35、-10区缺失分析

RM0 7DNA片段分离自嗜盐古菌———盐生盐杆菌R1 ,该片段不仅在嗜盐古菌内具有启动子功能 ,而且在大肠杆菌中也具有启动子活性。序列分析表明其上确实含有细菌启动子的 35、 1 0保守区。进一步通过缺失分析证实该片段就是在大肠杆菌中具启动功能的DNA片段 :仅含 1 0区而缺失 35区的RM0 7a片段基本上无启动活性 ;而含 35和 1 0区的0 1kb片段RM0 7b具有高于RM0 7的启动活性。研究结果还表明 ,RM0 7片段在大肠杆菌中的启动活性是受环境因素调节的 ,尤其是对氯化钠浓度的提高具有明显的相关性。因此RM0 7片段有可能成为构建双功能表达载体的新启动子资源 ,同时对进一步揭示古菌的融合特征及水平基因转移具有特殊意义。