重症监护病房鲍曼不动杆菌感染调查及泛耐药情况分析

目的了解该市某医院近3年来重症监护病房(ICU)鲍曼不动杆菌感染现状,分析其耐药谱变迁及泛耐药情况,金属酶产生情况,为临床了解及防治院内感染提供依据。方法对该院ICU2005～2007年分离的鲍曼不动杆菌分布及耐药情况进行回顾性分析。细菌鉴定采用法国生物梅里埃公司VITEK-32细菌鉴定仪,常规药敏试验采用K-B纸片法,采用头孢他啶和2-巯基丙酸的双纸片琼脂扩散表型协同试验筛选产金属酶菌株。结果3年间共分离到鲍曼不动杆菌358株,其中2005年87株,2006年102株,2007年169株,其中通过呼吸道感染占82.12%。泛耐药菌株感染率呈现出逐年上升趋势,2005年3株(占3.45%),2006年8株(占7.84%),2007年有21株(占12.43%),且泛耐药菌株感染的发生率与住院时间相关。金属酶表型阳性株共检测出5株,阳性率为15.63%,其中2006年2株,2007年3株。结论鲍曼不动杆菌感染呈逐年上升趋势,以呼吸道感染方式为主,其泛耐药菌株感染率呈上升趋势,金属酶产生率低,不是主要耐药机制。患者住院时间越长感染泛耐药菌株的几率越高。应加强ICU病房环境和人员消毒,加强抗生素的合理使用,控制鲍曼不动杆菌在医院内的定值和播散,重视泛耐药鲍曼不动杆菌监测。

硒对幽门螺杆菌空泡毒素及其重组影响

目的研究硒(Se)对幽门螺杆菌(Hp)空泡毒素(VacA)及重组VacA的影响。方法采用盐析、透析、柱层析、浓缩、抽滤等方法提纯幽门螺杆菌分泌的空泡毒素。通过琼脂糖凝胶电泳、基因序列分析鉴定重组载体,重组VacA产物经Ni-TEDTM蛋白纯化系统纯化,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、及免疫印迹(Western blot)鉴定,间接酶联免疫吸附(ELISA)法检测其抗原特异性。进行细胞培养、细胞爬片;采用分光光度计、倒置显微镜、透射电镜及流式细胞仪等方法检测硒对幽门螺杆菌分泌的VacA及重组毒素蛋白功能的影响。结果12 mmol/L硒即可使幽门螺杆菌形态发生球形变,鞭毛及菌毛出现脱落,溶血作用减弱,硒对VacA空泡毒作用无直接影响(P>0.05);硒通过抑制Hp生长减少VacA产生量从而使空泡毒作用减弱;通过抑制表达VacA的大肠埃希菌生长,减少重组VacA表达量;能增强重组VacA对人胃上皮癌细胞株(SGC-7901)生长抑制作用,使细胞分裂指数、集落形成率、S期细胞数量降低,G1期细胞总数增加;使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素,并随硒浓度增加颜色加深。结论硒能抑制Hp生长,改变Hp的形态及结构;可使重组VacA表达量减少;能增强重组VacA对SGC-7901细胞的生长抑制及诱导细胞凋亡作用;可使表达重组VacA的大肠埃希菌产生脂溶性砖红色色素;不能直接抑制VacA的空泡毒作用。

幽门螺杆菌VacA重组蛋白对SGC7901胃癌细胞的作用

目的:研究幽门螺杆菌空泡毒素(VacA)编码基因在大肠杆菌中的表达产物对SGC7901胃癌细胞的作用.方法:常规培养pET32a-vacA-E.coliBL21(DE3)工程菌株,IPTG诱导重组蛋白表达,产物纯化后作用于胃癌细胞,倒置显微镜及电镜等检测细胞生长情况.结果:重组蛋白作用于胃癌细胞后,倒置显微镜下观察,细胞生长受抑制,其细胞空泡毒作用减弱甚至消失,电镜下可见10%-20%左右细胞呈现轻度空泡变,仅少数细胞空泡变明显,细胞表面微绒毛消失,少量细胞体积减小,并出现了早期核着边固缩等凋亡改变.结论:重组VacA蛋白对胃癌细胞的生长具有抑制作用,空泡毒作用减弱.

幽门螺杆菌VacA重组蛋白表达、纯化及鉴定

目的研究幽门螺杆菌空泡毒素(VacA)编码基因在大肠埃希菌中的表达及纯化重组蛋白的抗原性。方法将PET32 a-vacAE-.coliBL21(DE3)工程菌株常规培养,碱裂解法小量提取重组质粒DNA,琼脂糖凝胶电泳进行酶切鉴定,基因测序法进行插入基因序列分析。重组蛋白采用IPTG诱导表达,镍亲和层析原理提纯,ELISA法检测其抗原性。结果经酶切鉴定表明,插入的基因片段全长约2 240 bp,测序分析及与Genebank比较,可以肯定插入片段为vacA基因,ELISA法检测重组蛋白具有良好的抗原性。结论VacA重组蛋白在大肠埃希菌中成功表达,重组蛋白具有良好的抗原性。

儿童松果体区肿瘤的影像诊断

目的:评价儿童松果体区肿瘤的影像诊断价值。方法:回顾性分析本院经手术病理证实的31例儿童松果体区肿瘤的CT和MRI资料。结果:生殖细胞瘤12例,CT上呈等、高密度,MRI扫描T1WI上呈等低信号,T2WI上呈等、高信号,增强扫描明显强化;畸胎瘤8例(3例成熟型和5例非成熟型),成熟型畸胎瘤囊性为主,CT平扫均呈混杂密度,可见钙化和脂肪密度,MRI上呈混杂信号,可见短T1、长T2的脂肪信号,增强扫描实质部分强化,非成熟型畸胎瘤实性部分较多,可看不到脂肪;松果体母细胞瘤4例,毛细胞型星形细胞瘤2例,混合性生殖细胞瘤1例;精原细胞瘤1例;原基细胞瘤1例,松果体中分化松果体实质瘤1例,脂肪瘤1例。结论:儿童松果体区肿瘤的类型较多,影像表现复杂多样,CT和MRI能基本反映松果体区肿瘤的特点,结合临床病史、性别、年龄等资料综合分析,大部分病例可作出定性诊断。

DWI和^1H-MRS在儿童脑肿瘤中的诊断价值

目的:探讨DWI及单体素1H-MRS在儿童脑肿瘤影像诊断中的价值。方法:对21例脑肿瘤患儿行常规MRI、DWI及单体素1H-MRS成像,在DWI上测量病变实质区3个感兴趣区的ADC值,计算其平均值,单体素MRS感兴趣区选在肿瘤实质部分(强化者选在强化区域),计算感兴趣区的Cho/Cr、NAA/Cho、NAA/Cr比值,分析儿童脑肿瘤的ADC值、各种代谢产物比值的变化规律。结果:儿童高、低级别脑肿瘤实质区的ADC值分别为(0.69±0.18)×10-3和(1.25±0.39)×10-3mm2/s;Cho/Cr比值分别为4.13±1.68、1.68±0.50;NAA/Cho比值分别为0.04±0.07、0.34±0.42;NAA/Cr比值分别为0.22±0.35、1.11±1.02。ADC值、Cho/Cr比值及NAA/Cho比值差异均有显著性意义(P<0.05);NAA/Cr比值无统计学差异(P>0.05);ADC值与NAA/Cho比值(r=0.795,P<0.05)、ADC值与NAA/Cr比值(r=0.809,P<0.05)均有一定相关性且有统计学意义;ADC值与Cho/Cr比值相关性不大,无统计学差异(r=-0.388,P>0.05)。结论:在儿童高、低级别脑肿瘤的影像鉴别诊断中,DWI和1H-MRS可提供重要的参考信息,是常规MRI的重要补充,但最终确诊仍需依靠病理学诊断。

类风湿关节炎患者血清sCD40L水平的变化及意义

采用ELISA法检测32例类风湿关节炎(RA)患者血清可溶性CD40L(sCD40L)水平,Array-360特种蛋白分析仪检测其类风湿因子(RF)和C反应蛋白(CRP)水平,魏氏法测定红细胞沉降率(ESR);并与30例健康人比较。对sCD40L水平与疾病活动性进行相关分析。结果活动期RA患者血清sCD40L、RF、CRP和ESR均明显高于非活动期RA患者及健康人,但非活动期RA患者的CRP、ESR水平均在正常范围。认为血清sCD40L水平与RA活动性有一定相关性;有作为反映RA活动性的指标。

耐甲氧西林葡萄球菌检测方法的比较

目的以PCR法检测葡萄球菌的mecA基因为金标准,比较头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和乳胶凝集法检测耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的优缺点。方法对临床分离的70株葡萄球菌(其中金黄色葡萄球菌40株,凝固酶阴性的葡萄球菌30株)分别用PCR法、头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法和乳胶凝集法检测耐甲氧西林葡萄球菌,药敏试验方法按标准KB(Kirby Bauer)法进行。结果经PCR法检测mecA基因,耐甲氧西林的金葡菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)的发生率分别为75.0%(30/40)和80.0%(24/30);头孢西丁纸片扩散法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为93.3%、95.9%;90.0%和100%;苯唑西林纸片扩散法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为90.0%、87.5%;90.0%和83.3%;乳胶凝集法检测MRSA和MRCNS的敏感性、特异性分别为100.0%、100.0%;100.0%和100.0%。与PCR结果比较,3种方法所获得的结果经统计学分析,差异无显著性。结论头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林纸片扩散法是成批检测的理想方法;乳胶凝集法检测快速,结果可靠,但检测成本高;实验室应选择合适的方法,以提高MRS的检出率。

多b值DWI在儿童脑肿瘤中的初步研究

目的:探讨多b值DWI在儿童脑肿瘤中的应用价值。方法:对31例脑肿瘤患儿行EPI-DWI扫描,采用0～4000s/mm2之间的12个b值。按照单指数模型计算低b值ADC(ADClow)(b≤200s/mm2)、高b值ADC(ADChigh,200s/mm2<b≤4000s/mm2)和标准ADC(ADCstandard,0s/mm2<b≤4000s/mm2);按照双指数模型计算快ADC(ADCfast)、慢ADC(ADCslow)和ADCfast所占比例;用传统的单指数衰减模型计算b=800s/mm2时的ADC值。全部病例均经病理证实,分为低级别肿瘤组和高级别肿瘤组,比较这些参数在两组肿瘤中的鉴别诊断价值。结果:ADClow、ADChigh、ADCstandard、传统的ADC、ADCfast和ADCslow在儿童高、低级别脑肿瘤间的差异均具有显著性意义(P均<0.05)。ADCslow在高、低级别脑肿瘤间的差异最大。结论:当b值在较大范围取值时,双指数模型能反映更多儿童脑肿瘤的组织特征,代表细胞内水分子扩散的ADCslow值在儿童高、低级别脑肿瘤间差异最大,此结论尚需大样本进一步验证。

不同冲洗液在大鼠开放性骨折早期清创中疗效对比实验研究

目的比较不同冲洗液在大鼠开放性骨折早期清创中的疗效,探寻更为安全有效、经济易行的方法。方法选取雄性成年健康SD大鼠45只,随机平均分成3组,建立大鼠开放性股骨干骨折模型,旷置2h后,分别采用生理盐水、碘伏、过氧化氢冲洗创面,比较冲洗前后创面细菌菌落数变化,创面炎症反应和伤口愈合情况。结果 3组大鼠创面冲洗前后菌落计数均明显变化,但组间创面细菌清除率比较差异无统计学意义(P>0.05);过氧化氢冲洗组大鼠创面炎症反应明显;所有大鼠伤口愈合良好。结论开放性骨折早期,单独应用生理盐水,可以清除创面绝大多数细菌,降低感染率,减少对组织创面的刺激,缩短清创时间,经济易行。

亚硒酸钠对幽门螺杆菌所致小鼠胃黏膜组织损伤的免疫保护作用

目的:研究亚硒酸钠对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)所致小鼠胃黏膜组织损伤的免疫保护作用。方法:用细菌悬液灌胃BALB/C小鼠建立HP感染小鼠模型,观察亚硒酸钠对HP感染小鼠(BALB/C小鼠)胃黏膜组织病理变化及CD4、CD8细胞活性的影响。应用快速脲酶试验结合细菌培养确定HP感染。结果:1.0μg/gbw亚硒酸钠对HP感染诱发的胃粘膜组织病变有保护作用。HP可使CD4/CD8细胞比例下调,而亚硒酸钠增强CD4细胞活性,使CD4/CD8细胞比例上升。结论:硒可防止HP对小鼠胃黏膜组织的损伤。其作用机制之一是增强CD4细胞活性,使CD4/CD8细胞比例上调。

34株多重耐药铜绿假单胞菌β内酰胺酶基因及Ⅰ类整合子检测分析

目的:探讨我院临床分离多重耐药铜绿假单胞菌的β-内酰胺酶相关基因及Ⅰ类整合子(intⅠ1和qacE△1-sul1)的携带情况,为临床抗感染治疗和控制医院感染提供依据。方法:采用K-B法对临床分离的铜绿假单胞菌进行药敏试验,选出34株多重耐药菌株,用PCR法检测其相关耐药基因16种。结果:在34株多重耐药铜绿假单胞菌中共有13种耐药基因阳性,阳性率较高的为qacE△1-sul1、oprD2缺失、blaTEM。结论:多重耐药铜绿假单胞菌可同时获得多种耐药基因,临床应根据药敏结果选择用药,以减少耐药菌株的产生,控制院内感染。

Vitamin A对人宫颈癌细胞抑制作用及其机制的研究

为研究Vitamin A对人宫颈癌细胞的抑制作用并探讨其作用机制，通过集落形成和裸鼠致瘤实验探讨Vitamin A对人宫颈癌细胞增殖的影响；用电子显微镜、流式细胞仪和细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法分析Vitamin A诱导宫颈癌细胞凋亡的细胞特征、生物化学特征及凋亡细胞百分率．结果表明：Vitamin A对人宫颈癌细胞集落形成有明显抑制作用（P〈0．01），并可抑制人宫颈癌细胞对裸鼠的致瘤作用（P〈0．01）；电镜下可见细胞固缩，核膜扭曲，核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征；细胞DNA被降解，在琼脂糖凝胶电泳中呈现典型的“阶梯状”图谱；流式细胞仪检测结果显示二倍体核型的特征，在DNA直方图上，G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型；凋亡百分率结果显示Vitamin A浓度在大于等于4μg/ml时可诱导人宫颈癌细胞凋亡，且在4～8μg/ml间呈时间和浓度依赖性．由此得出Vitamin A可抑制人宫颈癌细胞增殖，其机理之一是诱导该细胞凋亡，且呈时间和浓度依赖性．

幽门螺杆菌感染胃黏膜病变中组织硒含量与p16、PCNA关系的研究

为研究幽门螺杆菌感染的胃黏膜病变中组织硒含量与p1 6、PCNA表达相互关系 ,应用免疫组化染色法检测了 1 1 4例经胃镜及病理诊断证实的五种胃黏膜病变标本中p1 6及PCNA的表达 ;应用快速脲酶试验结合Warthin -Starry银染色确定了HP感染 ;应用MK光纤压力密闭微波溶解炉及RF -1 5 0 1荧光分光光度计检测了组织硒含量。结果表明 ,各种HP感染的胃黏膜病变中 ,组织硒含量除DYS与GC无显著性差异外 (P >0 0 5 ) ,其余各组均有显著性差异 (P <0 0 5 ) ,在CSG中升高明显 ,并随病变加重相对降低 (P <0 0 5 ) ,但高于正常组 (P <0 0 5 )。硒含量与PCNA表达呈负相关 (rs=-0 9898,P <0 0 5 ) ,而与p1 6表达呈正相关 (rs=0 91 4 3 ,P <0 0 5 )。p1 6表达HP阳性标本明显低于HP阴性标本 (P <0 0 1 ) ;PCNA表达HP阳性标本明显高于HP阴性标本(P <0 0 1 )。p1 6表达与PCNA表达呈负相关 (rs=-0 60 75 ,P <0 0 1 )。提示HP感染直接或间接地促进PCNA的表达 ,抑制p1 6的表达。HP感染的胃黏膜组织中硒含量明显升高 ,可能不仅是保护性的对抗活性氧增加的反应 。

亚硒酸钠在SGC-7901细胞生长中的抑制作用

目的:研究亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长的影响。方法:应用细胞培养和SRB实验探讨了亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长曲线的影响;应用集落形成试验、分裂指数试验研究了亚硒酸钠对SGC-7901细胞集落形成和分裂指数的影响;应用流式细胞仪检测了亚硒酸钠对SGC-7901细胞生长周期的影响;应用电镜、TUNEL染色及流式细胞仪观察了亚硒酸钠诱导SGC-7901细胞凋亡的作用。结果:亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的生长曲线、集落形成、分裂指数有明显的抑制作用,其抑制作用与其作用浓度和作用时间呈正相关。流式细胞仪检测显示亚硒酸钠作用SGC-7901细胞24h后,细胞周期发生改变,G1期细胞百分率减少,S期细胞百分率增加,与对照组相比有显著性差异(p<0.05);电镜下,细胞核固缩,染色质凝集呈新月形紧贴于核膜周边,核膜扭曲;DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”;TUNEL染色法检测细胞凋亡指数在10.4%～33.4%。结论:亚硒酸钠溶液对SGC-7901细胞的生长具有抑制作用,其抑制作用程度与其作用浓度和时间呈正相关;亚硒酸钠通过阻滞细胞S期抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡可能是其抑制SGC-7901细胞生长的机理之一。

维生素A和4HPR对Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的研究维生素A、N-(4-羟基苯基)维生素甲酰胺(4HPR)对Hela细胞增殖与凋亡的影响。方法通过集落形成试验和裸鼠致瘤试验观察维生素A和4HPR对Hela细胞增殖的影响;通过电子显微镜及细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法观察维生素A和4HPR对Hela细胞凋亡形态的影响及生物化学特征。结果维生素A和4HPR对Hela细胞集落形成有明显抑制作用,并可抑制Hela细胞对裸鼠的致瘤作用(P<0.01);维生素A的抑瘤作用强于4HPR(P<0.01);电镜下可见细胞固缩,核膜扭曲,核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征;细胞DNA被降解,在琼脂糖凝胶电泳中呈现典型的"阶梯状"图谱。结论维生素A和4HPR可抑制Hela细胞增殖,诱导Hela细胞凋亡。

标准菌株和临床菌株oipA基因的检测及其核苷酸序列比对

目的:检测幽门螺杆菌标准菌株NCTC11637及临床分离菌株Hp1和Hp2的oipA基因,分析其核苷酸序列,比对其与国际标准菌株Hp26695的同源性。方法:常规方法培养幽门螺杆菌,提取DNA,PCR法扩增oipA基因,检测其核苷酸序列,并比较其与Hp26695的同源性。结果:NCTC11637及Hp1、Hp2均表达oipA基因。其核苷酸序列与Hp26695比对,NCTC11637有48个突变位点、Hp1有48个突变位点、Hp2有50个突变位点,同源性均为94%。NCTC11637与Hp1的同源性为100%、与Hp2的同源性为97%。结论:NCTC11637、Hp1、Hp2均表达oipA基因,但不同菌株oipA基因的核苷酸序列有所不同。

4HPR对人宫颈癌细胞形态与增殖的影响

目的研究N-(4羟基苯基)维生素甲酰胺(4HPR)对人宫颈癌细胞形态与增殖的影响。方法应用显微镜观察4HPR对宫颈癌细胞形态的影响;磺酰罗丹明B法观察4HPR对宫颈癌细胞增殖的影响。结果4HPR可使宫颈癌细胞的形态发生改变,电子显微镜和激光共聚焦显微镜下可见细胞固缩,核膜扭曲,核染色体聚集成块并靠近核膜等细胞凋亡特征,荧光显微镜下可见凋亡小体;4HPR可抑制人宫颈癌细胞增殖及其对裸鼠的致瘤作用。结论4HPR可使人宫颈癌细胞的形态发生改变,并抑制该细胞增殖。

维生素A对Hela细胞凋亡的影响

目的研究维生素A对Hela细胞凋亡的影响。方法应用光学显微镜、电子显微镜观察维生素A对Hela细胞凋亡形态的影响;分别应用细胞DNA琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞仪分析维生素A诱导Hela细胞凋亡的生物化学特征、细胞特征及凋亡细胞百分率。结果光学显微镜下可见凋亡小体;电子显微镜下可见细胞固缩,核膜扭曲,核染色体聚集成块并靠近核膜等凋亡细胞特征;在琼脂糖凝胶电泳中由于细胞DNA被降解而呈现典型的"阶梯状"图谱;流式细胞仪检测结果显示二倍体核型的特征,在DNA直方图上,G1峰左侧出现亚二倍体细胞群的峰型;维生素A诱导Hela细胞凋亡具有时间依赖性。结论维生素A可诱导Hela细胞凋亡。