蝙蝠葛酚性碱抗神经元缺血再灌注损伤的作用机制

目的探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMd)抗神经元细胞缺血再灌注损伤的作用机制。方法体外培养小鼠神经母细胞瘤细胞株N2a,缺糖、缺氧和缺血清(OGSD)培养90 min,更换正常培养液并加入不同浓度的PAMd,继续培养不同时间后,收集细胞培养液,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性和神经递质含量;收集细胞,测定以下指标:①MTT法检测细胞生存活力;②荧光光度法分析胞质活性氧(ROS)含量;③激光共聚焦分析线粒体跨膜电位;④Western blot检测胞质细胞色素C(Cyt C);⑤采用Caspase 3可见光底物DEVD-pNa测定Caspase 3活性。结果①PAMd促进OGSD处理后的N2a细胞存活;②PAMd抑制OGSD处理后的N2a细胞释放兴奋性神经递质;③PAMd直接清除细胞内的ROS;④PAMd能维持线粒体跨膜电位的稳定;⑤PAMd抑制线粒体Cyt C释放和抑制胞质Caspase 3活性。结论PAMd通过阻断线粒体凋亡途径和抗氧化作用发挥神经元保护作用。

线粒体在缺血再灌注继发的神经元细胞凋亡中的作用

目的观察线粒体功能失调在缺血再灌后神经元凋亡中的作用。方法(1)采用体外培养神经母细胞瘤细胞株N2a细胞,体外模拟缺血再灌注(缺氧90min,然后再灌不同时间);(2)采用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡情况;(3)MTT法、细胞色素C释放和跨膜压的改变判断线粒体的功能;(4)caspase-3活性测定采用水解其可见光底物。结果(1)N2a细胞缺血再灌12h即出现明显DNA片段化,24h更明显;(2)线粒体酶活性降低,跨膜电位在缺氧再灌1h先短暂下降再升高然后又明显降低,细胞色素C缺氧再灌3h开始下降,6h达到高峰,持续到24h(3)caspase-3活性在缺氧再灌10h升高,24h达到高峰,线粒体通透性转换孔形成抑制剂CsA只能抑制部分caspase-3的活性和DNA片段化改变;而caspase-8抑制剂虽不能完全抑制caspase-3的活性但能完全抑制DNA的片段化。结论N2a凋亡尚存在有caspase-3依赖性和非依赖性两条途径线粒体功能失调在缺氧再灌引起的N2a细胞凋亡过程中可能起到凋亡早期的启动和随后的信号放大作用。

DDPH抑制HECCM促PASMC增殖时第二信使变化的研究

采用 MTT比色、荧光技术和放免技术观察了猪肺动脉低氧内皮细胞条件培养液 (HECCM)和 1- (2 ,6 -二甲基苯氧基 ) - 2 - (3,4-二甲氧基苯乙胺基 )丙烷盐酸盐 (DDPH)对猪肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)增殖、第二信使 ([Ca2 +]i 和 c AMP)的影响。结果显示 :1HECCM促进 PASMC增殖 ,而 DDPH可抑制之 ,抑制率为 77.46 %。 2HECCM升高 PASMCs内 [Ca2 +]i,而 DDPH可对抗此作用。 3HECCM组 PASMCs内 c AMP含量明显低于对照组(NECCM组 ) ,而 HECCM+DDPH组 PASMCs内 c AMP与

注聚工艺改造

简述了河南油田注聚系统地面设备及工艺流程,针对注聚工艺目前存在的主要问题,采取如下措施:对母液供液系统进行工艺改造、对注聚泵的液力端进行改造、进行了油套分层注聚和井口分压注聚工艺的研究与应用等。这些配套技术的研究与现场应用,取得了很好的效果。该油田形成了在国内领先的特色注聚技术,即分层分压注聚、井口活动升压注聚和井口自动控制注聚。

褪黑素、顺铂协同抑制人肝癌细胞SMMC-7721的机制研究

目的 研究褪黑素 (melatonin ,MLT)、顺铂 (cisplatinumum ,DDP)联用对人肝癌细胞SMMC 772 1的抑制作用机制。方法 用不同浓度的褪黑素、顺铂及二者联用处理人肝癌细胞株SMMC 772 1,采用MTT法测定细胞抑制率 ;流式细胞仪分析细胞周期及凋亡 ;通过酶解可见光底物DEVD pNp测定Caspase3的活性 ;Westernblot分析p2 7Kip1蛋白表达。结果 ①褪黑素、顺铂单独应用和联合应用均能抑制SMMC 772 1生长 ,且低浓度联合应用可达到甚至超过单用高浓度顺铂的抑制效果。②褪黑素无论与顺铂联用与否均能激活Caspase3,诱导细胞凋亡 ,而顺铂单独使用无此效应。③褪黑素与顺铂均可导致细胞周期阻滞 ,二者联用更明显。④褪黑素无论与顺铂联用与否均明显诱导p2 7Kip1的表达 ,而顺铂单独使用无此作用。结论 褪黑素能够通过诱导细胞凋亡和促进p2 7Kip1表达协同增强顺铂抑制肝癌细胞作用。

软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗及花生四烯酸防治作用的机制研究

目的探讨高浓度软脂酸(PA)诱导HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)的机制及花生四烯酸(AA)对IR的防治作用。方法(1)用高浓度软脂酸(PA)或10-7mol/L高胰岛素(HI)培养HepG2细胞建立具有IR的细胞模型,测定培养液中葡萄糖含量及细胞内糖原含量作为鉴定指标;(2)用Westernblot检测胞内糖原合酶(GS)和蛋白激酶B(PKB)蛋白水平;(3)用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂Wortmannin(WT)探讨其对胰岛素信号通路的影响;(4)观察AA是否对PA引起的IR有防治作用。结果(1)020mmol/LPA或HI培养HepG2细胞36h后,培养液中葡萄糖含量极显著增高,细胞内糖原含量极显著减少;(2)高浓度PA使磷酸化的PKB(PSer473)蛋白水平显著减少,磷酸化的糖原合酶(PSer641GS)蛋白水平极显著增加;(3)WT使对照组GS活性及胞内糖原含量极显著减少,HI组和PA组胞内糖原含量均无统计学差异,但各实验组PKB活性都极显著减少;(4)PA+AA组培养液中葡萄糖含量显著低于PA组,GS和PKB活性及胞内糖原含量显著增加。结论高浓度PA或HI培养HepG2细胞能够诱导IR,其机制可能是其引起胰岛素信号传递途径中自PKB下游到GS之间的信号通路受阻所致。AA能改善PA引起的IR。

褪黑素对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞分泌的细胞因子的影响

目的 观察褪黑素 (melatonin ,MLT)对小鼠移植性肝癌生长的抑制作用及对小鼠腹腔巨噬细胞分泌的细胞因子的影响。方法 建立肝癌小鼠模型 ,连续 2周每日皮下注射MLT ,绘制肿瘤生长曲线并采用放射免疫法测定小鼠腹腔巨噬细胞分泌的IL 1β和TNF α的水平。结果 注射MLT的小鼠肿瘤生长速度明显 <阴性对照组 (P <0 .0 5 ) ,腹腔巨噬细胞IL 1β的诱生水平明显提高 (P <0 .0 5 ) ,但TNF α的水平却明显下降。结论 MLT能显著抑制小鼠移植性肝癌的生长 ,它对荷瘤小鼠的巨噬细胞功能具有选择性调节作用。

双河油田提高采收率的实践与认识

双河油田自1977年投入开发以来,先后经历了天然能量开发,注水、细分层系综合调整,井网一次、二次加密调整,厚油层细分挖潜及注聚合物三次采油等开发阶段。在此期间由于采取科学合理的开发策略,并根据各个开发阶段的不同特点适时进行调整,取得了以2%以上的采油速度稳产12年较好的开发效果,目前采收率已达44.66%。

游离脂肪酸引起肝细胞胰岛素抵抗及缺陷位点研究

目的研究游离脂肪酸诱导人肝细胞(HepG2)引起胰岛素抵抗及信号转导缺陷位点。方法用含0.25mmol/L的软脂酸(PA)或100nmol/L胰岛素的DMEM培养基培养HepG2细胞24h后,用100nmol/L胰岛素刺激不同时间后,分别测定培养液的葡萄糖浓度,细胞内的糖原含量,磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性以及磷酸化的蛋白激酶B(P鄄Ser473PKB)的蛋白水平。磷酯酰肌醇3激酶(PI鄄3K)的抑制剂Wortmannin加入培养基,终浓度10-6mol/L。结果与正常对照组相比,PA处理组和高胰岛素组培养液中葡萄糖含量增高(P<0.05);PA处理组胰岛素刺激的PEPCK活性高于正常对照组(P<0.01),P鄄Ser473PKB蛋白水平低于正常对照组(P<0.01)。用Wortmannin处理后,正常对照组中PEPCK活性差别有统计学意义(P<0.01),PA处理组中的PEPCK活性差别无统计学意义(P>0.05);正常对照组和PA处理组中P鄄Ser473PKB差别均有统计学意义(P<0.01)。结论0.25mmol/L的AP培养24h后,细胞产生了胰岛素抵抗并且胰岛素信号转导途径存在障碍,可能蛋白激酶B(PKB)及下游分子缺陷参与了肝胰岛素抵抗的形成。

拟南芥GA2ox基因家族启动子分析

赤霉素是一类重要的植物激素,它参与调节植物生长发育的各个阶段。真核基因的表达受多种因素的调控,其中启动子在转录水平上的调节作用至关重要,但是目前对拟南芥GA2ox基因家族上游顺式元件的详细分析较少。本研究分析了AtGA2ox基因家族染色体定位、进化关系、蛋白模体以及顺式元件。分析结果表明:AtGA2ox基因家族分为2个亚类;具有相对集中的染色体分布;具有相似的内含子和外显子结构;AtGA2ox基因家族成员进化关系越相近,模体和顺式元件则越保守且分布位置更接近。PLACE和Plant CARE以及DMB分析显示,AtGA2ox基因家族存在许多保守元件,受多因素的调控,在此家族的上游调控区域普遍存在组织和器官特异性表达元件、光响应元件、激素响应元件以及其他环境响应元件。基因表达谱分析结果表明,在激素诱导下,AtGA2ox基因家族均有响应。这些元件不仅作为正调控元件,诱导部分AtGA2ox基因的表达,而且还能作为负调控元件,抑制其他AtGA2ox基因的表达。

某院住院患者感染及抗菌药物使用横断面调查

目的调查某院住院患者医院感染现患率及社区感染情况,为医院感染防控提供依据。方法采用床旁调查与查阅病历相结合的方法,调查2011年9月26日0∶00—24∶00该院所有住院患者。结果应调查住院患者1 331例,实际调查1 309例,实查率为98.35%。发现感染患者237例,其中医院感染57例(4.35%),60例次(4.58%);社区感染181例(13.83%),183例次(13.98%);同时存在医院和社区感染者1例。医院感染部位居前3位的是下呼吸道(48.33%)、器官腔隙(16.67%)和泌尿道(8.33%)。社区感染率居前3位的科室分别为:呼吸科(84.44%)、儿科(71.43%)、重症监护室(50.00%);感染部位以下呼吸道(45.36%)和皮肤软组织(15.30%)多见。共分离病原体65株,其中医院感染33株,社区感染32株;其中铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌合计分别占医院感染和社区感染的72.73%(24/33)、78.13%(25/32)。抗菌药物日使用率为27.43%(359例),其中预防用药占52.92%,治疗用药占43.45%,预防+治疗用药占3.62%;以单一用药为主,占88.02%,二联用药占11.98%。病原学送检率为61.54%(104/169)。结论感染现患率调查有助于全面了解医院感染及社区感染现状和抗菌药物使用情况,有利于针对性地开展监测。

软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗及其机理

目的研究游离脂肪酸(FFA)诱导人肝癌细胞(HepG2)产生胰岛素抵抗及其分子机理。方法用含0.25 mmol/L的软脂酸(软脂酸组)或100 nmol/L胰岛素(高胰岛素组)的DMEM培养基培养HepG2细胞,再用100 nmol/L胰岛素刺激后,测定其培养液中的葡萄糖浓度、细胞内的糖原含量以及胰岛素受体底物2(IRS-2)的蛋白水平。加入磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)的抑制剂wortmannin,再次检测IRS-2的蛋白水平。结果软脂酸组和高胰岛素组培养液中葡萄糖含量明显高于正常对照组(P<0.05),而细胞内糖原含量显著减少(P<0.01)。软脂酸组胰岛素刺激的IRS-2蛋白水平显著低于正常对照组(P<0.01)。用wortmannin处理后,软脂酸组中的IRS-2蛋白水平差异无显著意义(P>0.05),而正常细胞组中IRS-2蛋白水平差异有显著意义(P<0.01)。结论0.25mmol/L的软脂酸培养24 h后,HepG2细胞可产生胰岛素抵抗,且胰岛素信号转导途径存在障碍;PI3K是胰岛素信号转导途径中的关键调节点,可能IRS-2和一些PI3K相关分子缺陷与游离脂肪酸诱导的肝胰岛素抵抗的形成有关。

抽油泵泵筒开孔制成中排气防气泵和长柱塞泵

打破传统的技术思路,在普通抽油泵泵筒上开孔,根据用途的不同,开孔的位置也不同,由此产生了中排气防气泵和长柱塞泄油泵。前者是在泵筒中部开孔,利用排气孔排气以提高泵效;后者则是在泵筒上部开孔,配以长柱塞,可用于泄油、防盐卡和正洗井。泵筒开孔技术的应用解决了抽油泵的防砂卡、防盐卡和柱塞密封等技术难题。中排气防气泵在工作制度不变的情况下泵效达47.6％,系统效率提高13.5％;长柱塞泄油泵用于给盐严重的间歇采油井,停井后下放抽油杆柱至碰泵,使油管内泄油,结果结盐几率减小,油井连续正常生产。

缺血再灌注引起神经元凋亡及褪黑素抗凋亡的机制

目的探讨模拟缺血再灌注引起神经元凋亡的途径和褪黑素(melatonin,MT)抗凋亡的作用机制。方法用原代培养的SD乳鼠小脑颗粒细胞建立以缺氧缺糖模拟缺血再灌注模型,并加不同浓度的MT(10-5、10-7、10-9mol/L)孵育。采用荧光比色法检测其线粒体跨膜电位及细胞内的活性氧;用Westernblot及ELISA分别检测线粒体和胞质中的细胞色素C;比色法检测胞质中Caspase3的活性。结果在模拟缺血再灌注小脑颗粒细胞模型中,细胞内的活性氧在缺氧缺糖后明显增加;线粒体跨膜电位降低并随再灌注时间延长而加重;线粒体释放入胞质的细胞色素C增加,胞质的Caspase3活性增加;MT可显著减少活性氧和抑制线粒体释放细胞色素C,抑制线粒体跨膜电位的降低,并呈一定剂量依赖性。结论①缺血再灌注引起的神经元凋亡部分是通过线粒体凋亡途径;②MT可通过抗氧化作用和阻止线粒体凋亡而抑制模拟缺血再灌注诱导的小脑颗粒细胞凋亡。

褪黑素对模拟缺血再灌注的原代培养小脑颗粒细胞的保护作用

目的 探讨褪黑素(melatonin, MT) 对模拟中枢缺血再灌注原代培养神经细胞的保护作用。方法 分离SD乳鼠的小脑颗粒细胞进行原代培养, 建立以缺氧缺糖(oxygen glucose deprivation, OGD) 模拟的体外缺血再灌注模型(简称OGD)。通过MTT比色和锥虫蓝染色, 吖啶橙染色(AO) 和DNA琼脂糖凝胶电泳的检测方法, 观察OGD再灌注对小脑颗粒细胞的损伤, 以及OGD中用不同浓度的MT孵育不同时间, MT对神经元损伤的抑制作用。结果 在OGD的细胞模型中, 与OGD组比较1 nmol/L和10 nmol/L的MT孵育48 h后的细胞存活率明显提高(P<0. 05); 100 nmol/L MT孵育24 h后细胞的存活率明显提高(P<0. 05); 药理剂量的MT (1、10、100μmol/L)孵育12 h后细胞的存活率就明显提高(P<0 .05); 各剂量组细胞的存活率都随着孵育时间的延长而增强。而且, 当MT浓度介于1 nmol/L和10μmol/L之间时, 细胞的存活率随着剂量的增大而提高。经OGD处理的细胞, 吖啶橙染色(AO) 和DNA琼脂糖凝胶电泳显示细胞损伤呈现凋亡和坏死两种方式, MT能够抑制OGD所诱导的细胞凋亡。结论 MT可防治脑中枢缺血再灌注引发的继发性损伤。

花生四烯酸显著预防软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗

目的探讨花生四烯酸(AA)对软脂酸(PA)引起HepG2细胞胰岛素抵抗的预防作用及其可能机制。方法培养HepG2细胞,设立对照组(control组)、软脂酸组(PA组)、软脂酸+花生四烯酸组(PA+AA组)、高胰岛素组(HI组)。PA组、PA+AA组、HI组分别用250μM PA、250μM PA加20μM AA,5×10-7M胰岛素孵育24h。然后葡萄糖氧化酶法测定各组胰岛素刺激后12h点葡萄糖消耗量,蒽酮法测定胰岛素刺激后3h点细胞内糖原含量,Western-blotting技术检测15min点胞内P-Ser473PKB、P-Ser21/9GSK-3α/β水平。结果葡萄糖消耗量PA组与HI组比较差异无统计学意义(P=0.594)。葡萄糖消耗量、细胞内糖原含量、P-Ser473PKB、P-Ser21GSK-3α、P-Ser9GSK-3β水平均显示,PA组与control组比较显著降低(P<0.05),PA+AA组与PA组比较显著升高(P<0.05)。结论AA(20μM)能显著预防PA引起的HepG2细胞胰岛素抵抗,能在PKB、GSK-3水平上显著维持250μM软脂酸孵育HepG2细胞的胰岛素信号传递。

游离脂肪酸引起肝细胞胰岛素抵抗及其机制的研究

目的研究游离脂肪酸(FFA)诱导人肝癌细胞(HepG2)引起胰岛素抵抗及其分子机制。方法应用含0.25mmol/L的软脂酸(PA组)或100nmol/L胰岛素(Ins组)与不含软脂酸和胰岛素(正常组)的DMEM培养基培养HepG2细胞24h,正常组和PA组中又分加与不加磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂Wort-mannin两个亚组,100nmol/L胰岛素刺激后分别测定培养液中的葡萄糖浓度、细胞内的糖原含量、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性及胰岛素受体底物2(IRS-2)的蛋白水平。结果PA组和Ins组培养液中葡萄糖含量显著高于正常组(P<0.01),而细胞内糖原含量显著减少(P<0.01);PA组胰岛素刺激的PEPCK活性显著高于正常组(P<0.01),IRS-2蛋白水平显著低于正常组(P<0.01)。无论应用Wort mannin处理与否,PA组中的PEPCK活性及IRS-2蛋白水平差异无显著性(P>0.05),而正常组中PEPCK活性及IRS-2蛋白水平的差异有显著性(P<0.01)。结论加0.25mmol/L的软脂酸培养24h后,肝细胞可能由于胰岛素信号转导障碍产生胰岛素抵抗;胰岛素抵抗的形成可能与IRS-2及PI3K相关分子缺陷有关。

防聚合物返吐分层注水新技术

针对河南油田注聚转后续水驱分层注水井中聚合物返吐造成无法测试、堵塞偏心 ,甚至堵塞油管 ,严重影响注水效果的难题 ,研制了一种防聚合物返吐分层注水新技术。重点介绍了防聚合物返吐分层注水工艺管柱的结构、工作原理和技术参数。该项工艺技术在现场已实施 6口井 ,成功率达 10 0 % ,有效地解决了注聚转后续水驱井中聚合物返吐造成的测试难、严重影响注水效果的问题。