嗅鞘细胞分泌蛋白SC1促进神经元突触形成

目的探讨嗅鞘细胞(OECs)诱导神经干细胞(NSCs)分化后,其分泌蛋白SC1对分化后神经元突触形成的作用。方法用小鼠OECs条件培养基诱导小鼠神经干细胞系C17.2分化后,用突触前膜抗体bassoon标记突触并计数,同时用Western blot检测bassoon的表达量。结果 OECs诱导组突触数目及bassoon的表达量明显高于全反式维甲酸(RA)诱导组,在RA诱导组加入小鼠SC1重组蛋白后,突触数目及bassoon的表达量与OECs诱导组接近。结论 OECs分泌蛋白SC1能促进C17.2 NSCs分化后神经元的突触形成。

人嗅黏膜间充质干细胞的生物学特性

目的:观察及研究人嗅黏膜间充质干细胞的生物学特性。方法:分离、培养、鉴定人嗅黏膜间充质干细胞,在透射电子显微镜、扫描电子显微镜下观察其超微结构,并在体外诱导其向脂细胞、骨细胞、神经干细胞球和神经元分化。结果:人嗅黏膜间充质干细胞生长以梭形细胞为主,呈放射状排列,高表达表面标志CD73和CD90,不表达CD34和CD45;在扫描电子显微镜下可见细胞表面有短而粗的微绒毛突起,在透射电子显微镜下可见到两种不同的细胞形态;具有成脂、成骨、成神经元干细胞球和神经元分化的能力。结论:人嗅黏膜间充质干细胞具有间充质干细胞的一般生物学特性,经诱导培养后具有多向分化潜能,可作为组织工程修复的理想的种子细胞。

人鼻黏膜间充质干细胞生物学特性与自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤

背景:干细胞应用于脊髓损伤的报道很多,但是这些细胞存在免疫排斥、取材困难、纯化不易等各方面的缺陷,而鼻黏膜间充质干细胞无上述缺点,将其应用于临床脊髓损伤患者疗效分析目前尚无相关报道。目的:观察人鼻黏膜间充质干细胞的生物学特性,同时进行自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗晚期不完全性脊髓损伤的临床疗效观察与评价。方法:①取材、培养鼻中隔偏曲手术患者的鼻黏膜间充质干细胞,扫描及透射电子显微镜观察细胞的超微结构,并在体外对其进行多向诱导分化;②经医学伦理委员会同意后,取材培养脊髓损伤患者的鼻黏膜,通过腰椎穿刺术注射到8例晚期不完全性脊髓损伤患者椎管内,细胞移植1-3次,前后移植间隔时间为5-7 d,每次移植细胞总数约为5×107个。细胞移植治疗前及随访6个月时按照国际截瘫医学会ASIA评分标准进行评分。结果与结论:①鼻黏膜间充质干细胞在光镜下形态以梭形为主,并呈现出放射状排列,细胞免疫荧光表达STRO-1;②流式细胞学检测显示高表达间充质干细胞表面标记物CD73、CD90、CD105,不表达造血干细胞标记物CD34、CD45,且细胞纯度达97%以上;③鼻黏膜间充质干细胞在扫描及透射电子显微镜下可见短粗的微绒毛及不同的细胞生长形态;④鼻黏膜间充质干细胞还具有向骨组织、脂肪组织、干细胞球及神经元分化的潜能;⑤经自体血清培养的鼻黏膜间充质干细胞移植后,除1例患者住院期间无明显神经功能改善外,其余患者均有不同程度的神经功能恢复且无任何不良副反应;⑥结果表明,鼻黏膜间充质干细胞是组织工程细胞修复中一种新型的种子细胞来源;自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤患者能达到一定的治疗效果,具有临床应用价值。

脐血单个核细胞移植治疗痉挛型小儿脑性瘫痪的安全性

背景:大量研究证实脐血间充质干细胞体外培养可被诱导分化为表达神经元和神经胶质细胞表面标志物的细胞,对神经系统疾病起到替代修复的作用。目的:观察人脐血单个核细胞移植治疗痉挛型小儿脑性瘫痪的疗效和安全性。方法:收集正常足月剖腹产胎儿的脐血,经肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞,采用差速贴壁法进行纯化,并经腰椎穿刺注入30例痉挛型脑性瘫痪患者体内。结果与结论:移植后患者肢体的肌肉痉挛程度和关节活动度明显改善,与移植前相比差异有显著性意义(P<0.05),移植后和随访过程中无不良反应和并发症。

颅骨固定钛夹在颅骨成形术中的应用

目的介绍一种新型颅骨固定钛夹在颅骨成形术中的应用。方法回顾性分析10例颅骨外伤病人的临床资料,均采用颅骨固定钛夹行颅骨成形术。结果颅骨固定牢靠,术后未见并发症。结论新型颅骨固定钛夹可方便、牢固固定自体骨瓣。

低氧微环境促进嗅黏膜间充质干细胞向神经元分化及其相关机制

目的:研究低氧微环境下利用嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)上清液诱导嗅黏膜间充质干细胞(olfactory mucosa mesenchymal stem cells,OM-MSCs)更多地向神经元分化及其相关的机制。方法:分离培养OECs和OM-MSCs,应用流式细胞仪和免疫荧光方法分别进行鉴定;实验将OM-MSCs分为3%O_2+低氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)抑制剂利非西呱(lifi ciguat,YC-1)+OECs上清诱导组(A组)、3%O_2+OECs上清诱导组(B组)及21%O_2+OECs上清诱导组(对照组)。采用免疫荧光检测分化后的神经元,采用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,Q-PCR)和Western印迹分别检测HIF-1α的mRNA及βIII-微管蛋白(βIII-tubulin)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic portein,GFAP)的表达,再用膜片钳检测分化后的神经元钾离子通道开放情况。结果:实验各组相比较,B组OM-MSCs诱导后免疫荧光显示βIII-tubulin表达最多,Q-PCR显示B组HIF-1α表达明显增高(均P<0.05);Western印迹表明B组中βIII-tubulin蛋白表达显著增多,而胶质细胞标志物GFAP表达明显降低(均P<0.05);且诱导分化后的神经元经膜片钳检测发现钾离子电流。结论:低氧微环境下的OM-MSCs经OECs上清液诱导能显著提高其向神经元分化的比例,并明显降低了神经胶质细胞的产生,且与细胞HIF-1α信号通路被激活有关。

低氧微环境促进人嗅黏膜间充质干细胞的增殖及其机制

背景:人嗅黏膜间充质干细胞不仅具有一般间充质干细胞的基本特征,因其来源于外胚层,还能更多地向神经元方向分化,是一种用于神经损伤修复与再生的理想种子细胞。常规细胞体外培养的氧气体积分数约为21%,而人体正常组织和组织间隙中的氧气体积分数为3%-9%。低氧对人嗅黏膜间充质干细胞增殖及活性的影响尚未见报道。目的:探讨低氧微环境对人嗅黏膜间充质干细胞增殖、活性的影响及其相关机制。方法:分离培养人嗅黏膜间充质干细胞,应用流式细胞学和免疫荧光方法分别进行鉴定;实验将第4代人嗅黏膜间充质干细胞分成3组:体积分数为21%O2组(常氧组)、体积分数为3%O2组(低氧组)、体积分数为3%O2+20μmol/L YC-1(HIF-1α抑制剂)组(抑制剂组),干预72 h后采用流式细胞技术检测各组细胞的细胞周期和细胞凋亡情况;采用Western blot方法检测增殖细胞核抗原的蛋白表达;采用Q-PCR及Western Blot分别检测HIF-1α和TWIST的m RNA及蛋白表达。结果与结论:(1)分离培养出了人嗅黏膜间充质干细胞,第4代人嗅黏膜间充质干细胞的纯度达97%以上;(2)低氧组比常氧组的增殖系数大(P<0.05),且两组间的存活细胞及总体的凋亡细胞(机械死亡+早期凋亡+晚期凋亡)比例差异无显著性意义(P>0.05);(3)低氧组的增殖细胞核抗原蛋白表达显著增高,与常氧组和抑制剂组比较差异有显著性意义(P<0.05);(4)低氧组中HIF-1α和TWIST m RNA和蛋白表达显著上调,与常氧组和抑制剂组比较差异有显著性意义(P<0.05);(5)低氧微环境能促进人嗅黏膜间充质干细胞的增殖而对其细胞活性无明显影响,且此过程与人嗅黏膜间充质干细胞内HIF-TWIST信号通路被激活有关。

改良新生大鼠雪旺细胞的体外培养和纯化

为建立一种简易有效的体外培养和纯化雪旺细胞(Schwann cells,SCs)的方法,采用显微技术严格无菌条件下取新生大鼠坐骨神经,去除鞘膜,剪碎成0.5 mm3大小,混合酶分步消化法分离单个细胞,用连续阶段时间点(接种培养后第15 min、30 min和45 min)差速贴壁法联合适时阿糖胞苷抑制法进行纯化,通过形态学观察和S-100免疫组化鉴定.结果显示SCs增殖能力强,生长良好,外形多为双极,成堆或旋窝状生长,S-100免疫细胞化学反应阳性细胞纯度均达98%.因此该培养方法可从新生大鼠坐骨神经获得高纯度的雪旺细胞.

鼻黏膜间充质干细胞的培养、鉴定及诱导分化

目的建立Sprague Dawley(SD)大鼠鼻黏膜间充质干细胞(NM-MSCs)的获取、分离、培养方法,初步了解其生物学特性。方法通过SD大鼠鼻黏膜贴壁法体外分离、培养NM-MSCs,光镜下细胞形态学观察,用免疫荧光技术检测间充质干细胞和神经干细胞标记物,用流式细胞术检测细胞表面标记物,再诱导其向骨组织及脂肪组织方向分化,最后对其进行细胞周期检测及分析。结果分离培养的NM-MSCs光镜下以梭形与多角形细胞为主,呈放射状排列,且生长旺盛;免疫荧光染色显示NM-MSCs同时表达STRO-1和Nestin;第4代NM-MSCs不表达CD19、CD31、CD34、CD45及HLADR细胞表面标记物,但表达CD90、CD105基质细胞标记物;NM-MSCs经成骨、成脂诱导后,茜素红染色和油红O染色均呈阳性;细胞周期分析显示NM-MSCs符合干细胞生长的特性。结论 SD大鼠NM-MSCs组织块贴壁法获取容易,操作简单,且可大量扩增用于细胞实验研究,经体外诱导后具有多向分化潜能,具有间充质干细胞的一般生物学特性。SD大鼠鼻黏膜组织块贴壁法为组织细胞工程研究提供了充足的种子细胞来源。

IL-1β、IL-6和IL-18在颅脑损伤患者中的表达及其临床意义

目的探究白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-18在颅脑损伤患者中的表达及其临床意义。方法选取2012年12月至2014年12月在该院接受治疗的颅脑损伤患者163例(颅脑损伤组),其中轻度68例,中度49例,重度46例。分别留取损伤后0、1、4、7、15、30d的血液标本。另选取健康人57例作为对照组,采用酶联免疫吸附试验检测损伤后各个时间点IL-1β、IL-6和IL-18的水平。结果与对照组和治疗后比较,颅脑损伤组治疗前IL-1β、IL-6和IL-18表达水平均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,颅脑损伤组治疗后IL-1β、IL-6和IL-18表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。颅脑损伤组患者的3种炎性因子水平自入院起逐渐增加,至治疗后4d最高,再逐渐降低,至治疗后30d时3种炎性因子水平已低于入院时水平,差异有统计学意义(P<0.05)。在任意时间点,轻度颅脑损伤患者的3种炎性因子水平均低于中重度颅脑损伤患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清IL-1β、IL-6和IL-18表达水平会随着颅脑损伤的严重程度变化,可作为判断颅脑损伤严重程度的指标。

人嗅觉黏膜间充质干细胞来源的外泌体促进内皮细胞的血管生成

外泌体作为是细胞旁分泌的重要介质,在促血管形成方面有重要作用。在我们前期研究中,已经成功从嗅黏膜间充质干细胞(olfactory mucosa mesenchymal stem cells,OM-MSCs)分离、鉴定了其外泌体,然而,OM-MSCs源外泌体对血管生成的影响尚不清楚。本研究旨在探讨OM-MSCs来源外泌体对内皮细胞血管生成能力的影响。采用PKH67荧光标记OM-MSCs源外泌体,与人脑微血管内皮细胞(human brain microvessel endothelial cells,HBMECs)共培养,观察OM-MSCs外泌体能否进入HBMECs。采用CCK-8法、Transwell迁移实验和小管实验,观察OM-MSCs外泌体对HBMECs增殖、迁移及管状结构形成的影响。采用基质胶塞实验及CD31免疫荧光,观察OM-MSCs外泌体在体内对血管生成的影响。上述研究均以等量PBS作为对照。结果提示,OM-MSCs外泌体可被HBMECs摄取。CCK-8法检测显示,在处理1、2、3、4、5 d各时间点,实验组细胞增殖均优于对照组(1.32±0.14 vs.0.98±0.04,1.36±0.14 vs.1.04±0.06,1.75±0.18 vs.1.33±0.11,2.16±0.11 vs.1.50±0.19,2.71±0.11 vs.1.81±0.20,P<0.01)。Transwell实验结果显示,实验组跨膜迁移细胞吸光度值较对照组显著增多(1.12±0.05 vs.0.02±0.02,P<0.05)。在体外小管实验中,从节点、交叉点、网眼数、血管分支数和总长度5个方面,实验组均高于空白对照组(374.33±127.74vs.193.33±44.79,104.56±33.07 vs.54.33±11.65,20.11±11.20 vs.7.56±3.64,81.67±19.07 vs.57.00±13.02,11466.22±2781.03 vs.8544.00±1848.61,P<0.05);在体内实验中,实验组成血管及CD31阳性率(%)亦显著高于对照组(85.00±5.57 vs.8.00±2.08,P<0.05)。本研究表明:OMMSCs外泌体可促进HBMECs增殖、迁移及管样结构形成,提示OM-MSCs外泌体可促进血管新生。

人嗅黏膜间充质干细胞来源外泌体的分离鉴定及生物学特性研究

外泌体是指释放到细胞外微环境中的直径约50~130 nm的纳米级的膜性囊泡。嗅黏膜间充质干细胞(olfactory mucosa mesenchymal stem cells,OM-MSCs)作为一类新发现的间充质干细胞,在许多疾病中均具有治疗作用,且其内在机制与其旁分泌的外泌体密切相关,但OM-MSCs外泌体的分离、鉴定及生物学特性的研究尚未见报道。本研究采用超速离心法提取OM-MSCs培养液中的外泌体,应用流式细胞术及免疫荧光进行细胞鉴定后,分别用透射电子显微镜、纳米粒径分析及Western印迹对外泌体形态、颗粒大小和表面的特异性分子标志进行分析鉴定。采用CCK8增殖实验,Western印迹和划痕实验,分析其对人脑微血管内皮细胞增殖和迁移的影响。电镜、Western印迹和纳米粒径分析的结果显示:OM-MSCs来源外泌体形态多为圆形,直径约为40~150 nm;表达外泌体标记物CD63,CD81;CCK-8法检测显示:不同浓度的OM-MSCs源外泌体可提高人脑微血管内皮细胞的增殖活性,且其增殖促进作用具有浓度依赖性(P<0.05)。Western印迹检测结果显示:相比空白对照组,OM-MSCs源外泌体可显著提高内皮细胞的增殖细胞核抗原蛋白质水平表达(P<0.01),细胞划痕实验结果显示,OM-MSCs源外泌体可增强内皮细胞的迁移能力,且高于对照组(P<0.01)。本研究表明:通过超速离心法可以分离纯化获得OM-MSCs源外泌体,且该外泌体具有促进人脑微血管内皮细胞迁移和增殖的作用。

Mg-Zn-Nd-Zr镁合金浸提液对神经细胞活性和分化的影响

目的研究Mg-Zn-Nd-Zr镁合金浸提液对神经细胞活性和分化的影响。方法制备Mg-Zn-Nd-Zr镁合金浸提液,实验分组:对照组、稀释1倍组、稀释2倍组、稀释3倍组、稀释10倍组。通过MTT法、流式细胞术、WB、CCK-8法、RT-PCR、免疫荧光法检测Mg-Zn-Nd-Zr镁合金对神经细胞活性和分化的影响。结果与对照组相比,各实验组的星型胶质细胞和神经干细胞细胞死亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。各组星形胶质细胞处于G0/G1期及G2/M期的细胞比例,差异无统计学意义(P>0.05),稀释10倍组中星型胶质细胞处于S期的细胞比例减少(P<0.05)。与对照组相比,稀释10倍组和稀释3倍组中星型胶质细胞的PCNA蛋白表达量增加,而稀释2倍组和稀释1倍组中星型胶质细胞的PCNA蛋白表达量减少(P<0.05)。与对照组相比,稀释10倍组和稀释3倍组中神经干细胞的PCNAmRNA表达增加以及Bax、bcl-2的mRNA表达减少,而稀释2倍组中神经干细胞的PCNAmRNA表达减少,稀释1倍组中神经干细胞Bax、bcl-2的mRNA表达增加(P<0.05)。神经干细胞在稀释10倍组的浸提液中可分化为神经元及星形胶质细胞。结论Mg-Zn-Nd-Zr镁合金浸提液对神经细胞无明显细胞毒性。在稀释10和3倍时能促进星形胶质细胞和神经干细胞的增殖,而且稀释10倍时能促进神经干细胞向神经元及星形胶质细胞分化。但稀释2倍组和稀释1倍组的星形胶质细胞和神经干细胞凋亡增加。

经外侧裂入路与经颞叶皮质入路在高血压性基底核区脑出血的疗效比较

目的对比分析经颞叶皮质与经外侧裂入路术治疗高血压性基底核区脑出血(hypertensive basal ganglia hemorrhage,HBGH)的临床价值及对患者病情与预后指标的影响。方法选取84例HBGH患者,采用随机数字表法分为A组(经外侧裂入路手术)与B组(经颞叶皮质入路手术),各42例。比较两组手术指标、磁共振弥散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)参数、Fugl-Meyer运动功能评定量表(Fugl-MeyerAssessment Scale,FMA)评分、γ-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)水平、简易精神状态评价量表(Mini-Mental State Examination,MMSE)评分、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(T cell immunoglobulin and mucin-containing molecule 3,TIM-3)水平、生活质量量表(Medical Outcomes Study 36-Item Short-Form Health Survey,SF-36)评分、血肿清除效果及并发症发生情况。结果术前两组TIM-3、FMA、rFA、MMSE、IFN-γ、SF-36差异无统计学意义(P>0.05)。术后3个月,A组TIM-3、IFN-γ水平低于B组,rFA数值与FMA、MMSE、SF-36评分高于B组(P<0.05)。A组手术指标优于B组,血肿清除效果优良率高于B组(85.71%与66.67%),并发症发生率低于B组(9.52%与30.95%)(P<0.05)。结论经外侧裂入路血肿清除的效果与安全性优于经颞叶皮质入路,能够促进患者神经与运动能力恢复,降低颅内再出血等并发症发生风险。

Hunt-Hess分级Ⅳ-Ⅴ级颅内动脉瘤并发ARDS的高危因素及护理策略

目的分析高分级颅内动脉瘤继发急性呼吸窘迫综合症(acute respiratory distress syndrome,ARDS)的高危因素,根据高危因素采取综合护理措施。方法对我科近5年来19例高分级颅内动脉瘤合并ARDS的病人资料进行回顾性分析,对患者发病的高危因素及治疗方法进行讨论。结果19例患者均诊断明确,10例抢救成功,9例死亡。对各种危险因素进行统计学分析,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高分级颅内动脉瘤并发ARDS病死率较高。预防高危因素的发生,早期诊断、早期治疗,早期精心护理以及正确使用呼吸机是其抢救成功的关键。

低频强噪声对人体主要器官功能的影响

目的观察长时间低频强噪声暴露对人体主要器官功能的影响,探讨其可能致伤机制。方法 2012-1-1/2014-8-31对20名长时间暴露于低频强噪声环境的工作人员进行追踪观察,对接触噪声过程中体温、呼吸、脉搏、血压进行间断监测,调查强噪声接触后的主要症状,并比较接触噪声前后血液常规、尿液常规、大便潜血试验、血液生化学、血皮质醇、心电图、胸部X线、腹部B超、脑电图、听阈、视力视野、听觉诱发电位的变化情况。结果 1低频强噪声暴露后,容易出现恶心、食欲下降、视物模糊、耳鸣、入睡困难等症状,其中耳鸣在低于6年接触者中容易出现,入睡困难在高于6年接触者中出现频率高。26年以上接触者在4000~8000 Hz听阈明显增高,同时听觉诱发电位显示Ⅴ波潜伏期延长,Ⅲ~Ⅴ、Ⅰ~Ⅴ峰间期明显延长。结论长时间接触低频强噪声可造成听力和中枢神经系统损害。

OECs无血清上清液体外诱导UB-MSCs向神经细胞分化

目的:观察大鼠嗅鞘细胞无血清上清液诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化的作用。方法:采用差速贴壁联合阿糖胞苷抑制法获得较高纯度的嗅鞘细胞,在最佳状态细胞无血清培养后取上清液。收集正常足月剖腹产胎儿的脐带血,经肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞,采用差速贴壁法纯化间充质干细胞,传第三代后用上述收集的嗅鞘细胞无血清上清液诱导,观察诱导分化过程,免疫组化鉴定分化结果。结果:用差速贴壁和阿糖胞苷抑制法可获得纯度高达95%的嗅鞘细胞,使用无血清嗅鞘细胞上清液培养脐血间充质干细胞后,发现能诱导脐血间充质干细胞向神经细胞形态分化,胞体呈椭圆形,伸出长突起。诱导7天后相差显微镜下可观察到神经干细胞、神经元和胶质细胞形态的细胞,与NSE、GFAP细胞免疫组化结果一致。结论:大鼠嗅鞘细胞无血清上清液有明显诱导脐血间充质干细胞分化为神经细胞的作用。

嗅鞘细胞无血清上清液诱导C17.2神经干细胞定向分化及分化后细胞活力检测

目的探讨体外采用嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells,OECs)无血清上清液诱导小鼠C17.2神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向神经元定向分化及分化后的细胞活力。方法采用新生3 d昆明小鼠嗅球,分离培养OECs,并制备无血清上清液。C17.2 NSCs置于含15%FBS的H-DMEM/F12培养基培养,传至第3代,待细胞生长至80%融合时,分别加入OECs无血清上清液(实验组)、H-DMEM/F12培养基(对照组)诱导培养;以未诱导的C17.2NSCs作为空白对照组。倒置显微镜下观察诱导后细胞生长情况,于诱导5 d后收集细胞行微管相关蛋白2(microtubuleassociated protein 2,MAP-2)及β-微管蛋白Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ)免疫荧光染色鉴定,Western blot检测细胞巢蛋白(Nestin)、β-tubulin-Ⅲ、MAP-2蛋白表达情况,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率并行MTT法检测细胞活力。结果实验组:诱导后24 h细胞胞体开始收缩,3 d后分化的细胞明显增多,突触增长;对照组:诱导后24 h细胞形态无明显改变,3 d后细胞胞体皱缩,细胞核质浓缩,并发生细胞裂解、破碎。诱导后5 d,免疫荧光染色示实验组分化后细胞β-tubulin-Ⅲ和MAP-2表达均呈阳性,对照组及空白对照组均无表达。Western blot检测显示实验组中NSCs标志物Nestin蛋白表达明显减少,神经元标志物β-tubulin-Ⅲ和MAP-2表达增加,与对照组及空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组LDH漏出率为130.60%±6.86%,显著低于对照组的178.20%±5.44%;细胞活力为62.20%±3.82%,显著高于对照组的18.00%±3.83%;比较差异有统计学意义(P<0.05);但均低于空白对照组的100%(P<0.05)。结论含有OECs分泌蛋白的OECs无血清上清液不仅能诱导NSCs向神经元分化,还能维持分化后细胞活力。

人胚嗅鞘细胞诱导神经干细胞分化的研究

目的:观察嗅鞘细胞(OECs)诱导神经干细胞(NSCs)分化的方向,分化后的细胞存活和电活动情况。方法:将分离培养人胚OECs细胞经纯化后接种于培养皿内,2d后加入神经干细胞,设置5×10-6RTRA组,5%FBS对照组,分别于第10天后行NSE免疫组化检测,于7d、14d、21d对嗅鞘细胞组和RA组行tunnel细胞凋亡检测,于12d行膜片钳检测。结果:NSE阳性率OECs组80.3%,RTRA组77.5%,FBS组2%。7d、14d、21d对嗅鞘细胞组和RTRA组tunnel细胞凋亡比例分别为0.9%、1.2%、1.4%,1%、3.3%、8.6%,分化后的神经元记录到快速激活快速失活内向钠电流及慢激活慢失活能延迟整流性外向钾电流。结论:OECs能诱导NSCs向神经元方向分化,促进分化后的细胞存活,并且有神经元样电活动,因此NSCs分化后的细胞具备了替代受损的神经元细胞的功能。

创伤性脑损伤后大鼠海马区1-磷酸鞘氨醇受体1表达变化对神经干细胞增殖的影响

目的探讨大鼠创伤性脑损伤（TBI）后海马区1-磷酸鞘氨醇受体1（S1PRl）的表达改变对神经干细胞（NSCs）增殖的影响。方法采用控制性皮层损伤法制备大鼠TBI模型。共纳入72只SD大鼠。按随机数字表法分为假损伤组、TBI组、TBI后S1PRl激动剂SEW2871干预组（TBI＋SEW组）和TBI后S1PR1抑制剂VPC23019干预组（TBI＋VPC组），每组18只。伤后7，14，21d，Western blot检测各组海马区SIPR1蛋白表达量，免疫荧光双标染色评估各组海马区NSCs的增殖情况。结果伤后7，14，21d，四组间s1PR1表达水平和NSCs增殖量差异均有统计学意义（P〈0．05）。其中伤后7d的差异变化最为显著：S1PR1的表达水平TBI组较假损伤组增加1．56倍，TBI＋SEW组进一步增加66．67％，TBI＋VPC组表达水平较TBI组则降低20．29％（P〈0．05）。NSCs的增殖数量TBI组较假损伤组增加2．08倍，TBI＋SEW组较TBI组增加36．75％，而TBI＋VPC组较TBI组减少18．77％（P〈0．05）。结论SIPR1是影响TBI后海马区NSCs增殖潜能的重要因素，激活S1PR1可能是促进TBI后神经再生与修复的有效途径。