橡胶粒子膜蛋白双向电泳体系的建立和质谱初步分析

橡胶粒子是橡胶树乳管细胞中进行橡胶生物合成的一种特殊细胞器。参与橡胶生物合成的橡胶转移酶、橡胶延长因子等重要酶类和相关的蛋白质调控因子均定位于橡胶粒子的表面或镶嵌于橡胶粒子膜中。本研究在SDS-PAGE分离橡胶粒子膜蛋白的基础上,使用pH3￣10非线性IPG胶条进行2-DE双向电泳,成功地分离了橡胶粒子膜蛋白,在2-DE银染胶上共得到约520个蛋白质点,并通过基质辅助激光解吸附飞行质谱(MALDI-TOF)对部分蛋白质点进行了初步分析鉴定。检索蛋白质数据库证明其中的蛋白质点包括橡胶延长因子(REF)和橡胶过敏蛋白Hev3等典型的橡胶粒子膜蛋白,另外还有一些功能未知的蛋白质。从银染2-DE胶上可以看出,REF在橡胶粒子膜蛋白中占有很大的比例,这表明REF在橡胶生物合成中可能具有非常重要的作用。通过比较蛋白质组学研究发现,橡胶粒子膜上存在乙烯和茉莉酸信号响应蛋白。乙烯和茉莉酸对橡胶生物合成的调控作用可能与橡胶粒子膜上存在它们的响应蛋白有关。橡胶粒子膜蛋白2-DE双向电泳体系的建立为全面研究橡胶粒子膜蛋白的组成及其变化奠定了基础。

橡胶树胶乳cDNA文库的构建及其EST序列的功能分析

为了分离和克隆橡胶树胶乳中与胶乳代谢、橡胶生物合成和茉莉酸生物合成等途径相关的功能基因,以橡胶树无性系热研7-33-97品系新开割树的胶乳为材料,用SDS裂解法提取胶乳总RNA,磁珠法纯化mRNA,逆转录合成第1链cDNA,并合成双链cDNA,经电泳检测,双链cDNA的大小主要在1.0～2.0kb之间,收集大于500bp的cDNA片段,以DH10B为宿主菌,pBluescriptII为载体,构建未经扩增的橡胶树胶乳cDNA初级文库。该文库的库容大于5.0×105Pfu/mL,重组率大于90%。随机对文库的3200个克隆进行了EST测序,用所测序列与GenBank非冗余蛋白质数据库进行BlastX比对,并将比对上的基因进行生物学功能注释和分类。研究结果表明,所构建的胶乳cDNA初级文库质量较高,适合包括低丰度表达基因在内的橡胶树胶乳功能基因的筛选,是研究橡胶树胶乳中重要功能基因的最主要资源和开展橡胶树胶乳代谢与橡胶生物合成的分子机制研究的基础。

激素对巴西橡胶树橡胶生物合成的调控

利用植物激素等化学调控技术,调节巴西橡胶树的产胶和排胶过程,是天然橡胶生产和理论研究的重要内容。介绍了乙烯、茉莉酸、亚麻酸等3种不同激素对天然橡胶生物合成的影响,重点分析了乙烯、茉莉酸对天然橡胶生物合成的调控作用,讨论了新型安全高效采胶刺激剂的发展方向。

工程力学教学中存在的问题及其改革

工程力学是机械类一门重要的专业基础课。针对高职高专院校工程力学教学目标及存在的问题,结合高职高专教育的特点,从优化教材内容、改进教学方法、增设课程设计等方面,提出了高职高专院校工程力学教学改革的措施。

故障树分析法在农产品立体仓库故障诊断中的应用

对农产品立体仓库中的关键设备堆垛机进行了故障分析,在收集大量数据资料的基础上,以"堆垛机控制系统不能正常工作"为顶事件,建立了故障树,并对其进行了定性与定量分析。结果表明,故障树分析法有效地提高了堆垛机故障诊断的效率。

基于单片机技术的温室自动控制系统的设计

随着我国农业科技的发展,温室自动控制技术越来越引起人们的关注,成为未来优质高效设施农业的发展趋势。为此,通过市场调研,采用单片机控制技术,进行了温室自动化控制系统的设计开发。通过性能测试实验,取得较好的效果,为将单片机技术引入到温室自动控制系统的后续研究提供了借鉴。

关于《材料力学》课程教改的探讨

《材料力学》是机械、土木类专业的一门重要的专业基础课。本文探讨了在材料力学教学中,教师转变观念的重要性及改进教学方法的手段。

示范性高职院校实训基地建设研究

随着高职教育的改革和发展,实训基地在技能型人才培养中的地位和作用日益凸显。本文结合河南机电高等专科学校实训基地建设的实践,提出示范性高职院校实训基地建设的指导思想、定位和功能、建设原则,并对校内外实训基地的共享机制和运行机制进行探索性研究。

开斜槽纵-扭复合振动阶梯形变幅杆设计

基于声波传播基本理论,探讨了单激励下斜槽传振杆实现纵-扭复合振动的机制。采用有限元分析方法研究了阶梯形复合变幅杆结构尺寸对其固有频率的影响规律,设计出了谐振频率在20 k Hz左右的纵-扭复合振动变幅杆。研究结果表明:谐振频率为20 498 Hz时该变幅杆能在纵向振动单激励下实现纵-扭复合振动,且振幅呈周期性变化。此研究结果可应用于超声纵-扭复合振动加工声学系统的设计。

射频识别技术在农产品立体仓库中的应用

基于射频识别技术的仓储管理系统具有人工干预少、自动化程度高的优点,可极大地提高农产品立体仓库的自动化程度和工作效率。进行了基于51单片机的射频识别读写器的软硬件设计开发,初步完成了仓储数据库管理软件的部分功能模块,并进行了射频识别系统读写距离测试,结果表明系统读写距离基本满足设计要求。

邮包自动化立体仓库堆垛机控制系统的设计

针对目前邮包自动化立体仓库中堆垛机控制系统存在的问题,将PLC技术和变频控制技术相结合,基于变频器S型运行速度曲线的改造,并利用旋转编码器与光电开关进行堆垛机定位系统的设计,为邮包立体仓库堆垛机自动控制系统的设计提供了一种新的思路和方法。

LiFePO_4/C复合材料制备工艺的优化

采用高温固相反应法,分析了不同反应温度对制备LiFePO4/C复合材料的影响,研究了制备LiFePO4/C复合材料的最佳温度。试验结果表明,在650℃合成的产物,颗粒尺寸细小,分布均匀,放电容量高,循环稳定性好,此制备温度最佳。

发动机油底壳表面辐射低噪声结构设计

目前,对发动机表面辐射噪声控制的研究已受到越来越多人们的重视。本文以SQR477F发动机为例,对其油底壳表面辐射噪声进行了研究,发现油底壳中间挡油板的四个自由角边是经常产生油底壳局部模态的部位,提出了控制其表面辐射噪声的有效措施,改进的油底壳刚度大大增强,固有频率显著提高,振动速率有效降低,明显降低了其表面辐射噪声,本设计提出的控制方法经济可行。

非圆柱表面的夹具设计

分析活塞压缩机非圆柱表面加工方法的优、缺点。依据型面加工原理,设计了加工非圆柱表面的夹具。使用该夹具无需对普通车床进行改装就可实现非圆柱表面的加工,且加工精度高。并给出了使用该夹具加工非圆柱面时的误差计算公式。

巴西橡胶树乳管分化的研究进展

综述了巴西橡胶树乳管分化的形态学描述、实验形态学研究和分子生物学3个阶段的研究进展,并对其发展方向进行了分析。

基于荧光和单片机的水中油测量系统设计

为了准确测定水中油污染的性质和来源,实施水环境监测管理,采用荧光分析法以及单片机控制技术,设计了水中油测量系统。该系统可以实现在线测量,通过对样本进行测试,测量精度可达到0.1μg/L,相对误差控制在1%以内,其稳定性和准确性均达到了预期的效果,为将单片机技术引入到水中矿物油含量测量研究提供了借鉴。

茉莉酸刺激的橡胶树胶乳cDNA消减文库的构建及其序列分析

采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,构建了外源茉莉酸刺激条件下橡胶树胶乳与未处理橡胶树胶乳差异表达的cDNA消减文库,经蓝白斑筛选共得到121个含有插入片段的阳性克隆。通过菌落PCR的方法分别对阳性克隆的插入片段进行扩增,结果表明,95％左右阳性克隆插入片段的大小在200-600 bp之间。随机选取25个克隆进行测序,并对所得的25条表达序列标签(EST)序列用Blastn(基本局域联配搜寻工具)检索基因文库(genbank),其中10条EST片断可找到碱基序列相似性大于80％以上的同源基因序列,其余15条EST为没有任何功能线索的未知序列。外源茉莉酸刺激条件下橡胶树胶乳cDNA消减文库的构建和在此基础上克隆橡胶树胶乳中JA信号的候选应激基因,将为开展茉莉酸调控橡胶树胶乳代谢和橡胶生物合成的分子机理研究打下基础。

巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳及质谱分析

【目的】分析巴西橡胶树(Hevea Brasiliensis Müll.Arg.)橡胶粒子的蛋白质构成,探索未知的橡胶粒子蛋白质。【方法】采用16-BAC/SDS PAGE双向电泳分离橡胶粒子蛋白质,采用MALDI/TOF-TOF质谱技术进行蛋白质鉴定;此外,利用磺基异硫氰酸苯酯(SPITC)化学辅助质谱测序法进行肽段的从头测序,获得未知蛋白质肽段的氨基酸序列。通过搜索橡胶树胶乳转录组测序获得的EST数据库,获取已知部分氨基酸序列蛋白质的全序列,或通过部分肽段获取为未知蛋白质编码的EST序列。【结果】获得了橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳图谱,鉴定了17个橡胶粒子蛋白质;获得1个小橡胶粒子蛋白(small rubber particle protein,SRPP)亚家族成员SRPP(gi|37622210)的完整氨基酸序列以及1个橡胶延伸因子(rubber elongation factor,REF)亚家族新成员(hbREF2)的C端87个氨基酸残基序列,此蛋白质的氨基酸序列与已知的REF(gi|38122474)具有高度的相似性。【结论】采用16-BAC/SDS-PAGE双向电泳有效地分离了橡胶粒子蛋白质,展现了橡胶粒子蛋白质的相对含量,研究结果表明构成橡胶粒子的主要蛋白质组分是REF和SRPP亚家族蛋白质。橡胶粒子的蛋白质组分的全面鉴定,将有助于揭示橡胶粒子的生物学功能。

橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库的构建与EST测序分析

【目的】构建橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库,降低胶乳中存在的高丰度表达基因的拷贝数,提高胶乳表达基因的分离鉴定和EST测序分析效率。【方法】以橡胶树无性系热研7-33-97的胶乳为材料,将胶乳全长cDNA与Gateway供体载体pDONR222重组,构建了橡胶树胶乳的非剪切型全长cDNA原始文库,经检测原始文库的滴度为6.0×106 cfu/mL,平均插入片段长度大于1.5 kb,重组率约为100%,全长cDNA比例约为76%;利用基因组DNA饱和杂交技术对胶乳原始cDNA文库进行均一化处理,构建橡胶树胶乳的均一化全长cDNA文库。【结果】胶乳均一化全长cDNA文库的总库容量(总CFU)为1.87×105,重组率大于95%。定量RT-PCR检测表明,橡胶树胶乳2个高丰度表达基因,即小橡胶粒子蛋白(SRPP)和橡胶延长因子(REF)基因,在均一化cDNA文库中的表达量均下降了约1 000倍。【结论】构建了均一化效果良好的橡胶树胶乳全长cDNA文库,并对文库中随机的12 000个克隆进行了测序,获得高质量的有效EST(expressed sequence tag)序列为11 951条,经拼接共获得单一基因(unigene)为3 394个,其中包括片段重叠群(contig)2 061个和单一EST序列(singlet)1 333个。此cDNA文库将可用于橡胶树功能基因组研究、新基因筛选、高通量EST测序以及橡胶树胶乳cDNA芯片的制备。