低温胁迫对阿月浑子抗寒生理指标的影响

以4个阿月浑子(PistaciaveraL.)不同品种为试验材料,通过人工冷冻处理,对枝条相对电导率、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、丙二醛(MDA)等指标进行了研究。结果表明,这4个品种的抗寒性具有明显差异性,其中以Larnaka抗寒能力最强,其次为‘B’、Kerman,Sirora抗寒能力最差。SOD、POD、MDA含量随着温度的降低而呈现出先上升后下降的变化规律。低温下耐寒性强的品种能保持较高的SOD和POD酶活性和较低的MDA含量,因此,SOD、POD、MDA在一定程度上能反映阿月浑子抗寒性的大小,可作为其抗寒性评价指标。

L1-ORF2不同片段对报告基因表达产生不同影响

长散布重复序列-1（Line-1，LI）是重要的人类基因组成分，完整的LI有6kb，在基因组中存在的L，多数是不完整序列，有必要研究LI片段对基因表达的调控作用。PCR扩增LI第二读码框（LI-ORF2）不同位置的280bp片段，共7段，同向8串联按正、反方向分别插入pEGFP质粒GFP基因下游，观察插入序列对GFP报告基因表达的影响。构建的质粒瞬时转染HeLa细胞，经荧光显微镜和Northern检测，不同片段对转录量和终止影响不同。7个片段正序对GFP报告基因的抑制均高于其反序，在正序串联表达载体p280—1＊8和p280—9＊8的GFP基因转录量超过其他280正序插入片段，在反序串联表达载体p280—1＊8as和p280．9＊8as的G即基因转录量超过其他280反序片段。280．1。8、280—9＊8、280—1＊8as和280—9＊8as属于转录终止性序列。Alu在基因组的多数区段与L，分布呈反比，Alu正、反序均对GFP表达有抑制作用，但反序抑制作用高于正序，Alu正序属于转录延伸性序列。280bp片段反序插入的所有质粒荧光阳性细胞均高于正序插入质粒。经碱基分析，L1-ORF2各段均存在A碱基含量多，T碱基含量少的现象，这可能是其正、反序对基因表达影响不同的原因。

落叶松RNA提取方法对比研究

以华北落叶松 (Larixprincipis -rupprechtiiMayr)为试材 ,采用 2种RNA提取方法 ,同时做了初提总RNA纯化对比试验 ,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外光检测得到RNA的完整性和提取纯度 ,并计算RNA收率。试验结果表明 ,采用Concert试剂法提取和DNA酶提纯法纯化能够高效地从华北落叶松组织中分离获得纯度高。

养真接骨胶囊微生物限度检查方法验证

目的建立养真接骨胶囊的微生物限度检查方法。方法采用平皿法(培养基稀释法)与常规法,以金黄色葡萄球菌,大肠埃希菌,枯草芽孢杆菌,白色念珠菌,黑曲霉菌和乙型副伤寒沙门菌为阳性对照菌,进行细菌数、霉菌和酵母菌数与控制菌验证。结果规定条件下培养,结果 3个批次药品本底组菌落数均为0。3个批次药品五种阳性菌回收率均高于70%,证明无抑菌现象。3个批次药品试验组和菌液组在加入靛基质试液后液面出现玫瑰红色,而对照组和稀释组未出现。3个批次药品试验组和菌液组产酸产气,而对照组和稀释组未出现。3个批次药品试验组和菌液组有菌落,而对照组和阴性对照未出现。结论养真接骨胶囊样品可采用1∶10供试液,平皿法检查细菌数,常规法检查霉菌及酵母菌数和控制菌。

α-生育酚琥珀酸酯对乳腺癌细胞中IAPs家族蛋白表达的影响

目的检测α-生育酚琥珀酸酯(-αTOS)对MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞增殖以及细胞中凋亡抑制蛋白家族(IAPs)表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定-αTOS对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-453增殖的抑制作用,细胞分别接种于96孔板后用浓度为51、0、255、0、75、1001、25和150μmol/L的-αTOS处理48 h后检测;细胞经50μmol/L、100μmol/L-αTOS处理122、4、48 h后,用RT-PCR的方法检测细胞内c-IAP1和c-IAP2 mRNA的转录水平;用Western Blot的方法检测c-IAP1和c-IAP2的蛋白质表达水平。结果-αTOS对人乳腺癌细胞MCF7和MDA-MB-453有显著的增殖抑制作用,并表现为剂量依赖性,-αTOS对MCF7和MDA-MB-453的IC50值(细胞半数死亡的药物浓度)分别为132μmol/L和74μmol/L;RT-PCR结果显示,-αTOS使两个细胞系的c-IAP1的转录水平显著下降,且呈时间依赖性;但对c-IAP2的转录水平没有明显影响;Western Blot的结果发现-αTOS使得这两种细胞系的c-IAP1蛋白质翻译水平也呈下降趋势,该结果与mRNA转录水平下降相一致,对c-IAP2蛋白质的表达几乎无影响。因此,α-TOS可能通过抑制c-IAP1蛋白的表达而抑制MCF7和MDA-MB-453乳腺癌细胞的生长增值,a-TOS有望开发成为新的预防和治疗乳腺癌的有效药物。

磷脂酶A2对冠状动脉粥样硬化大鼠疾病严重程度的评估价值

目的探讨磷脂酶A2(Lp-PLA2)与冠状动脉粥样硬化大鼠疾病严重程度和稳定性的关系。方法SPF级雄性SD大鼠随机分为健康组、模型1组、模型2组。健康组给予普通饲料喂养并注射等量生理盐水;模型1组连续4 d腹腔注射维生素D320万U/(kg·d),并使用高脂饲料喂养7周;模型2组给予一次性腹腔注射维生素D380万U/kg,喂养方式、时间同模型1组。模型1组和模型2组分别在造模成功后使用阿托伐他汀灌胃4周;健康组大鼠给予等量生理盐水灌胃。记录各组大鼠体质量变化;测量各组大鼠主动脉粥样硬化斑块面积(PA)、血管管腔面积(LA),计算校正斑块面积(PA/LA);检测各组大鼠三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及Lp-PLA2和超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。结果与健康组比较,模型1、2组大鼠喂养2、3周体质量增加(P<0.05)。模型1、2组大鼠造模后及治疗后血管LA低于健康组(P<0.05)。与造模后比较,模型1、2组治疗后血管LA增加,主动脉粥样硬化PA及PA/LA降低,但模型2组治疗后血管LA低于模型1组,主动脉粥样硬化PA及PA/LA高于模型1组(P<0.05)。与健康组比较,治疗后模型1、2组大鼠TG、TC、LDL-C、hs-CRP含量及Lp-PLA2活性均显著升高,且模型2组TG、TC、LDL-C、Lp-PLA2活性高于模型1组,但hs-CRP含量低于模型1组(P<0.05);与造模后比较,模型1、2组大鼠治疗后TG、TC、LDL-C、hs-CRP含量及Lp-PLA2活性均显著降低(P<0.05)。结论血清Lp-PLA2水平能反映冠状动脉粥样硬化疾病严重程度和稳定性,且随着冠状动脉粥样硬化病变严重程度和不稳定性增加而升高。

近交系HFJ大鼠血清中IL-1β、IL-2和IL-10观察研究

目的比较观察本实验室培育的近交系HFJ大鼠和Wistar大鼠血清中IL-1β、IL-2和IL-10的含量。方法 HFJ大鼠和远交群Wistar大鼠各10只,应用ELISA法分别检测其血清IL-1β、IL-2和IL-10水平。结果 HFJ大鼠血清中IL-1β、IL-2的含量与Wistar大鼠相比差异无统计学意义(P>0.05),HFJ大鼠血清中IL-10的含量高于Wistar大鼠组,差异有统计学意义(P<0.05)。且HFJ大鼠的IL-1β、IL-2和IL-10总体离散度明显小于Wistar大鼠组。结论 HFJ大鼠血清IL-10高于Wistar大鼠且近交系HFJ大鼠的IL-1β、IL-2和IL-10,测定值较为均一,离散度均低于Wistar大鼠。

大鼠肝包膜下移植Walker-256制备肝癌模型

目的通过原位移植的方法制备大鼠肝癌动物模型。方法取大鼠肿瘤细胞Walker-256制备为浓度1×108个/ml,分别于Wistar大鼠肝包膜下接种0.04 ml。观察大鼠肝脏实体瘤的生长情况及肺转移的发生率。结果肝包膜下接种细胞悬液7 d可见较小肿瘤块生长;14 d开始出现肺转移,并伴有肠系膜、生殖系统的转移;21 d肺转移率达100%。肝肿瘤组织HE染色结果可见肿瘤组织呈条索及团块状排列,排列紊乱,癌细胞索之间由血窦相连,癌肿边缘的肝组织受压萎缩。肺组织切面有多个散在的圆形或卵圆形实化灶。HE染色结果可见腺体样或乳头状结构,核染色深,核仁、核膜比较清楚。