蛋白质工程提升糖酶热稳定性研究进展

糖酶是制糖工业中不可或缺的一种酶制剂。天然糖酶在长时间高温转化制糖时难以保持较好的稳定性,制约了其在工业生产中的应用。大量研究表明蛋白质工程手段是提升糖酶热稳定性的重要手段和策略。本文系统地综述利用蛋白质工程手段提高糖酶热稳定性的最新进展,详尽分析蛋白质工程中的定向进化、理性设计和半理性设计策略。同时评估这些策略在提高糖酶热稳定性方面的效果及其潜在的工业应用价值,并指出各策略的优势、不足和面临的挑战。最后提出应结合多种方法策略提高糖酶热稳定性的建议,并展望未来研究的方向,以期实现糖酶热稳定性和酶活性的协同提高。

H5N1亚型禽流感病毒NS1基因截短体的克隆与原核表达

禽流感病毒H5N1 NS1蛋白是一种非结构蛋白,在病毒感染过程中发挥着重要的作用。构建基因截短的重组蛋白,可为进一步研究NS1不同结构域与宿主蛋白间的相互作用奠定基础。在成功克隆禽流感病毒H5N1全长NS1基因并测序的基础上,将部分截短基因序列克隆到表达载体pET28a(+)上,构建基因截短的重组表达质粒pET28a-NS1-RBD和pET28a-NS1-ED,转化大肠埃希菌BL21(DE3),阳性重组质粒经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE检测,获得预期蛋白的表达,然后利用Ni-NTA树脂蛋白纯化系统对重组蛋白进行纯化,并通过Western Blotting进一步确认NS1及截短体蛋白的表达。结果表明,实验成功构建禽流感病毒H5N1亚型的NS1蛋白截短体,并在大肠埃希菌中高效表达,这为进一步研究NS1蛋白不同结构域与宿主蛋白的相互作用提供了实验材料,为深入研究NS1蛋白的生物学功能奠定了坚实基础。

禽流感病毒H5N1亚型NS1蛋白的研究进展

NS1蛋白(non-structural protein 1)是A型流感病毒重要的非结构蛋白,作为流感病毒的致病因子,NS1通过多种方式增强病毒的致病性和毒力。就H5N1禽流感病毒NS1蛋白的结构与功能进行了综述。

基于分子对接技术筛选中草药中潜在的H1N1病毒神经氨酸酶抑制剂

甲型H1N1流感病毒是一种高度接触性急性呼吸道传染病,给人类健康造成了极大威胁。作为一个已经被证明的抗流感药物靶点,神经氨酸酶在流感病毒复制和传播中发挥重要作用,并且其活性中心的氨基酸组成高度保守。本研究中,我们使用分子对接技术筛选从中草药小分子数据库中筛选神经氨酸酶潜在的抑制剂,结果得到4个亲和力高于奥司他韦(Osel-tamivir)的化合物,并确定了他们的中草药来源。为从草药中提取,设计以及实验合成新的神经氨酸酶抑制剂提供了一定的依据和指导。

频域地震波场的数值模拟

讨论在频域上地震波场的数值模拟.采用傅里叶变换把地震波场的数值模拟问题转化为Helmholtz方程边值的求解问题,再采用Nystrom法求解,使数值模拟具有较高精度.同时采用吸收边界使得数值模拟效果更好.

传输问题的一种数值解法

研究了一类传输散射问题的数学模型,通过单层位势及其跳跃关系的运用把传输散射问题转化为了积分方程问题.在给出了理论证明的基础上,并给以数值算法及例子,数值结果证明了该方法的可行性和精确性.

一类Fredholm型弱奇性核积分方程的数值解

在断裂力学问题中,通过确定某些物理量之间的关系,可以将其转化为积分方程.对于具有对数函数弱奇异性积分核的一类Fredholm型I类积分方程,解的性质主要取决于方程中未知函数的形式.根据积分方程的特点,给出一种数值计算方法,并给出了数值例子,最后通过数值解与精确解的比较说明了该方法的有效性.

‘优选1号’欧李果叶涩味物质变化

以‘优选1号’欧李不同时期的果实和叶片为试材,采用常规方法,研究了欧李果实成熟前后果叶中单宁、类黄酮、总酚含量与代谢相关酶活性(PAL、C4H、4CL、CHI、DFR)的变化对欧李果实涩味的影响,以期为优质鲜食欧李新品种的选育提供参考依据。结果表明:在果实成熟过程中,果皮的颜色由绿逐渐变红,果实的风味也由涩逐渐变甜,果肉中的涩味物质(单宁、类黄酮、总酚)含量也逐渐显著减少,其中单宁含量从5.38%下降至0.67%,类黄酮含量从2.13%下降至0.14%,总酚含量从9.20%下降至0.71%,果肉中的3种涩味物质两两之间呈显著正相关关系,且与果肉中的这5种酶(PAL、C4H、4CL、CHI、DFR)也呈极显著正相关关系。叶片中的单宁、类黄酮、总酚含量呈先增大后降低再增大的趋势,与果肉中这3种物质的变化规律不同。在果叶关系中,果肉中的涩味物质与叶片中的单宁、类黄酮、PAL、C4H、DFR之间呈极显著负相关关系,与总酚、4CL、CHI无关;果肉中的PAL活性与叶片中的各指标间都存在显著相关性(与4CL、CHI显著正相关,其它显著负相关);果肉中的CHI、DFR与叶片中的4CL之间呈显著正相关,与CHI之间无显著性关系,与其它6种物质之间呈显著负相关。综上所述,果肉中单宁、类黄酮、总酚含量越低,果实涩味越小,且叶片中单宁含量、类黄酮含量、PAL、C4H、DFR活性的增加有利于果肉中单宁含量、类黄酮含量、总酚含量、PAL、CHI、DFR活性的减少,有利于果肉涩味减小。

欧李砧木对桃叶片解剖结构和抗旱能力的影响

为探讨欧李砧木对桃叶片解剖结构及抗旱能力的影响,以瑞蟠4号/欧李和瑞蟠4号/毛桃的叶片为材料,采用石蜡切片法,应用光学显微技术,测定叶片厚度、栅栏组织厚度和海绵组织厚度等16个与抗旱相关的解剖结构特征参数,并通过主成分分析法及隶属函数法进行抗旱性综合评价。结果表明,与毛桃砧相比,欧李砧显著增大了叶片厚度、气孔大小、上下角质层厚度、上下表皮厚度、栅栏组织厚度、栅海比,显著降低了栅栏组织细胞长度、海绵组织厚度、组织紧密度和组织疏松度(P<0.05)。16项指标(权重)反映抗旱能力顺序为:海绵组织厚度(0.256)>组织紧密度(0.253)>栅栏组织细胞长度(0.250)>海绵组织细胞宽度(0.243)>海绵组织细胞长度(0.241)>气孔密度(0.234)>下表皮厚度(0.231)>上表皮厚度(0.227)>栅栏组织细胞宽度(0.217)>栅栏组织厚度(0.214)=组织疏松度(0.214)>上角质层厚度(0.211)>栅海比(0.195)>下角质层厚度(0.165)>气孔大小(0.158)>叶片厚度(0.086)。运用隶属函数法结合各指标所占权重综合评价得出:瑞蟠4号/欧李的抗旱性强于瑞蟠4号/毛桃。表明欧李砧木对桃叶片解剖结构具有显著影响并能提高桃的抗旱能力。

核桃炭疽病防治的药剂筛选

以感染炭疽病的核桃病果为试材,采用稀释涂布平板法分离出炭疽病病原菌,研究了10%世高、15%三唑酮、12.5%腈菌唑、45%咪鲜胺4种杀菌剂在不同药剂浓度下对核桃炭疽病病原菌的抑制作用及复配使用的抑菌效果,以期筛选出防治核桃炭疽病较好的药剂。结果表明:单独药剂10%世高50 mg·L^-1、15%三唑酮150 mg·L^-1、12.5%腈菌唑300 mg·L^-1的抑菌效果最好,不同浓度的45%咪鲜胺防治效果均较好,抑菌效果明显;15%三唑酮、10%世高、12.5%腈菌唑之间进行复配时发现抑菌率比单独使用有所降低;45%咪鲜胺112.5 mg·L^-1分别和15%三唑酮150 mg·L^-1、10%世高50 mg·L^-1、12.5%腈菌唑300 mg·L^-1复配使用,对核桃炭疽病病菌的菌丝生长抑制具有较为明显的增效作用;其中45%咪鲜112.5 mg·L^-1与15%三唑酮150 mg·L^-1复配防治效果达100%。防治效果优异,可以推荐生产上使用。

桃接穗对欧李砧木根系生长习性的影响

为了探讨桃接穗对欧李砧木根系生长习性的影响,以欧砧1号、春美/欧砧1号的根系为试材,测定两种根系的分支习性、解剖结构、矿质元素含量及呼吸酶活性等指标。研究结果表明:与欧砧1号相比,春美/欧砧1号1级侧根的根数、根径和长度分别显著增大36.61%、26.19%和36.96%,根分支能力增强;2级根和5级根的根径分别显著增大24.95%和20.96%,中柱直径分别增大30.77%和21.12%。Mn含量在3级根中显著减小32.76%。琥珀酸脱氢酶(SDH)活性在3级根中显著增大82.52%,乙醇脱氢酶(ADH)活性在1级根到5级根中分别显著减小78.42%、79.39%、81.01%、75.17%和48.11%。桃接穗促进了欧砧1号根系的生长,提高了根系吸收水分和养分的能力,降低了无氧呼吸能力。

培智学校学生档案管理工作初探--以昆明市某培智类特教学校为例

昆明市某培智类特教学校在实际工作中探索、整理了学生档案管理涉及的部门、人员和内容,提出了学生档案管理的实施建议,明确了学生档案管理需完善的内容和发展的方向,总结出学生档案管理的发展实质是教育管理理念的转变。

新工科背景下生物化学课程思政建设的探索与实践

生物化学课程作为专业基础课程,在生物、食品、医学、发酵等专业中广泛开设,承担着培养人才的重任。随着大思政思想渗透到所有学科和专业,生物化学课程思政建设的成败直接关系到为党育人、为国育才的成效。构建生物化学课程思政,并有机融合课程教学,是实现全方位育人的关键。基于新工科背景,本文从生物化学概况、生物化学课程思政建设的必要性、生物化学课程思政建设方案、实施策略及成效等方面对该课程近年的课程思政实践与探索进行总结,以期为相关高等院校生物类专业课程思政建设提供参考。

二维Helmholtz方程外问题的数值解法

利用位势理论把Helmholtz方程外问题转化为第二类积分方程的求解问题.在处理积分算子核时,采用了一种新的裂解方式,再利用Nystrm方法求解数值结果.最后针对该方法给出数值实例,以表明此方法的有效性.

云南省特殊教育学校培智学生感知觉训练开展情况的现状调查

通过对云南省56所特教学校培智学生感知觉训练开展情况进行调查后发现,大部分特教学校开展培智教育的年限不长,仅有一半学校了解康复训练课程标准的内容,但都一致认为需要开展感知觉训练。绝大多数学校开设了感知觉训练课程,或将其融到学科教学中开展,教学组织形式、教学频次因学校办学条件不同而各有不同。评估工具的选择、教学目标的制定和教学内容的选择还有待规范和完善。

不同D/L单体比γ-聚谷氨酸的合成与调控

聚谷氨酸(γ-PGA)是由L-谷氨酸和/或D-谷氨酸聚合而成的一种聚氨基酸,广泛应用于化妆品、医药等领域。高聚物单体的立体构型会影响产品性质和应用,因此调控γ-PGA中D-谷氨酸/L-谷氨酸单体比(D/L单体比)具有重要意义。前期以谷氨酸棒杆菌为底盘,表达来自于地衣芽孢杆菌的γ-PGA合成酶,合成以L-Glu(97.10%)为主的γ-PGA。通过外源添加不同浓度D-谷氨酸,合成了D-谷氨酸占比为15.71%~33.52%的γ-PGA。然后,在重组菌中表达来自于枯草芽孢杆菌的谷氨酸消旋酶,并使用三个不同强度RBS调控其表达水平,合成D-谷氨酸占比30.82%~34.59%的γ-PGA,但调控范围较窄。利用四个不同强度启动子调控谷氨酸消旋酶表达水平,扩大D/L单体比可调范围,合成D-Glu占比32.71%~52.53%的γ-PGA。提供一种理性调控γ-PGA的D/L单体比策略,实现了D-谷氨酸占比为2.90%~52.53%的γ-PGA的合成,为高效合成不同D/L单体比γ-PGA提供了基础。

原子力显微镜力谱研究大肠杆菌启动子与RNA聚合酶的相互作用

【目的】本研究通过原子力显微镜(AFM)力谱技术研究了大肠杆菌启动子与RNA聚合酶(RNAp)间的相互作用,目的是建立一种高效的体外表征启动子的新方法。【方法】优化了用于单分子AFM力谱分析的蛋白固定化策略,建立AFM力谱分析启动子的策略,以缺失识别启动子序列的σ亚基核心RNA聚合酶(RNAp-C)为对照,研究启动子/RNAp间相互作用的特异性。最后比较了序列较典型的Ls1启动子和缺失–10区的Ls2启动子的力谱。【结果】基于建立的方法,验证了Ls1与大肠杆菌RNAp结合的特异性,其相互作用力为(331.10±5.10)p N。与Ls1相比,Ls2启动子与RNAp结合显著减少。利用启动子探针质粒,以报告基因cat的表达产物氯霉素乙酰转移酶(CAT)的酶活验证Ls1、Ls2启动子强度,分别为(181.70±4.10)、(0.30±0.20)U/mg。【结论】本研究建立的基于AFM力谱技术的启动子分析技术,是一种高效的、直接定量表征启动子活性的新方法。