重组早孕因子的原核表达及多克隆抗体制备

对牛源早孕因子进行生物信息学分析,构建了含有促溶标签的原核表达载体pET-28a-srEPF,经IPTG成功诱导表达,亲和层析纯化早孕因子,再以重组蛋白为免疫原,免疫动物制备多克隆抗体,Western blotting对表达蛋白及其多抗进行检测。结果表明,成功制备早孕因子重组蛋白,分子质量为26 ku,纯化后BCA法测定其浓度为1.1 mg/mL,早孕因子重组蛋白和去除抑制区的EPF蛋白均可与制备的多抗特异性结合,间接ELISA测定其效价为1∶256000。