基于双能X线吸收测量法的三种胫骨软骨下骨骨密度测量方法的信度与效度分析

目的观察基于双能X线吸收测量法(DXA)的三种胫骨近端软骨下骨骨密度检测方法的信度与效度。方法招募28名健康女性,利用双能X线骨密度仪扫描膝关节;由2名研究者分别应用三种不同测量方法选取ROI进行测量分析,通过计算组内相关系数值(ICC),评价各方法的复测信度与测量者间信度,利用t检验评价区分效度。结果三种方法均具有较好的复测信度(ICC 0.833～0.998)与测量者间信度(ICC 0.905～0.997),且对低年龄者和高年龄者具有较好的区分效度(P<0.05)。结论利用双能X线骨密度仪研究膝关节软骨下骨具有可行性;本研究分析的三种测量方法可有选择地用于临床研究。

蛇床子素对大鼠原代软骨细胞增殖的抑制作用

目的:观察蛇床子素对大鼠软骨细胞增殖的影响。方法:分离出生24h内大鼠的软骨细胞,进行原代培养。细胞扩增至第2代时观察1周内细胞增殖情况,并用细胞免疫荧光法鉴定Ⅱ型前胶原基因(typeⅡprocollagen gene,Col2a1)的表达。将第2代软骨细胞分为对照组和不同浓度蛇床子素(6.25、12.5、25和50μmol/L)组。药物作用24和48h后,观察细胞增殖情况,蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和细胞周期素D1(cyclinD1)的表达。结果:第2代原代软骨细胞活力正常,Col2a1表达明显。蛇床子素可以抑制软骨细胞的增殖,并随浓度的增加,抑制作用愈明显。蛋白质印迹法和聚合酶链反应法检测发现,随着蛇床子素浓度的增加,软骨细胞中PCNA和cyclinD1的表达下降。结论:蛇床子素可能通过抑制PCNA和cyclinD1的表达发挥抑制软骨细胞增殖的作用。

金利胶囊对膝骨关节炎兔骨骼肌收缩蛋白基因与软骨基质蛋白多糖表达的影响

[目的]通过观察兔膝骨关节炎(KOA)骨骼肌蛋白与软骨基质蛋白多糖(PGs)表达,探讨柔肝中药金利胶囊治疗KOA的作用及机理。[方法]42只新西兰大白兔分为空白对照组(K组),模型对照组(MD组),金利干预组(R组);MD组与R组动物以改良Hulth法造模,R组造模并给药;取膝关节行番红/固绿染色、Mankin评分;RT-PCR检测肌肉α-肌动蛋白(-αactin)、重链肌球蛋白亚型(MHCⅠ,MHCⅡa,MHCⅡd/x,MHCⅡb)、Aggrecan与ADAMTS5 mRNA表达,检测关节软骨糖胺聚糖(GAG)水平。[结果]与模型组比较,R组Mankin评分降低,-αactin与多种MHC亚型mRNA表达水平上调(P<0.05);Aggre-can mRNA呈高表达,ADAMTS5 mRNA低表达(P<0.05)。[结论]金利胶囊能够延缓OA软骨退变,促进骨骼肌收缩蛋白基因表达,改善软骨基质蛋白多糖代谢。

软骨利胶囊对骨关节炎小鼠股四头肌收缩蛋白mRNA表达的影响

背景:骨关节炎的病理改变涉及多种关节构成组织,其中骨骼肌的地位日渐引起研究者关注。目的:通过观察骨关节炎C57小鼠骨骼肌收缩蛋白α-肌动蛋白与肌球蛋白重链基因表达状况,探讨柔肝中药软骨制剂利胶囊对收缩蛋白基因表达的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-09/2007-01在上海市中医药研究院骨伤科研究所完成。材料:选取7周龄清洁级C57小鼠18只,雌雄各半,体质量(20±5)g。软骨利胶囊(柔肝中药制剂),由上海中医药大学中药标准化中心提供。方法:18只C57小鼠按随机数字表随机分为正常组、模型组、软骨利组,每组6只。除正常组外,对小鼠进行运动负荷训练造模。软骨利组给予0.2mL软骨利溶液(约含2mg软骨利)灌胃5周,正常对照组和模型组给予0.2mL生理盐水灌胃5周。主要观察指标:应用反转录-聚合酶链反应检测股四头肌肌α-actin、肌球蛋白重链4种亚型(Ⅰ,Ⅱa,Ⅱd/x,Ⅱb)mRNA表达水平。结果:与空白组比较,模型组α-actin mRNA显著低表达(P<0.05),肌球蛋白重链Ⅱa,肌球蛋白重链Ⅱd/x mRNA低表达(P<0.05)。与模型组比较,软骨利干预组α-actin与多种肌球蛋白重链亚型mRNA表达水平上调(P<0.05)。结论:柔肝中药制剂软骨利能够促进骨骼肌收缩蛋白基因表达,提示其可改善骨关节炎动物骨骼肌肌力。

上海市区中老年骨质疏松症患者骨折风险的FRAX^(TM)评估报告

目的调查上海市区中老年骨质疏松症患者的骨折风险。方法对纳入的300例病例采用FRAXTM10年骨折风险评估表,调查患者年龄、性别、身高、体质量、脆性骨折史、父母脆性骨折史、口服激素史、类风湿关节炎史、吸烟史、饮酒史,并测定L1-L4和髋部骨密度;分析不同年龄段主要部位脆性骨折风险、髋部脆性骨折风险以及骨折风险与年龄、体质量指数、骨密度的相关性。结果①300例调查者中男女比例为1∶3.6;女性患者腰椎和髋部骨密度均明显低于男性患者(P<0.05),主要部位脆性骨折风险和髋部脆性骨折风险均明显大于男性患者(P<0.05)。②不同年龄段女性主要部位脆性骨折风险和髋部脆性骨折风险不同,主要部位脆性骨折风险以60～69岁年龄段最高(P<0.05),髋部脆性骨折风险以70～79岁年龄段最高(P<0.05)。③主要部位脆性骨折风险与腰椎及髋部骨密度均呈线性负相关(r=-0.443,r=-0.545),与男性患者体质量指数和年龄呈线性负相关(r=-0.349,r=-0.617)。④髋部脆性骨折风险与腰椎骨密度、髋部骨密度及体质量指数呈线性负相关(r=-0.405,r=0.676,r=-0.19),与女性患者年龄呈线性正相关(r=0.213)。结论上海市区中老年骨质疏松症患者中女性骨折风险较高,且主要部位脆性骨折风险以年龄在60-69岁者最高,髋部骨折风险以70-79岁者最高;骨折风险与骨密度成负相关。

左归丸、右归丸对成骨细胞骨硬化蛋白的影响

目的:观察左归丸、右归丸对体外培养的成骨细胞骨硬化蛋白(Sclerostin)及β连环蛋白(β-catenin)表达的影响。方法:成年SD大鼠灌胃法获得左归丸、右归丸含药血清。体外培养SD乳鼠颅骨成骨细胞,取第3代细胞分对照组、左归丸组、右归丸组,各组含药血清培养后分别测细胞增殖、Sclerostin和β-catenin蛋白表达。结果:与对照组比较,右归丸组在5d、7d、9d时细胞明显增殖,左归丸组在7d、9d时细胞显著增殖(P<0.01),与左归丸组比较,右归丸组在5d时细胞明显增殖(P<0.05)。右归丸组在24h、48hSclerostin蛋白表达较对照组增高(P<0.05),左归丸组在24h较对照组减少(P<0.05)。与右归丸组相比,左归丸组在24h、48h Sclerostin蛋白表达显著下降(P<0.01)。右归丸组β-catenin蛋白表达在48h时较对照组有显著增高(P<0.05),左归丸组β-catenin蛋白表达在24h、48h均显著高于对照组(P<0.01)和右归丸组(P<0.05)。结论:右归丸、左归丸对成骨细胞均具有显著的促增殖作用,而右归丸较左归丸作用更明显。左归丸可能是通过抑制Sclerostin蛋白的表达发挥促成骨作用,右归丸无抑制Sclerostin蛋白表达作用。

补肾阳中药对成骨细胞Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响

目的:观察右归丸、淫羊藿、淫羊藿苷含药血清对成骨细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路的作用。方法:获取新生SD乳鼠的成骨细胞,体外培养至第3代细胞,分对照组、右归丸组、淫羊藿组、淫羊藿苷组共4组,分别在含药血清培养后1、3、5、7、9d时用WST法测细胞增殖情况;培养48h后,以In-cell western blot的方法检测各组成骨细胞wnt3a、wnt7b、β-catenin蛋白的表达情况。结果:与对照组比较各组均能促进成骨细胞的增殖,右归丸组在5d、7d、9d时差异有统计学意义,淫羊藿组在7d、9d时差异有统计学意义,淫羊藿苷组在9d时差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,右归丸组能显著提高成骨细胞Wnt3a、Wnt7b、β-catenin蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05)。淫羊藿组及淫羊藿苷组虽能提高Wnt7b的蛋白表达,但与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。同时,淫羊藿组、淫羊藿苷与右归丸组比较,在对Wnt3a、Wnt7b、β-catenin蛋白表达的作用上比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:右归丸、淫羊藿、淫羊藿苷三者均能促进体外培养的大鼠成骨细胞的增殖,以右归丸作用最显著;右归丸可显著促进wnt3a、wnt7b、β-catenin蛋白的表达。

人脐静脉内皮细胞与成骨细胞共培养对成骨细胞功能的影响

目的:建立人脐静脉内皮细胞与人成骨细胞共育系,观察人脐静脉内皮细胞在共育系中对人成骨细胞功能的影响,进一步探讨人脐静脉内皮细胞对成骨细胞骨形成能力的影响。方法:采用二维共培养模型建立人内皮细胞/成骨细胞(1∶1)共育系,运用噻唑蓝比色法(MTT),分别在1d、3d、5d、7d时观察人脐静脉内皮细胞与成骨细胞单体培养以及共育系中的增殖情况;同时,运用蛋白免疫印迹方法(In cell western blot)分别测定人成骨细胞单体培养和共育系中骨保护素/破骨细胞分化因子配体(OPG/RANKL)蛋白的表达情况。采用方差分析比较不同状态下细胞增殖能力和蛋白表达的差异性。结果:从第3天开始,共育系中人成骨细胞的增殖能力明显优于成骨细胞单体培养;两者比较差异有统计学意义(P<0.05);于细胞培养第8天时分别测定人成骨细胞单体培养组和共育系中OPG/RANKL蛋白的表达,观察到共育系中(10.82±1.08)OPG蛋白表达量明显优于人成骨细胞单体培养组(6.65±0.43),两者比较差异有统计学意义(P<0.05);而共育系中(7.33±0.22)RANKL蛋白的表达含量与人成骨细胞单体培养(7.37±0.85)时表达无差异。结论:人脐静脉内皮细胞与人成骨细胞具有良好的相容性,两种细胞之间具有相互协同效应;人脐静脉内皮细胞可能通过促进OPG蛋白的表达来促进成骨细胞骨形成的作用。