用DNA重组技术获得乙型肝炎病毒e抗原及其在临床检测中的应用

HBeAg和抗-HBe是乙型肝炎的经典标志物。HBeAg基因与HBcAg基因在DNA C区上相重叠。为要获得重组DNA衍生的HBeAg,本文从adw_2亚型HBV 3.2 kb全长DNA上切取带有HBc基因的BamHI-EcoRI片段,用Bal31和Hpa Ⅱ酶处理产生一系列长度不同的片段,与载体pUR222和pUC 18构成不同的重组质粒,转化到大肠杆菌。通过平板筛选、质粒酶切图谱和抗原抗体反应等筛到高效表达HBeAg的转化株YG301和YG302,中和试验证明了重组HBeAg的血清学特异性。用凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析对其进行提纯并用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合Western印迹法进行纯度鉴定、含量分析和分子量测定。重组HBeAg制品具有高活性、稳定和安全等特点,实验证明它可以代替血源HBeAg制成酶联药盒用于乙肝诊断检测。

大肠杆菌合成的乙型肝炎病毒核心抗原的研究 HBcAg基因在大肠杆菌内和膜上表达

前言乙肝病毒c基因的克隆和表达的研究,国内外近年来有多篇报道。近有学者提出乙肝核心抗原(HBcAg)的前c区(PreC)可能为HBcAg分泌所必须,它使后者嵌合在肝细胞膜上成为靶抗原,产生免疫反应而造成肝细胞的损伤。本文将为HBcAg编码的c基因分别和载体pUR222及pⅠN-ⅡC重组得到重组质粒pHW202和pDC022。

人CD34单链抗体基因的构建及序列测定

目的：获得抗人ＣＤ３４单链抗体基因。方法：选用一株分泌抗ＣＤ３４抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株，提取总ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增出此抗体的重链可变区和轻链可变区基因，与Ｋａｂａｔ抗体库比较得到其框架区和互补决定区的氨基酸序列；重新合成两对引物去掉保留的分泌信号前导序列并加入适当的限制性内切酶酶切位点，再经ＰＣＲ得到所需要的重链可变区和轻链可变区基因，经一弹性连接肽连接构建成抗人ＣＤ３４的单链抗体（ｓＦｖ）基因。结果：ＤＮＡ序列分析结果表明，获得的单链抗体基因的轻链可变区属于鼠κ轻链第Ⅴ亚族，重链可变区属于鼠重链第Ⅰ（Ｂ）亚族。结论：构建的抗人ＣＤ３４单链抗体基因全长为８１３个碱基，编码蛋白的相对分子质量约为３００００。