蜂王浆主蛋白2在昆虫细胞-杆状病毒系统中的表达与鉴定

本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达蜂王浆主蛋白2(MRJP2),为后续MRJP2功能的深入研究提供材料。根据GenBank中意大利蜜蜂(Apis mellifera L.)MRJP2基因序列,经PCR扩增、克隆至真核表达载体pFastBac1,构建重组杆状病毒质粒MRJP2-Bacmid并转染至Sf9昆虫细胞,以P2代杆状病毒感染Sf9细胞进行诱导表达,利用层析柱和离子交换柱对表达产物进行纯化,并通过SDS-PAGE、Western blotting及四极杆静电场轨道阱高分辨质谱仪(Q Exactive)对目的蛋白进行分析验证。结果显示,本试验成功构建杆状病毒质粒MRJP2-Bacmid,转染至Sf9昆虫细胞并获得表达产物。SDS-PAGE和Western blotting验证结果表明,本研究成功利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达出大小约为52 ku的MRJP2重组蛋白,且纯度较高;质谱分析结果显示,该重组蛋白匹配到蜜蜂蛋白质数据库中MRJP2的特异性肽段为39个,序列覆盖率为61%,且与MRJP2的匹配得分最高,进一步确认该重组蛋白为MRJP2。本研究利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统成功表达出MRJP2,为后续该蛋白生物学功能的深入研究奠定了基础。

蜜蜂全脑解剖、腺体分离及不同日龄组织形态比较

蜜蜂作为一种重要的社会性昆虫,具有复杂的学习记忆和精确的信息交流能力。蜜蜂大脑是各种信息的处理中心,是模式生物神经生物学的重要研究对象。精确解剖蜜蜂脑是研究神经生物学的关键,但由于蜜蜂脑体积小且被几丁质外壳包裹,完整解刨脑部并进行脑内分区一直是技术难题。为解决蜜蜂脑解剖难度大、速度慢和质量差的问题,我们探索和改进蜜蜂脑解剖方法,实现了快速高效的解剖蜜蜂脑及其亚分区,为深入研究蜜蜂脑神经生物学提供帮助。取新鲜或CO2麻醉的蜜蜂,用2根昆虫针穿过胸部正面固定于蜡盘,在显微镜下用尖头镊子划开复眼后方的几丁质外壳,掀开脑壳,取出全脑放在含有蛋白酶/RNA酶抑制剂溶液的载玻片上,然后进行组织分区。经过练习掌握方法后,可以快速准确解剖蜜蜂脑,并获得蘑菇体、咽下腺、上颚腺、视神经叶和嗅神经叶等亚器官结构,从解剖到分区可以在2分钟内完成,且样品的外部形态完整,质量好。蜜蜂头部的器官解剖结果显示,出房蜂、哺育蜂和采集蜂3个日龄蜜蜂脑、咽下腺、上颚腺、唾液腺均有明显差异,这与其器官发育和劳工分配具有密切关系。