阿魏酸钠拮抗氧化型脂蛋白(a)对人动脉平滑肌细胞的作用

目的 :研究脂蛋白 (a) [Lp(a) ]氧化前后致人动脉平滑肌细胞 (SMC)增殖及细胞内游离钙浓度([Ca2 + ] i)的变化 ,观察阿魏酸钠 (SF)对其的影响。方法 :Lp(a)经体外Cu2 + 氧化法氧化 ,硫代巴比妥酸 (TBARS)比色法检测氧化程度 ,培养的人动脉SMC中分别加入不同浓度SF ,作用 1 2h后再与天然和氧化型Lp(a)共同孵育 ,以MTT比色法、流式细胞仪检测细胞增殖状况 ,采用荧光探针Fura - 2 /AM检测细胞 [Ca2 + ] i。结果 :氧化型Lp(a)促人动脉SMC增殖的同时亦明显增加了 [Ca2 + ] i 水平 ,作用较天然Lp(a)明显 ,SF(40 ,80mg/L)可显著抑制氧化型Lp(a)所致的细胞增殖和 [Ca2 + ] i增加 ,并呈剂量效应关系 ,而对天然Lp(a)所致的细胞增殖和 [Ca2 + ] i 增加无明显影响。结论 :氧化型Lp(a)通过升高 [Ca2 + ] i 而显著促动脉SMC增殖可能是其致动脉粥样硬化的机制之一 。

重组apo(a) Kringle Ⅳ-10对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响

通过研究重组apo(a)KringleⅣ 10 (KⅣ 10 )的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响 ,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用 ,为脂蛋白 (a) [lipoprotein(a) ,Lp(a) ]致动脉粥样硬化机理研究提供依据 .将含apo(a)野生型KⅣ 10 ((wild typeKⅣ 10 Trp72 ,wt KⅣ 10 Trp72 )和突变型KⅣ 10 (mutate typeKⅣ 10 Trp72 ,mut KⅣ 10 Arg72 )基因片段重组质粒 ,分别转化至E .coliDH5α菌株中并表达含这 2个重组片段的融合蛋白 ,通过Glutathione Agarosebeads亲和层析柱进行分离和提纯 ,经L Lys Sepharose 4B亲和层析柱检测其赖氨酸结合能力 .再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基 ,观察这 2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothe lialcells ,HUVEC)结合的影响 .结果显示 :在E .coliDH 5α菌株中表达的野生型谷胱甘肽S 转移酶(glutathioneS transferase ,GST) KⅣ 10 Trp72 (GST wt KⅣ 10 Trp72 )融合蛋白和突变型谷胱甘肽S 转移酶 (GST mut KⅣ 10 Arg72 )融合蛋白在赖氨酸结合能力上存在明显差异 .其中GST wt KⅣ 10 Trp72能有效地抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合 ;而GST mut KⅣ 10 Arg72 在任一浓度范围内均无这种抑制作用 .

重组apo(a) Kringle Ⅳ-10的纯化及生物活性

目的 :通过研究重组apo(a)KringleⅣ 1 0 (KⅣ 1 0 )的赖氨酸结合能力对纤溶酶原与内皮细胞结合的影响 ,探讨apo(a)在抑制纤溶过程中的作用 ,为Lp(a)致动脉粥样硬化机制研究提供依据。 方法 :将含apo (a)野生型KⅣ 1 0 (wt KⅣ 1 0 /Trp72 )和突变型KⅣ 1 0 (mut KⅣ 1 0 /Arg72 )基因片段的重组质粒 ,分别转化至E .coliDH5α菌株中并表达含这 2个重组片段的融合蛋白 ,通过Glutathione Agarosebeads亲和层析进行分离和提纯 ,经L Lys Sepharose 4B亲和层析检测其赖氨酸结合能力。再以异硫氰酸荧光素标记的纤溶酶原为配基 ,观察这 2种基因表达片段对纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞结合的影响。结果 :实验结果显示 :在E .coliDH5α菌株中表达的GST wt KⅣ 1 0 /Trp72 能有效抑制纤溶酶原与人脐静脉内皮细胞的结合 ;而GST mut KⅣ 1 0 /Arg72 在任一浓度范围内均无这种抑制作用。结论 :apo (a)KⅣ 1 0对纤溶的抑制作用与其赖氨酸结合能力密切相关 ;而KⅣ 1 0的赖氨酸的结合能力与其赖氨酸结合位点中的Trp72

氚-胆固醇标记血浆脂蛋白方法的研究

本研究用~3H-胆固醇标记血浆脂蛋白,血浆经3.75％PAGE,可将脂蛋白分成HDL、LDL和VLDL。分别测定各脂蛋白的每分钟计数(cpm),并计算放射化学纯度。HDL、LDL和VLDL的放射化学纯度分别为99％、96％和94％。本法标记的脂蛋白具有一定的化学稳定性,不改变生物活性和其他理化性质等优点。可通过制备性PAGE纯化~3H-胆固醇标记的脂蛋白。该方法操作简单,~3H-胆固醇半衰期长,可广泛应用于血浆脂蛋白代谢的研究。