高产碱性蛋白酶菌株HAP26选育

通过对HAP26复合诱变（NTG＋N^＋离子注入）,选育出一株碱性蛋白酶活力达3.5×10^7U·L^-1的菌株HAP3-26-2。该酶生物合成类型属于半藕联合成型。碱性蛋白酶最适温度为40℃,在pH 7-11的范围内,酶活力比较稳定。

高活力液体碱性蛋白酶制备工艺研究

为了获得高质量浓缩液体蛋白酶,对提取工艺中不同絮凝剂,不同大小活性炭以及膜过滤条件进行了优化。结果表明0.1%质量分数NaAlO2絮凝剂在pH=8.0时絮凝速度快、效果好;1%中型颗粒活性炭脱色效果明显;聚丙烯膜超滤温度10℃、压力0.05 MPa时酶的回收率最高。优化后的工艺使液体酶活力提高到3.2×105μ/mL,使初始发酵液浓缩了8.3倍,酶回收率达到83.6%。

复合稳定剂对碱性蛋白酶的作用研究

通过单因素实验得出了对碱性蛋白酶稳定效果较好的几种保护剂:5 mmol.L-1Ca2+;20 mg.mL-1微胶粒抑制剂丙二醇-单甲醚;0.01%(质量体积比)可逆蛋白酶活性抑制剂4-甲酰苯基硼酸;1%甘油。在此基础上,进行L18(37)正交实验,以相对酶活率为指标,考察了不同酶活性保护剂在不同条件下对液体碱性蛋白酶活力的影响,筛选到一种优质高效的碱性蛋白酶稳定剂配方为:5 mmol.L-1Ca2+,15 mg.mL-1丙二醇-单甲醚,0.015%4-甲酰苯基硼酸,1%甘油。加入液体碱性蛋白酶40℃保存15 d后,相对酶活力仍保持在85%以上。