淫羊藿苷对人成骨细胞增殖与分化的影响

目的:观察淫羊藿苷对人成骨细胞增殖和分化的影响。方法:将人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,取第3,4代细胞,MTT法观察淫羊藿苷对人成骨细胞的增殖作用,碱性磷酸酶(ALP)比活性测定观察淫羊藿苷对人成骨细胞分化的影响,RT-PCR方法检测淫羊藿苷对人成骨细胞 BMP-2 mRNA表达的影响。结果:浓度为20μg·mL-1的淫羊藿苷能够显著促进人成骨细胞的增殖和分化,且使BMP-2 mRNA的表达升高。结论:淫羊藿苷具有促进人成骨细胞增殖和分化的作用,这一作用可能与其升高人成骨细胞BMP 2 mRNA的表达有关。

人骨髓间充质干细胞定向诱导分化为成骨细胞及其鉴定

目的 探讨将成人骨髓间充质干细胞 (MSCs)定向诱导分化为成骨细胞的方法 ,并对所诱导细胞的成骨特性进行鉴定。 方法 分离人骨髓 ,梯度离心并结合全骨髓法进行培养 ,培养基中添加成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠及抗坏血酸。贴壁细胞传代 ,取第 3代细胞鉴定其成骨特性 ;在倒置相差显微镜下观察细胞形态 ,钙 -钴法染色检测碱性磷酸酶 (AL P)表达 ,免疫组织化学检测 型胶原表达 ,原位杂交检测骨连接素 (ON)、骨桥素 (OP)表达 ,Von Kos-sa染色检测钙结节形成。 结果 第 3代人 MSCs呈典型的成骨细胞形态 ,可连续传代 10次 ;AL P染色阳性率达 85 % ; 型胶原、ON和 OP表达阳性 ;Von Kossa染色可见钙结节形成。 结论 成功地将人 MSCs诱导分化为成骨细胞 ,所诱导的细胞具有典型的成骨细胞特性。

抗骨质疏松治疗对原发性骨质疏松症患者骨密度及骨折率的影响

目的通过对132例原发性骨质疏松症患者抗骨质疏松规范治疗1年前后的对比,明确骨质疏松症早期诊断治疗的意义。方法以我院2011-2012年间门诊诊治的有完整记录的原发性骨质疏松症患者132例为研究对象,给予正规抗骨质疏松治疗1年,对治疗前后每位患者的临床症状[视觉模拟评分(Visual Analogue Score,VAS),双能X线吸取测量法(Dual Energy X-ray Absorptiometry,DEXA)测定骨密度(Bone mineral density,BMD)]、骨折发生率进行对比和统计分析。结果 85例(65%)患者首诊时伴随有腰酸背痛腿抽筋等症状,治疗3个月后明显好转,1年后仅少数人遗留轻度的腰酸背疼,与治疗前差异显著;不论是骨密度绝对值还是T值,治疗前后均有显著性差异;132例患者在1年的治疗期间仅有2例发生新发骨折,占所有患者的1.51%。结论正规的抗骨质疏松治疗不仅可以快速显著地改善临床症状,而且可以提高骨密度,并能预防骨折、降低骨折发生率。

葛根素和淫羊藿甙对成骨细胞生物学作用的比较研究

目的对比葛根素和淫羊藿甙对成骨细胞增殖和分化的影响。方法将小鼠骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞,取第3、4代细胞,以rhBMP-2为阳性对照,MTT法观察葛根素和淫羊藿甙对成骨细胞的增殖作用,碱性磷酸酶(ALP)比活性测定及钙结节计数观察葛根素和淫羊藿甙对成骨细胞分化的影响。结果20μg/ml的淫羊藿甙可显著促进成骨细胞的增殖;20μg/ml淫羊藿甙及50μg/ml葛根素均能提高成骨细胞的碱性磷酸酶活性,并使矿化结节的形成明显增多。结论淫羊藿甙不仅能促进成骨细胞的分化,还能增强其增殖能力,而葛根素主要是通过刺激分化来增强成骨细胞的活力。

人端粒酶反转录酶基因诱导人永生化成骨细胞的生物学特性

目的:研究反转录病毒(hTERT)基因诱导的人永生化成骨细胞系Clone5的生物学特性,包括增殖能力、细胞周期和是否恶性变。方法:收集30～31代Clone5和6～7代人成骨细胞(hOB),绘制两种细胞的生长曲线并用流式细胞仪检测细胞周期特征,软琼脂集落实验和裸鼠致瘤实验检测Clone5是否恶性变。结果:由生长曲线计算出细胞倍增时间:hOB:190h;Clone5:62h;曲线显示Clone5的增殖能力明显增强;流式细胞仪检测发现,Clone5细胞周期中G1期细胞占53.46%,S期细胞占28.24%,凋亡率为0.76%,hOBG1期细胞占79.81%,S期细胞占19.76%,凋亡率为33.33%。和hOB相比,Clone5G1期细胞比例减少,S期比例增加,细胞的凋亡率显著降低;软琼脂集落实验未见细胞团形成,裸鼠接种不致瘤。结论:转导hTERT基因的Clone5增殖能力明显增强,凋亡率降低,且未发生恶性变,可用做组织工程的种子细胞和研究正常骨生理、生化的工具细胞。

人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞及其体内成骨特征

目的:探讨应用人骨髓基质干细胞(humanmarrowmesenchymalseemcell,hMSC)进行骨科细胞治疗的可行性。方法:实验于2002-06/2003-02在北京大学第三医院骨科实验室完成。hMSC取自北京大学第三医院骨科脊柱外科手术患者,术前经检测无代谢性疾病。hMSC在诱导培养基的作用下定向分化为成骨细胞并大量扩增。RT-PCR法比较骨形成蛋白(BMP)-2mRNA在hMSC和成骨细胞中的表达差异。将成骨细胞复合PLGA植入裸鼠体内,硬组织切片,甲苯氨蓝染色,比较其与单纯植入成骨细胞或聚丙交酯-乙交酯(PLGA)时的异位成骨情况。结果:BMP-2mRNA在成骨细胞中的表达明显强于未经诱导分化的hMSC;成骨细胞与PLGA复合植入4周可见少量成骨,8周后可见成熟板层骨形成,PLGA组未见成骨,成骨细胞组8周仅可见少量成骨。结论:hMSC在诱导培养基的作用下可定向分化为成骨细胞并大量扩增。分化为成骨细胞后,BMP-2mRNA的表达显著升高。成骨细胞与PLGA复合植入裸鼠体内,能形成成熟的板层骨。hMSC在治疗骨缺损、骨不愈合等方面具有巨大的应用潜力。

间断应用甲状旁腺激素对人骨髓基质干细胞的影响

背景:持续应用和间断应用甲状旁腺激素以及使用量的大小对骨的效应有很大差异。目的:观察不同剂量的甲状旁腺激素间断给药对人骨髓基质干细胞增殖和分化的影响。方法:体外培养人骨髓基质干细胞,分为空白对照组和甲状旁腺激素5,20及50nmo/L组,每天作用1h,MTT法检测人骨髓基质干细胞的增殖;碱性磷酸酶活性测定检测人骨髓基质干细胞向成骨细胞的分化。结果与结论:甲状旁腺激素50nmol/L每天作用1h可显著促进人骨髓基质干细胞的增殖,同时使碱性磷酸酶升高,均显著高于其他3组。结果证实50nmo/L甲状旁腺激素间断应用可以促进人骨髓基质干细胞的增殖和向成骨细胞的分化。

醒髓汤抑制脊髓继发性损伤的实验研究

目的 研究中药复方醒髓汤对于脊髓损伤后兴奋性氨基酸诱发神经毒效应的抑制作用。方法 80只SD大鼠随机分成 3组 ,用AllenWD法致脊髓不完全性损伤。对照组 (A组 ,18只 )切除椎板 ,不损伤脊髓 ,不给药 ;模型组 (B组 ,2 6只 )造模前后 30min应用蒸馏水 2ml灌胃 ;治疗组分成造模前30min给药组 (C1组 ,18只 )及 30min后给药组 (C2 组 ,18只 ) ,按 12 5 g·kg-1·d-1剂量分 2次给药。于用药后 5 0min取伤段脊髓标本 ,纸上电泳法检测其兴奋性氨基酸含量 ;于造模后 2 4h取伤段脊髓标本 ,干湿重法测定水含量 ;原子吸收光谱法测定离子含量 ;于造模后 72h取脊髓标本进行光、电镜观察。结果 同A组比较 ,B组脊髓组织兴奋性氨基酸含量早期显著增高 (P <0 0 5 ) ,而后期无显著性差异 (P >0 0 5 )。早期B组之水钠、钙含量显著性增高 (P <0 0 1) ,钾、镁含量显著减少 (P <0 0 1) ;组织细胞变性坏死严重。同B组相比 ,C1组脊髓组织兴奋性氨基酸含量显著降低 (P <0 0 1) ,水钠、钾、钙含量显著减少 (P <0 0 1) ,钾、镁含量显著增高 (P <0 0 1) ;脊髓组织变性坏死轻。同B组比较 ,C2 组脊髓组织兴奋性氨基酸含量无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,水钠、钾、钙含量也无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,然而 ,其钾、镁含量显著?

地塞米松抑制脊髓继发性损伤的实验研究

为了研究地塞米松对继发性脊髓损伤的抑制作用 ,将 80只 SD大鼠随机分成 3组 ,用 Allen WD法致脊髓不完全性损伤。对照组 (A组 )只切除椎板 ,不损伤脊髓 ,不给药 ;模型组 (B组 )造模后应用生理盐水静脉注射 ;治疗组分成造模前 30 min给药组(C1 组 )及 30 min后给药组 (C2 组 )按 2 m g· kg- 1 的剂量静脉注射。于用药后 5 0 m in取伤段脊髓标本 ,纸上电泳法检测其兴奋性氨基酸含量 ;于造模后 2 4h取伤段脊髓标本 ,干湿重法测定水含量 ,原子吸收光谱法测定离子含量 ;于造模后 72 h取脊髓标本进行光镜及电镜观察。结果显示 ,同 A组比较 ,B组脊髓组织兴奋性氨基酸含量早期显著增高 (P<0 .0 5 ) ,水钠、钙含量也显著增高 (P<0 .0 1) ,钾、镁含量则显著减少 (P<0 .0 1) ,组织变性坏死程度严重。与 B组比较 ,C1 组脊髓组织兴奋性氨基酸含量显著降低 (P<0 .0 1) ,水钠、钙含量显著减少 (P<0 .0 1) ,钾镁含量显著增高 (P<0 .0 1) ,组织变性坏死程度较轻。同 B组比较 C2 组脊髓组织兴奋性氨基酸含量无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ,然而其水钠、钙含量却显著降低 (P<0 .0 1) ,钾、镁含量显著增高 (P<0 .0 1) ,组织变性坏死程度较轻 ,但重于 C1 组。认为早期应用地塞米松可以有效地抑制继发性脊髓损伤。

邓小平的当代科学领导观——对“领导就是服务”思想的思考

1985年5月,邓小平在全国教育工作会议上提出了“领导就是服务”这一科学论断,深刻揭示了马克思主义领导观的实质,是无产阶级政党关于领导学说的重要内容;它揭示了无产阶级国家政权的本质特征,是新的历史时期我党先进性和宗旨在理论上的深刻体现;它进一步规范了执政党的行为,是对党的各级组织及干部的基本要求。 一、“领导就是服务”的基本理论内涵 “领导就是服务”这一科学命题是邓小平在特定的历史背景下提出来的,但我们理解这个命题不能仅局限于特定的历史时期。

警惕蹲点中的形式主义

警惕蹲点中的形式主义殷晓雪各级领导机关在注重深入基层搞调查研究中，常用的方式即为蹲点。但在这项工作的开展中，笔者认为应警惕其中的形式主义。一是自选＂点＂。个别领导机关在选择蹲点对象时，存在着＂五不去现象＂：边远、艰苦地区的单位不去；生活条件差、贫困地...

有血液循环骨膜移植的研究现状

自体有血液循环的骨膜移植是近年来发展起来的一项新技术,此项技术对于临床难以治疗的骨折不愈合、骨坏死等已证实具有良好的疗效,可有效地修复骨缺损,并使坏死骨质“起死回生”。近年来,国内外关于骨膜移植方面的实验研究和临床应用报道日渐增多,现总结如下: 1.有血液循环骨膜生骨的机理: 1978年,Finley首先报道,用带血管的肋骨骨膜移植能很好地修复胫骨缺损,在修复部位有大量新生骨形成,从而证明有血液循环的骨膜移植后其新生骨可修复骨缺损。此后,国内许多学者对此项研究做了大量工作,以图从机理上阐述其修复过程。朱盛修等通过实验观察有血液循环的骨膜移植和无血液循环的骨膜移植在同一环境中的血液循环和成骨情况,结果证明:有血循的骨膜移植对受骨建立血液循环快。

基因沉默组织型转谷氨酰胺酶抑制SaOS-2细胞成骨分化

目的研究组织型转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase,TG2)是否参与人SaOS-2细胞系成骨分化过程。方法使用携带短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒转染SaOS-2细胞以敲减TG2表达,以SaOS-2细胞及转染了含阴性对照shRNA病毒的SaOS-2作为对照组,分别进行体外成骨诱导培养,并进行以下检测:诱导14 d后各组矿化情况(茜素红染色);诱导4、7 d后碱性磷酸酶活性及I型胶原、骨钙素、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的mRNA表达,并与诱导前的表达水平相比较。结果 SaOS-2细胞组及转染阴性对照shRNA组在体外成骨诱导过程中I型胶原、骨钙素、BMP-2的mRNA表达和ALP活性逐渐增加,14 d时形成明显矿化结节,而TG2敲减后的SaOS-2细胞在诱导14 d时矿化水平显著低于对照组,诱导7 d时ALP活性及I型胶原、骨钙素、BMP-2的mRNA表达水平显著低于对照组。结论组织型转谷氨酰胺酶参与SaOS-2细胞体外成骨分化及矿化。

硬膜外腔置管注入胶原酶治疗腰椎间盘突出症

资料与方法 自2006年3月起收治腰椎间盘突出症208例，男95例，女113例；年龄26～68岁，平均47岁；发病时间3个月～24年；其中1个间隙突出者103例，2个间隙突出者85例，3个间隙突出者20例。所有患者均符合以下诊断标准：①临床表现：腰痛伴下肢放射痛；②神经支配区的感觉减退；③直腿抬高试验：较正常减少50％；

补肾养精颗粒对卵巢储备功能减退不孕患者周期性预处理的疗效

目的观察补肾养精颗粒周期性预处理治疗卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)不孕症患者的临床疗效。方法将62例肾虚型DOR不孕患者,用随机数字法分成观察组和对照组各31例,分两个阶段进行治疗。第一阶段观察组和对照组分别给予补肾养精颗粒及雌二醇片/雌二醇地屈孕酮片复合包装(芬吗通);第二阶段均加服来曲唑。观察两组患者治疗前、后临床症状积分、卵巢储备功能、妊娠状态以及药物安全性的差异。结果两组患者治疗后临床症状及卵巢储备功能均较治疗前改善(P <0.01),且均未见药物不良反应。与对照组相比,观察组在改善临床症状积分、降低基础卵泡刺激素及基础黄体生成素水平、升高基础雌二醇、抗苗勒管激素及窦卵泡数计数、增加临床妊娠率方面明显优于对照组,且差异有统计学意义(P <0.05)。结论补肾养精颗粒周期性预处理可以有效改善DOR不孕患者的卵巢储备,提高妊娠率,值得临床规范化推广应用。

胶原酶治疗颈椎间盘突出症的临床研究

胶原酶治疗颈椎间盘突出症国内外尚未见报道。本文报告了硬膜外腔前间隙置管注入胶原酶治疗颈椎间盘突出症 2 48例 ,优良率达 93 .5 %。并讨论了此法的作用机理及适应症的选择与疗效的关系。

转导人端粒酶逆转录酶基因致人成骨细胞永生化的研究

目的 建立永生化的人成骨细胞系供骨科临床和基础研究使用。方法 将人骨髓基质干细胞定向诱导分化为成骨细胞 ,以逆转录病毒为载体 ,导入人端粒酶逆转录酶基因 (hTERT)全长cDNA ,经筛选得到阳性克隆 ,体外连续传代 ,检测hTERT基因的整合情况及其表达 ,并对不同代次细胞的成骨特性进行了检测。结果 成功地将hTERT基因转入人成骨细胞 ,得到的转化细胞端粒酶表达阳性 ,增殖旺盛 ,至今已传至 6 2代 ,对第 2 5、第 5 5代转化细胞分别进行碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、骨桥素的检测 ,证明此永生化细胞保持了良好的成骨特性。结论 转导外源性的hTERT基因可以导致人成骨细胞永生化且可保持其正常的成骨特性。

针药联合治疗未破裂卵泡黄素化综合征的Meta分析

未破裂卵泡黄素化综合征(LUFS)是指卵泡发育成熟后不破裂,卵细胞未排出而原位黄素化并形成黄体分泌孕激素,月经周期正常、基础体温呈双相,出现类似排卵的周期性变化,是导致不孕的原因之一,因此LUFS所导致的不孕属于卵巢性不孕。研究发现,LUFS的发生率为5%~10%,在不孕症妇女中发生率为25%~43%^([1])。近年来随着超声技术的不断发展,对LUFS的认识度、诊断率越来越高,目前临床上西医药物治疗多应用来曲唑、氯米芬等促排卵药物促使卵泡生长,卵泡成熟后肌注HCG促使卵泡排出,排卵后应用孕激素给予黄体支持,但临床中发现往往出现高排低孕的现象,并未达到理想的效果。除了保守的药物治疗,还有腹腔镜下手术治疗。与西医相比,中医从整体出发,辨证论治,应用针灸联合中药从多方位、多角度来治疗此病,临床疗效显著,不仅可以提高排卵率,也可以提高妊娠率。本研究旨在系统评价针灸联合中药治疗LUFS的有效性,以期为临床治疗提供可靠的循证医学证据。