MRKH综合征一家系三例

先证者(图1,III3),女,25岁,青春期后无月经来潮。患者10岁后逐渐开始出现乳房发育,无周期性腹痛及月经来潮。2013年14岁时因无月经来潮就诊于湖南省道县妇幼保健院,妇科检查显示外阴发育正常,色素正常,阴毛呈女性型分布,阴蒂正常,阴道前庭见一凹窝,压痕约2 cm。会阴正常,尿道口正常,无赘生物,未见阴道,仅见处女膜痕。肛查:盆腔空虚,双侧附件区未扪及异常,无压痛,直肠黏膜光滑,未触及明显异常,妇科B超显示始基子宫。为求进一步诊治,于2018年就诊于湖南省计划生育研究所,实验室检查:染色体核型分析为46,XX;促卵泡素(FSH)6.200 IU/L,黄体生成素14.340 IU/L,孕酮(P)1.49 nmol/L,雌二醇(E 2)264.6 pmol/L,睾酮(T)1.07 nmol/L。血常规、凝血功能、肝功能、肾功能、甲状腺功能、空腹血糖未见明显异常。肝胆脾胰超声未见明显异常。脊柱有轻微侧凸。妇科彩超显示:膀胱后方低回声疑始基子宫,双侧卵巢呈多囊样改变。结合患者病史、体征、实验室辅助检查结果,考虑为MRKH综合征。患者于2019年6月在深圳市罗湖医院集团行腹腔镜腹膜阴道成形术,术后患者恢复可,已结婚。2019年对WNT4基因的5个外显子进行Sanger测序和全外显子组测序均未见WNT4基因改变。家系调查:该家系3代共10人,患病者3例,均为女性,先证者(III3)、患者II5和患者III1均在青春期前后发病,见图1和图2。

基质金属蛋白酶与心肌重塑

细胞外基质参与和促进了心肌重塑的过程,基质金属蛋白酶是调节细胞外基质重要的酶,基质金属蛋白酶在心肌重塑过程表达变化可分为三个时相,其活性受到信号传导途径、炎症因子和活性氧/活性氮的调节。

应用引物原位标记技术检测21号染色体

应用原位引物标记技术 (PRINS)检测了 2 1号染色体着丝粒 ,在外周血和绒毛细胞的标记效率分别为91%和 93%,实验过程可以在 2 h之内完成 ,证明这一检测方法是一种快速、灵敏、特异性良好的染色体数目检测方法 ,有可能用于 2

羊水细胞培养及FISH技术用于产前诊断——附117例分析

目的:探讨羊水细胞培养及荧光原位杂交(FISH)技术在产前诊断中的实验方法及应用价值。方法:对117例孕17～27周有产前诊断指征者,在B超引导下抽取羊水,培养、制备羊水细胞分裂中期染色体,其中1例同时用未培养羊水做间期细胞FISH,另1例用培养后细胞生长不佳的羊水做FISH,两者均采用生物素标记的X、Y、21号染色体探针。结果:羊水细胞培养成功109例,占93.16%;培养失败8例,占6.84%。109例羊水细胞培养分裂中期染色体核型:正常核型46,XX(XY)有95例,占87.16%;异常核型14例,占12.84%。1例间期细胞FISH与羊水培养结果一致,另1例羊水细胞培养仅收到很少分裂中期染色体,改做FISH后可见到较好的荧光信号。结论:FISH技术与羊水细胞培养结合用于产前诊断,提高了诊断的准确性。

湖南地区1013例亲子鉴定中的STR突变位点研究

对亲子鉴定常用的ABI公司Indentifiler荧光标记复合扩增试剂盒中的15个短串联重复序列及D14S306、D16S3391、D5S2500、D12S391、D13S796、D1S518位点的突变现象进行研究.在1013例认定亲子关系案例中,对发现有一个基因位点发生突变的案例增加8个常染色体STR(short tandem repeat)基因座检测,使其父权相对机会(RCP)大于99.999%以上,并对突变位点进行测序.在1013例认定亲子关系案例中,发现11例有一个基因位点发生突变,8次突变事件为父源性突变,突变位点包括vWA、FGA、D14S306、D13S317、D21S11、CSFIPO、D16S3391;其余3例突变来源不明,包括FGA、D13S796、D3S1358.以vWA和FGA的突变率最高,为0.15%,平均突变率为(0.09±0.370×10-3)%.本鉴定所常用的21个基因座,突变率低,具有较高的推广价值.

湖南省汉族人群15个STR基因座多态性分析

应用美国AmpFISTR Indentifiler荧光标记复合扩增试剂盒，结合PE9700型PCR仪和美国ABI公司310型遗传分析仪，对湖南汉族人群D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S51、D5S818和FGA共15个STR基因座进行多态性调查分析．结果显示15个STR基因座的基因型分布符合Hardy．Weinberg平衡。其杂合度（H）介于0．593～0．900，多态信息含量（PIC）介于O．54～0．85，个体识别力（DP）介于0．780～0．963，非父排除率（PE）介于0．282～0．785，累计个体识别力为（1～1．6×10^-17）〉0．99999999。累计非父排除率为0．9999995．证明15个STR基因座在湖南省汉族人群中具有较高的多态性。可应用于该地区群体学研究、法医学个体识别和亲权鉴定等．

新的STK11互作蛋白LOH12CR1的筛选及鉴定

PJ综合征(Peutz-Jeghers syndrome,PJS)的疾病基因STK11编码由433个氨基酸残基组成的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶STK11,具有调控细胞周期,调节细胞极性以及细胞基础能量代谢等重要功能.STK11蛋白羧基端含有123个残基,对STK11生物学功能的实现起着调节作用,但机制尚未明确.本研究利用pGEX4T-2原核表达系统,构建pGEX4T-2-STK11羧基端重组载体,并诱导表达了GST-STK11羧基端融合蛋白,采用GST-pulldown结合质谱分析的方法,鉴定出STK11羧基端的可能互作蛋白LOH12CR1.通过免疫共沉淀技术证实了STK11激酶同LOH12CR1互作;免疫荧光共定位实验亦发现STK11与LOH12CR1共定位.STK11与LOH12CR1互作的发现为研究STK11的功能提供新的切入点.

心脏特异表达基因ASB10的克隆及表达

从人类心脏文库中成功克隆了一个新的含有锚蛋白重复序列及SOCS盒结构域蛋白(Ankyrin repeatand SOCS box protein,ASB)的家族成员ASB10。该基因定位于染色体7q36.1,开放阅读框包含1 329个核苷酸,由7个锚蛋白重复序列和1个SOCS盒组成,编码452个氨基酸,分子量大约是49.5 kD。物种间的进化型分析比较表明该基因是非常保守的,人的ASB10基因和小鼠的Asb10基因有84.8%的同源性。半定量RT-PCR实验结果证明Asb10基因在成年小鼠的心脏和肌肉组织中高表达,提示其可能与心脏和肌肉组织的发育有关。亚细胞定位显示ASB10蛋白在细胞质和细胞核均有表达,为进一步研究奠定了基础。

应用引物原位标记技术快速诊断先天愚型

目的 :为发展快速诊断先天愚型的方法 ,方法 :利用 2 1号染色体α -卫星序列 ,设计特异性引物直接在分裂间期和中期细胞上作引物原位标记。结果 :先天愚型三体型间期细胞核中和中期染色体上观察到 3个标记信号。正常对照组为2个标记信号 ,平均标记效率分别分 90 .8%、91.3%。先天愚型嵌合型显示 2个和 3个标记信号 ,并且各占一定的比例。结论 :引物原位标记技术可直接在淋巴细胞间期核中进行 ,4～ 5h内能对先天愚型患者作出快速、准确的诊断。

X-STR分型用于同胞兄弟参与的亲子鉴定1例

某地计生部门委托本鉴定所对两名男性和一名女孩是否存在亲生血缘关系进行鉴定，两名男性自诉是同胞兄弟，后因鉴定需要，补充女孩亲生母亲血样。

人VEGF165基因转染成人成肌细胞的实验研究

目的:将人血管内皮生长因子165(hVEGF165)导入原代离体成肌细胞,观察该细胞hVEGF分泌情况,探讨成人自体转基因成肌细胞移植的可行性。方法:采用两步消化法对成人骨骼肌组织消化获取相对较纯的成肌细胞,通过差速贴壁法进行进一步的纯化。以脂质体转染法将pcDNA3.1-hVEGF165导入成肌细胞,通过RT-PCR、ELISA和Western-blot进行hVEGF165定量检测,MTT测定和Mile's实验检测VEGF165的生物学活性。结果:转基因细胞经RT-PCR扩增出一条VEGF的特异性泳带,ELISA显示转基因细胞培养上清VEGF浓度分别达到18.92±1.77 ng/mL、19.04±2.15 ng/mL,Western blot检测转基因成肌细胞上清均检测到VEGF蛋白特异性的杂交带,MTT显示转基因细胞上清明显促内皮细胞增殖,Mile's实验显示转基因细胞上清明显增加毛细血管通透性。结论:质粒pcDNA3.1-hVEGF165能成功转入成人成肌细胞,转基因细胞能分泌有生物活性的VEGF165蛋白。

体液蛋白质组学的研究和应用

蛋白质组学是目前生命科学的研究热点之一.体液中的蛋白质是来源于与其密切接触组织或者细胞的分泌或渗漏,体液蛋白质组的变化能反映这些组织的生理或者病理改变,因此以寻找疾病相关生物标记为主要目标的比较蛋白质组学是蛋白质组学研究的核心内容之一.对近年来各种体液蛋白质组学的研究状况和应用及存在挑战作一综述.

TORCH-ELISA捕获法诊断试剂的研制

目的 用ELISA捕获法研究TORCH病原体IgM抗体检测方法 ,并制成试剂盒。方法 为保证试剂盒的质量 ,关键试剂 (特异性抗原和酶标板 )进口而标记二抗及其它辅助试剂自己配制 ,用本试剂盒与原装进口试剂盒从灵敏度、特异性方面进行对照检测 ,同时检测本试剂盒的批内和批间差异及试剂盒的稳定性。结果 本试剂盒的灵敏度为 1∶1 6 0到 1∶6 4 0 ;特异性分别表现为 98%以上 ;试剂盒的批内差异最大为 6 .32 % ,平均为 2 .93% ;试剂盒的批间差异最大为9.1 1 % ,平均为 6 .5 2 % ;试剂盒的稳定性测试表明该试剂盒的有效期可为 6个月。结论 本试剂盒可用于有关群体TORCH病原体的筛查和检测。

应用毛细管电泳筛选DNA点突变

毛细管电泳在最近几年得到了迅速发展。它提供了快速、高分辨、自动操作、数据自动获取的在线检测，并且应用于ＤＮＡ的突变分析。本文介绍了利用毛细管电泳来筛选ＤＮＡ点突变，并对未来的发展进行了展望。

非小细胞肺癌患者区域淋巴结LUNX基因表达及其临床意义

目的:探讨人类肺组织特异性X蛋白(lung-specific X protein,LUNX)的基因诊断在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)微转移中的临床意义。方法:随机收集43例临床非小细胞肺癌患者作为实验组,同时随机收集15例良性肺部病变患者作为对照组。通过反转录-聚合酶链式反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测人类LUNX的靶基因的mRNA在实验组和对照组患者淋巴结中的表达,并与患者相对应的临床病理资料进行相关性分析。结果:LUNX mRNA在两组患者的肺组织及肿块中均为阳性表达;实验组43例患者的87枚淋巴结中有33枚(37.93%)有LUNX mRNA表达,对照组15例肺部良性病变患者的26枚淋巴结中有2枚(7.69%)表达LUNX mRNA,两组比较差异有统计学意义(P(0.05)。LUNX mRNA淋巴结表达阳性与肺癌患者病理类型、细胞分化程度、临床分期有密切关系(r=0.660,0.500,0.460;P=0.011,0.017,0.021);而与患者性别、年龄、吸烟史,以及血清肺癌4项肿瘤标志物(CEA,CA125,NSE和CYFRA211)无明显关系(r=0.230,0.235,0.180,0.354;P=0.739,0.714,0.773,0.125)。结论:与传统的病理切片检查判断NSCLC淋巴结微转移相比,RT-PCR检测肺癌患者淋巴结LUNX mRNA的表达有较高的敏感性。LUNX mRNA的表达是检测肺癌微转移的一个有价值的指标,可为制定治疗方案和评估预后提供重要参考依据。

指甲游离缘核DNA提取及检验1例

指甲的游离缘是指指甲前缘延伸到离开甲床的部分。指甲的游离缘采集无创,操作简单,是做秘密DNA亲子鉴定的主要检材之一。但由于其细胞高度角化,胞核退化严重,核DNA含量少,通常仅用于线粒体DNA检验。本例在处理1例亲子鉴定案例时,以剪下的指甲游离缘作为检验对象,先后用Chelex-100法和改良的blood DNA kit法提取核DNA后进行STR分型,最终获得了满意的STR分型结果,成功完成了鉴定。

一种罕见X染色体改变与X连锁综合征型耳聋的关系

目的 :对一X连锁综合征型耳聋家系进行进一步的遗传学研究 ,以探讨X染色体结构异常与这种综合征型耳聋的内在关系。方法 :用G常规显带、高分辨显带和荧光原位杂交技术对家系成员进行染色体结构和数目分析 ,同时利用X染色体上的遗传标记分析该家系成员的DNA等位片段数。结果 :两例先证者表型正常的母亲及外祖母均存在X(p2 2 pter)重复 ;FISH示先证者及其母亲的X染色体全被涂染 ;DXS710 8等位片段分析示先证者III 3有两个拷贝。结论 :该X连锁综合征型耳聋家系的异常X染色体源于Xp部分重复 。

人类PKNOX_1基因一种新剪接型全长cDNA的克隆与表达分析

为了寻找新的Down’s综合征相关基因 ,利用生物信息学分析与实验技术相结合的方法 ,从定位于Down’s综合征关键区内 (2 1q2 2 3)的EST(GenBank登录号H77399)出发 ,从人类睾丸组织cDNA文库内克隆到含同源盒结构域转录因子PKNOX1 的一种新剪接型全长cDNA ,命名为PKNOX1 B ,GenBank登陆号AY14 2 115。PKNOX1 B基因跨越 5 8 4kb ,全长cDNA约 2 8kb ,有 11个外显子和 10个内含子 ,编码 4 0 5个氨基酸残基的酸性蛋白质 ,分子量为4 4 6 2 8kDa,等电点 6 2 8。PKNOX1 B与PKNOX1 的前 9个外显子及 9个内含子完全相同 ,由于PKNOX1 B在第 10与11外显子之间发生了差异剪接 ,以致其在 3′端cDNA序列被截短约 2kb ,所编码的蛋白质在C端较PKNOX1 短 30个氨基酸残基。但PKNOX1 B保留了与PKNOX1 完全相同的同源盒结构域 ,因而它可能与其他含同源盒结构域基因家族成员一样参与了发育的遗传调控。RT PCR结果显示PKNOX1 B除骨髓组织外在人体组织广泛表达。在睾丸组织中PKNOX1 可见 5kb ,2 9kb ,2kb 3种转录本 ,而在其他组织中仅发现 2个较大的转录本 ,2kb的转录本在睾丸组织呈现特异性的表达 。

Down's综合征关键区一个假基因的克隆与表达分析

利用生物信息分析方法与RACE在21号染色体长臂Down's综合征关键区克隆了一个新基因,命名为NY1,结构分析显示这一基因序列无内含子,无完整的阅读框,在3′端有PolyA尾序列.说明它可能为返座假基因.RT PCR与Northern杂交分析,这一基因在多种组织中有表达,但呈现出表达差异及组织特异性.