目的探讨短时间高氧对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)线粒体Ca2+/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)/沉默信息调节因子3(SIRT3)/超氧化物歧化酶2(SOD2)通路及活性氧的影响。方法将RLE-6TN细胞株细胞分为对照组、高氧组及线粒体钙通道拮抗剂组(拮抗剂...目的探讨短时间高氧对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)线粒体Ca2+/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)/沉默信息调节因子3(SIRT3)/超氧化物歧化酶2(SOD2)通路及活性氧的影响。方法将RLE-6TN细胞株细胞分为对照组、高氧组及线粒体钙通道拮抗剂组(拮抗剂组)。对照组细胞置于常规细胞培养箱中,高氧组细胞置于氧浓度为90%的培养箱中,拮抗剂组细胞加入钌红(2μmol/L)后置于氧浓度为90%的培养箱中,各组均持续培养4 h。随后,对各组细胞线粒体内Ca2+、活性氧、NAD+、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)含量进行检测,并计算NAD+/NADH比值;同时,采用实时荧光定量PCR检测SIRT3和SOD2信使RNA(m RNA)水平。结果各组间细胞线粒体内Ca2+、活性氧、NAD+、NADH、NAD+/NADH比值及SIRT3 m RNA、SOD2 m RNA表达水平的比较,差异均有统计学意义(F=183.500、135.900、32.140、51.520、128.300、59.970、45.020,P均<0.001)。且与对照组及拮抗剂组比较,高氧组细胞线粒体内Ca2+[(19.5±0.8)、(17.2±0.7)、(24.3±0.3)nmol/L]、活性氧[(491±9)、(480±5)、(530±6)相对荧光单位]及NADH[(0.85±0.03)、(0.87±0.04)、(1.06±0.06)nmol/104cells]含量均明显升高,而NAD+含量[(3.30±0.12)、(3.24±0.14)、(2.58±0.29)nmol/104cells]、NAD+/NADH比值[(3.89±0.15)、(3.71±0.15)、(2.44±0.27)]、SIRT3 mRNA[(1.01±0.11)、(0.96±0.08)、(0.45±0.09)]及SOD2 m RNA[(1.01±0.14)、(1.05±0.11)、(0.48±0.10)]表达水平均显著降低(P均<0.05)。结论短时间高氧可通过AECⅡ线粒体内Ca2+/NAD+/SIRT3/SOD2通路导致活性氧蓄积。展开更多
文摘目的探讨短时间高氧对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)线粒体Ca2+/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)/沉默信息调节因子3(SIRT3)/超氧化物歧化酶2(SOD2)通路及活性氧的影响。方法将RLE-6TN细胞株细胞分为对照组、高氧组及线粒体钙通道拮抗剂组(拮抗剂组)。对照组细胞置于常规细胞培养箱中,高氧组细胞置于氧浓度为90%的培养箱中,拮抗剂组细胞加入钌红(2μmol/L)后置于氧浓度为90%的培养箱中,各组均持续培养4 h。随后,对各组细胞线粒体内Ca2+、活性氧、NAD+、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)含量进行检测,并计算NAD+/NADH比值;同时,采用实时荧光定量PCR检测SIRT3和SOD2信使RNA(m RNA)水平。结果各组间细胞线粒体内Ca2+、活性氧、NAD+、NADH、NAD+/NADH比值及SIRT3 m RNA、SOD2 m RNA表达水平的比较,差异均有统计学意义(F=183.500、135.900、32.140、51.520、128.300、59.970、45.020,P均<0.001)。且与对照组及拮抗剂组比较,高氧组细胞线粒体内Ca2+[(19.5±0.8)、(17.2±0.7)、(24.3±0.3)nmol/L]、活性氧[(491±9)、(480±5)、(530±6)相对荧光单位]及NADH[(0.85±0.03)、(0.87±0.04)、(1.06±0.06)nmol/104cells]含量均明显升高,而NAD+含量[(3.30±0.12)、(3.24±0.14)、(2.58±0.29)nmol/104cells]、NAD+/NADH比值[(3.89±0.15)、(3.71±0.15)、(2.44±0.27)]、SIRT3 mRNA[(1.01±0.11)、(0.96±0.08)、(0.45±0.09)]及SOD2 m RNA[(1.01±0.14)、(1.05±0.11)、(0.48±0.10)]表达水平均显著降低(P均<0.05)。结论短时间高氧可通过AECⅡ线粒体内Ca2+/NAD+/SIRT3/SOD2通路导致活性氧蓄积。