抗囊虫单抗的制备及其应用研究

目的 制备分泌特异性抗猪囊虫单抗的杂交瘤细胞株 ,建立以特异性单抗检测囊虫病患者循环抗原 (CAg)的特异敏感的 EL ISA方法。 方法 制备水溶性抗原 (Ag- w)和尿素溶性抗原 (Ag- u) ,将实验用 BAL B/ c小鼠分为 Ag- u和 Ag- w组 ,分别以 Ag- u和 Ag- w免疫 ,取两组免疫鼠脾细胞与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,EL ISA法进行筛选 ,所获特异性阳性克隆加以扩大培养 ,并分别与包虫、血吸虫、华支睾吸虫、肺吸虫、姜片虫和丝虫抗原进行交叉反应性测定。 结果获得稳定分泌特异性抗囊虫单抗的杂交瘤细胞 5株 ,其中 1株 N1B10来自于 Ag- w组 ,另 4株 U2 A6、U2 B3、UB5 H6和UE10 H5来自于 Ag- u组。对 N1B10、U2 A6和 U2 B3初步鉴定结果表明 ,其抗体类型分别为 Ig G2 b、κ,Ig G1、κ,Ig G2 b、κ;腹水的效价分别为 1.0 2 4× 10 6、1.6× 10 4和 3.2× 10 4 ;免疫组化显示 N1B10定位于囊虫囊壁的基底膜 ,U2 A6和 U2 B3定位于囊虫的头节。杂交瘤细胞经连续培养 ,液氮反复冻存复苏后仍能稳定分泌单抗。取 3株单抗和兔抗囊虫血清建立了检测囊虫病患者 CAg的 EL ISA方法 ,测定 4 8份临床确诊囊虫病病人血清 ,阳性率达 95 .8%。 结论 成功制备了抗囊虫单克隆抗体 ,所建立的 EL ISA方法敏感性高 ,特异性强 ,可用于?

应用尿素溶性抗原制备抗猪囊虫单抗的研究

目的 为提高抗猪囊虫单抗的特异性。方法 使用猪囊虫尿素溶性抗原 ( Ag- u)并用水溶性抗原 ( Ag- w)作对照分别免疫 BABL / c小鼠 ,取其脾细胞分别与 SP2 / 0骨髓瘤细胞融合 ,EL ISA法进行筛选。同时筛选出的阳性克隆扩大培养 ,取上清单抗分别与包虫、血吸虫、肝吸虫、肺吸虫、姜片虫和丝虫抗原进行交叉反应性测定。结果 Ag- u和 Ag- w的阳性克隆率分别为 13.5 % ( 13/ 96 )和 12 .5 % ( 12 / 96 ) ,特异性阳性克隆率分别为 30 .8% ( 4/ 13)和 8.3% ( 1/ 12 )。 SDS- PAGE分析 Ag- u和Ag- w的条带数分别为 9和 17,分子质量 >97.4ku的条带比率分别为 6 6 .7% ( 6 / 9)和 2 9.4% ( 5 / 17)。免疫组化显示来自 Ag-u的 2株单抗定位于囊虫的头节 ,而来自 Ag- w的 1株单抗定位于囊虫的囊壁。结论 Ag- u用于制备单抗的阳性克隆得率与Ag- w没有明显的差异 ,而特异性阳性克隆的得率是 Ag- w的 4倍 ,亦即 Ag- u不仅有良好的免疫原性 。

TRUST试验不宜作为入出境人员梅毒诊断的血清筛查试验

目的控制出入境人员梅毒血清筛查试验的假阴性,提高梅毒感染的诊断水平。方法通过对部分TRUST试验筛查阴性血清样品进行TPPA验证试验,最大限度发现梅毒患者。结果在400份TRUST试验阴性血清样本中,进行TPPA试验,检出4份阳性样品。结论TRUST试验不宜作为入出境人员梅毒诊断的血清学筛查试验,应探讨合适方法加以改进。

江苏省HIV-1流行株env和pol基因亚型及其系统分析

目的:了解江苏省HIV-1流行株env和pol基因亚型及其系统。方法:收集42份血清抗-HIV阳性者的血浆标本并提取RNA,逆转录为模版DNA后采用巢式PCR法扩增env及pol基因,对扩增产物进行核苷酸序列测定,比对确定基因亚型,分析不同途径感染者的基因亚型,构建系统进化树。结果:42份标本中,扩增出env及pol基因片段27份(64%);共发现5种HIV-1亚型,其中CRF01-AE亚型19份、C亚型2份、B亚型3份、CRF08-BC 2份、G亚型1份。经静脉药瘾感染者基因型多为CRF01-AE亚型;经性接触感染者HIV-1基因亚型包括检出的全部亚型,经性接触及吸毒感染者基因亚型均为CRF01-AE亚型。两基因构建系统进化树高度一致,主要有CRF-01AE、B-07、G、C和CRF-08BC 5种HIV亚型在流行,而以CRF-01AE为主要流行株。结论:江苏省HIV-1基因亚型至少有5种,其中CRF01-AE为主要亚型。

次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型杂交瘤细胞的快速筛选方法

目的 建立一种快速而简便的次黄嘌呤 -氨基喋呤 -胸腺嘧啶 (HAT)敏感型杂交瘤细胞株的筛选方法 ,以缩短二次杂交瘤细胞制备时间。方法 在培养瓶中培养杂交瘤细胞 ,每 2～ 3天倍比提高培养液中 8-氮鸟嘌呤 (8- N)浓度 ,从 1.2 5μg/ ml直至 2 0 μg/ ml,并用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)比较筛选前后抗体吸光度 (A)值。结果 成功地诱导筛选后 ,获得HAT敏感的次黄嘌呤 -鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT)缺陷型杂交瘤细胞 2株 ,均保留分泌单抗功能 ,其单抗 A值与 8- N筛选培养前无明显差异。结论 改进后的筛选方法较常规方法所需时间缩短 1.0～ 2 .

预防性消毒工作探讨

每逢疫情流行期间，街道、社区、公共场所等处都可见背喷雾器进行预防性消毒的人员，流行期一过就难见踪影了。其实，坚持日常生活环境、公共场所的预防性消毒，可及时杀灭潜在的各类病原体，减少疾病的传播。

浅议保健中心监测体检质量评价指标

出入境人员监测体检是一项技术性、政策性都很强的工作，体检质量是国际旅行卫生保健中心（以下简称保健中心）永恒的主题，卫生检疫处（科）等监测体检业务主管部门必须对体检质量及时或分阶段评价，保证一些常见的技术性指标在受控范围，对某些指标超出受控范围的及时预警、及时反馈，督促及时整改，方可促进保健中心体检工作质量持续改进与提高。下面笔者结合自身工作实际，拟定了保健中心监测体检质量评价可能涉及的一些指标，供参考。

盐城国际旅行卫生保健工作可持续性发展的探讨

国际旅行卫生保健工作是疾病控制体系与检验检疫体系的交汇点，是运用公共卫生学理论向人出境人员提供检体诊断、预防保健和健康教育为一体的综合性卫生服务，该服务最大特点是涉外性，以防止传染病通过入出境人员传播为己任，兼顾非传染病的卫生保健，对旅行者是否适合国际旅行进行科学合理的健康评估。

检验检疫部门应对国外对劳务人员健康体检新要求探讨

近年来，国外对入境居留和劳务人员的“健康门槛”日益增高，一方面对这部分群体的健康体检工作频频提出颓要求；另一方面因健康问题、体检项目漏项以及健康资料表述形式差异等被国外有关部门拒发劳务签证和工作准证甚至退回劳务人员的案例时有发生。这些情况应引起检验检疫部门的思考，涉外健康体检工作无小事，一旦未能严格执行国外对入境居留和劳务人员健康体检要求或某些环节疏漏，

国际旅行卫生保健中心医疗废物规范化处置探讨

国际旅行卫生保健中心（以下简称保健中心）承担着为人出境人员监测体检和血清学检查的重要职责。在进行卫生检疫和保健服务的过程中，不可避免地要产生大量的医疗废物，其中可能含有的病原体必须进行有效的、规范化的处置，才能保证感染性废物不对周围环境和人群产生二次感染或污染，从而达到预防疾病，保护环境，维护人民群众健康权益。

出入境体检常用血清学ELISA试剂内部对照的有效性与结果判定

文章分析了传染病监测体检项目常用血清学ELISA试剂内部对照的有效性与实验结果判定之间的关系,尤其是阳性对照、阴性对照及空白对照与实验结果之间的关系,提高了血清学检测的质量。

γ-干扰素释放试验用于出入境人群结核病诊断的研究

目的探讨γ-干扰素释放试验(IGRA)对结核病患者的临床诊断意义。方法 64例结核病患者(结核组)选自江苏国际旅行卫生保健中心出入境人员,46例健康者(健康对照组)选自江苏国际旅行卫生保健中心体检人员,分别用IGRA、结核菌素皮试试验(TST)、结核菌脂阿拉伯露聚糖(LAM)、结核菌重组38×10~3蛋白(38×10~3)和结核菌重组16×10~3蛋白(16×10~3)的方法检测,比较分析不同方法的检测结果,并进行统计学分析。结果 IGRA检测方法的敏感性(88.9%)和特异性(95.8%)均较好,TST法的敏感性(92.7%)较好,但特异性(76.7%)较差。结论 IGRA检出结核病敏感性和特异性均较好,具有重要的临床应用价值。

出国劳务人员性病艾滋病健康干预不同阶段相关态度变化研究

目的探讨适合出国劳务人员性病艾滋病健康干预模式。方法采取随机整群抽样方法,自行设计问卷,对829名劳务人员采取专业健康教育和同伴教育相结合的模式进行干预,并进行效果评价。结果全程干预结束后,认为讲授避孕套知识不会引起教唆的,比例从44.6%增加到54.7%;对自慰行为持宽容态度,认为可缓解性压力的比例从45.2%提升到48.6%;对感染者态度除认为"被查出的感染者应该公开身份还是保密"外,同干预前相比均有统计学差异(P<0.05)。结论对劳务人员宜采取"出国前专业干预+出国后同伴教育"相结合的模式,有助于劳务人员防治性病艾滋病目标的实现。

血小板淋巴细胞比值与妊娠期糖尿病的关系

目的:探讨血小板淋巴细胞比值(PLR)与妊娠期糖尿病(GDM)的关系。方法:选取GDM患者97例,选取同期健康孕妇99例为对照组。检测血小板计数(PLT)、淋巴细胞数量(LYM)及相关参数,计算PLT与LYM比值PLR,同时收集所有受试者的年龄、孕龄、体重等一般资料。结果:GDM患者年龄、体重及PLR均显著高于对照组;孕龄及LYM显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中性粒细胞计数(NEU)、PLT、平均血小板体积(MPV)及血小板分布宽度(PDW)差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PLR值和LYM可作为预测和诊断GDM新的参考指标。

生物梅里埃第4代HIV初筛试剂假阳性率增高问题的探讨

〔目的〕寻求更为敏感和特异的用于出入境人群的HIV初筛检测方法或检测流程,及时准确出具HIV抗体检测报告。〔方法〕从本中心HIV确认实验室的送检标本中,选取经免疫印迹法(WB)确认为HIV抗体阳性标本30份,和经WB法确认为阴性及不确定标本30份,分别用生物梅里埃和丽珠试剂同时做ELISA法筛查,比较其阳性率。分析比较近3年来由于生物梅里埃试剂换代,确认实验室送检样品阳性检出率情况。〔结果〕生物梅里埃试剂在用于HIV初筛检测中假阳性率高于丽珠试剂。随着梅里埃试剂由第3代更换为第4代,其检测假阳性率提高显著。〔结论〕用于出入境人群的HIV初筛检测试剂应选择敏感性高、特异性高的试剂;在保证结果准确的情况下,可以应用《全国艾滋病检测技术规范(2004年版)》第2章HIV抗体检测中的替代策略3,以便快速准确地出具HIV检测报告。

疟原虫图像自动识别技术的研究

〔目的〕研究并开发疟原虫图像自动识别软件系统,以满足国境口岸疟疾疫情的检疫需求。〔方法〕首先,建立疟原虫图像标准模板库;然后,图像经消噪处理,利用分水岭算法进行图像分割,统计出细胞个数;最后,系统对染色图像特征学习,利用已获得的染色图像特征点进行染色图像提取,从而报告出阳性感染疟原虫细胞。〔结果〕对疟疾薄血膜片总体识别率达90%。〔结论〕疟原虫图像自动识别软件系统的建立,有助于提高国境口岸疟疾诊断的效率与准确率,为疟疾数字化诊断奠定了基础。

从一例误诊病例谈疟疾的诊断及治疗

疟疾诊断是疟疾控制的基础,只有及时、准确地对疟疾病例作出诊断,才能对疟疾病例进行及时、正确、规范的治疗。本文从今年的一例误诊病例来浅谈疟疾的诊断及治疗。

从入境投资经商台胞中检出首例HIV感染者的报告

[目的]加强对在内地从业的境外人员的艾滋病监测工作。[方法]对入境的境外从业人员进行艾滋病血清学检验。[结果]于2001年2月21日从入境台胞中检出1名HIV感染者,经流行病学调查,该患者的传播途径有2条:(1)通过血液传播,且病程已久;(2)通过性接触传播,病程较短。该患者曾有过输血史、献血史,可能已在不知情的情况下成为一个传染源。[结论]对经常出入国境的高危人群,应探索新的出入境检验检疫监管模式,以避免因漏检而造成危险传染源的输入。

单管可视化环介导等温扩增技术快速检测恶性疟原虫

目的:建立一种基于环介导等温核酸扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)的恶性疟原虫高灵敏可视化闭管检测方法。方法:针对恶性疟原虫核糖体DNA的序列保守区设计LAMP引物,通过优化LAMP体系中的Mg2+、甜菜碱浓度和反应温度等因素,建立环介导等温扩增法;并结合蜡封反应管对产物进行检测,检测结果可直接通过肉眼观察SYBR Green I荧光显色进行判定。结果:本方法可检测到70个拷贝/管的恶性疟原虫核酸片段,并具有高特异性,可区分检测常见的血液病毒。该法具有如下优点:1、整个反应恒温进行,无需热循环仪;2、闭管检测,极大降低了扩增产物交叉污染的风险;3、检测速度快,整个检测过程只需30 min。结论:该法的建立为恶性疟原虫的现场快速筛检提供了一种简便、高灵敏、高特异的工具。