尿石素A(urolithin A)通过激活Nrf2通路和自噬抑制高脂诱导的肝细胞炎症反应及氧化应激

目的研究尿石素A(UA)对高脂诱导的肝细胞炎症以及脂肪堆积的作用及机制。方法采用核因子E2相关因子2(Nrf2)短发夹RNA(shRNA)慢病毒感染,建立稳定敲减Nrf2的L02肝细胞系。空载体对照细胞及敲低Nrf2的L02细胞给予游离脂肪酸(FFA)建立高脂细胞模型、BODIPY493/503染色检测细胞内脂肪沉积情况,在此基础上给与UA处理。分为对照组、0.6 mmol/L FFA处理组、0.6 mmol/L FFA联合10μmol/L UA处理组、0.6 mmol/L FFA联合20μmol/L UA处理组,均处理48 h。甘油三酯检测试剂盒检测细胞内甘油三酯(TG)水平,ELISA检测细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及白细胞介素6(IL-6)水平;采用二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色检测细胞内活性氧(ROS)水平;采用试剂盒检测细胞内丙二醛(MDA)水平、总超氧化物歧化酶(SOD)以及过氧化氢酶(CAT)活性;实时定量PCR检测SOD2和CAT的mRNA水平,Western blot法检测SOD2、CAT、Nrf2以及P62、微管相关蛋白轻链3(LC3)蛋白水平。采用红色荧光蛋白-绿色荧光蛋白-LC3(RFP-GFP-LC3)腺病毒感染细胞,检测自噬通量水平。结果FFA增加L02细胞内TNF-α、IL-6水平以及TG含量和细胞内脂肪沉积,细胞内MDA和ROS水平增加,SOD2、CAT、Nrf2的mRNA和蛋白表达降低;FFA处理降低细胞LC3-Ⅱ水平,增加P62水平,阻断自噬通量。UA处理可逆转FFA以上作用,敲低Nrf2能够逆转UA的上述作用。结论UA通过激活Nrf2介导的细胞抗氧化以及自噬通路,缓解高脂诱导的肝细胞炎症反应和氧化应激。

异鼠李素通过减轻氧化应激改善游离脂肪酸诱导肝细胞脂质沉积

目的探讨异鼠李素(Iso)对游离脂肪酸(FFA)诱导的肝细胞脂质沉积程度以及氧化应激的影响。方法将L-02细胞分为3组:对照组,FFA组和FFA+Iso组,其中FFA浓度为0.6 mmol·L^(-1),异鼠李素浓度为10μmol·L^(-1)。干预7 d后,采用CCK-8试剂盒、油红O染色和三酰甘油(TG)试剂盒检测细胞活力、TG沉积程度;用DCFH-DA荧光探针、丙二醛(MDA)试剂盒检测细胞内总活性氧(ROS)、MDA水平;用抗氧化酶活性检测试剂盒检测总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性;Western blot检测SOD1、SOD2、CAT、谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1)、核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCL)等蛋白的表达水平。结果FFA可诱导L-02细胞中脂质沉积显著增加,并显著提高细胞中总ROS与MDA水平;抑制SOD酶活性,降低SOD1、SOD2、GPx1的表达水平;抑制Nrf2通路,降低其下游的HO-1、GCLC、GCLM的表达水平。异鼠李素则能够缓解FFA引起的脂质沉积,使ROS与MDA水平降低,增强SOD活性,提高GPx1等抗氧化酶蛋白的表达水平,促进Nrf2活化进入细胞核并提高其下游的蛋白表达水平。结论异鼠李素可通过减轻氧化应激,缓解FFA对L-02细胞诱导的脂质沉积。Nrf2通路在此过程中发挥了重要作用。

异鼠李素通过减轻氧化应激延缓D-半乳糖诱导的人脐静脉内皮细胞衰老

目的:探讨沙棘中的重要成分异鼠李素(ISO)对细胞衰老的影响及机制。方法:采用D-半乳糖(D-Gal)诱导细胞衰老模型,取20~23代的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为4组:对照组、D-Gal组、D-Gal+ISO组(5μmol/L)、D-Gal+ISO组(10μmol/L)。其中D-Gal浓度为10 g/L,干预时间为72 h。采用CCK-8试剂盒检测各组细胞活力;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色试剂盒检测细胞衰老状态;各相关试剂盒检测细胞总活性氧(ROS)水平、丙二醛(MDA)含量、总超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性。Western blot法检测衰老标志蛋白p21、p27和核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)及其下游蛋白表达水平。结果:ISO浓度≤10μmol/L时对HUVEC无明显毒性作用;与对照组比较,D-Gal能够诱导细胞衰老指标SA-β-Gal活性增加(P<0.05);提高p21、p27表达水平,提高细胞总ROS水平和MDA含量,降低总SOD和CAT活性,降低Nrf2及下游蛋白表达水平(P<0.05)。与D-Gal组比较,ISO能够降低细胞SA-β-Gal活性,抑制p21、p27表达,降低细胞总ROS水平和MDA含量,提高总SOD和CAT活性,增强Nrf2及下游蛋白表达(P<0.05)。结论:ISO可以通过减轻氧化应激,延缓D-Gal诱导的HUVEC细胞衰老,在此过程中激活Nrf2通路可能是其发挥抗衰老作用的重要机制。

尿石素A改善线粒体氧化应激抗血管内皮细胞衰老

目的研究尿石素A(UA)对血管内皮细胞衰老的影响及其可能机制。方法10 g·L^(-1)D-半乳糖处理3 d诱导HUVEC细胞衰老,同时给予UA处理,设立对照组、衰老模型组、低剂量UA处理组(10μmol·L^(-1))、高剂量UA处理组(20μmol·L^(-1))。试剂盒检测细胞β-gal染色及活性、丙二醛、超氧化物歧化酶以及过氧化氢酶活性,流式检测细胞活性氧、线粒体ROS(mtROS),Seahorse检测线粒体氧化呼吸功能,JC-1染色和流式检测线粒体膜电位,qPCR检测衰老相关基因表达,Western Blot检测线粒体抗氧化酶表达。结果UA能够改善D-半乳糖诱导的血管内皮细胞衰老,降低细胞氧化应激水平,抑制mtROS水平,提高线粒体抗氧化酶表达,改善线粒体呼吸功能。结论UA可能通过改善线粒体功能,提高线粒体抗氧化防御系统活性,缓解线粒体氧化应激,从而抗D-半乳糖诱导氧化应激和血管内皮细胞的衰老。

高迁移率族蛋白B1在小鼠肝再生中对细胞增殖的作用及机制

目的:研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在小鼠部分肝切除术(PH)后的再生过程中对细胞增殖的作用及机制。方法:将21只雄性BALB/c小鼠,随机分为假手术组和6个PH组,每组3只。假手术组小鼠只打开腹腔暴露肝脏并不切除肝脏;PH组小鼠进行70%肝切除术,并分别于术后第6小时以及第1、2、3、5、7天处死。另外采用丙酮酸乙酯(EP)作为HMGB1的特异性抑制剂进行干预实验,9只雄性BALB/c小鼠,随机分为假手术组、PH组和EP干预组,每组3只,EP干预组小鼠在70%肝切除术后按40mg/(kg·d)给予EP腹腔注射,术后第2天处死。取各组小鼠肝组织提取总蛋白及核浆蛋白,采用Western blot法分别检测提取的不同蛋白样品中HMGB1、TLR4、RAGE、NF-κB p65、Cyclin D1、PCNA的蛋白表达水平。结果:小鼠于进行70%PH后的1周内,肝组织内胞核中HMGB1的蛋白表达水平,在术后第2天上升至顶峰(P<0.05),之后逐渐回落,细胞质中该蛋白表达水平的变化与其一致。干预实验中,相比较假手术组,术后第2天PH组中TLR4、RAGE、NF-κB p65、Cyclin D1、PCNA的蛋白表达水平也明显提高(P<0.05)。EP干预后,虽然肝组织内胞核蛋白中的HMGB1以及总蛋白中TLR4与RAGE的表达水平与PH组比较没有明显改变,但胞浆蛋白中的HMGB1和下游NF-κB p65、Cyclin D1、PCNA的蛋白表达水平出现了显著下降(P<0.05)。结论:HMGB1在小鼠肝再生过程中对细胞的增殖发挥了调控作用,该蛋白可能作为调控肝再生的潜在干预靶点。

陕西省医学生心理健康状况及影响因素

目的了解2018年陕西省在校医学生心理健康状况,为医学生心理健康提供依据。方法采用整群抽样方法,于2018年3—5月选择陕西省1400名在校医学生为调查对象,自制一般人口学调查表和依据经典情绪自评量表进行心理健康现状调查,分析心理健康状况及其影响因素。结果共回收有效问卷1397份,有效率为99.8%;压力、焦虑和抑郁状况的检出率分别为40.8%、67.3%和48.8%。陕西省在校医学生的压力、焦虑和抑郁在不同年级、不同性别、家庭经济状况、是否参加社团和是否有信仰间差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,不同年级、家庭经济状况以及是否有信仰是学生产生压力、焦虑和抑郁的危险性因素(OR=0.817,0.774,0.723;0.765,0.799,0.581;0.756,0.804,0.711),是否参加社团是学生发生抑郁的保护性因素(OR=1.475)。压力、焦虑和抑郁状况3者之间存在交互作用(均P<0.05)。结论陕西省在校医学生心理健康状况存在不同程度问题,年级、性别和家庭经济是影响心理健康的重要因素。年级、家庭经济和信仰是医学生产生压力、焦虑和抑郁的危险性因素,而压力、焦虑和抑郁彼此之间存在交互作用,可采取针对个体的干预措施来预防和控制医学生的心理健康问题。