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3株猪源大肠埃希氏菌耐药基因的初步定位
被引量:
3
1
作者
杨行
殷贵虎
+1 位作者
张文波
唐云云
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019年第4期1244-1251,共8页
本试验旨在对临床分离的猪源大肠埃希氏菌耐药基因进行初步定位。采用常规细菌分离培养、16S rRNA PCR扩增和序列测定方法从江西省3个规模化猪场送检的子宫脓液中分离鉴定病原菌,并通过质粒提取、转化大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞及药...
本试验旨在对临床分离的猪源大肠埃希氏菌耐药基因进行初步定位。采用常规细菌分离培养、16S rRNA PCR扩增和序列测定方法从江西省3个规模化猪场送检的子宫脓液中分离鉴定病原菌,并通过质粒提取、转化大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞及药敏试验对临床分离株的耐药基因进行初步定位。结果显示,分离鉴定到3株大肠埃希氏菌,其中JX-22分离株仅对氧氟沙星、大观霉素敏感,JX-26分离株仅对链霉素、氧氟沙星等4种药物敏感,JX-28分离株仅对氧氟沙星等3种药物敏感,均为多重耐药菌;3株大肠埃希氏菌均可纯化到分子质量大小不一的质粒。分离株、质粒转化菌及大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞药敏试验对比结果显示,3株大肠埃希氏菌的耐链霉素、林可霉素、甲硝唑、氨苄西林、阿莫西林、大观霉素、丁胺卡那基因,JX-22和JX-26分离株的耐多西环素、氟苯尼考和复方新诺明基因,JX-22分离株的耐头孢曲松基因,JX-28分离株的耐头孢曲松、头孢噻肟、诺氟沙星基因均定位于细菌质粒上;JX-28分离株的耐多西环素、氟苯尼考和复方新诺明基因,JX-22分离株的耐诺氟沙星基因和JX-26分离株的耐头孢曲松、头孢噻肟基因均定位于其染色体上;3株分离株均无氧氟沙星耐药基因。本试验初步确定3株多重耐药猪源大肠埃希氏菌的大部分耐药基因定位于质粒上,为进一步研究猪源大肠埃希氏菌的耐药机理和有效控制措施奠定基础。
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关键词
大肠埃希氏菌
多重耐药
耐药基因
药敏试验
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职称材料
波形蛋白对H9N2亚型AIV复制的影响研究
2
作者
卢安然
殷贵虎
+4 位作者
黄翔宇
黄静雯
胡嘉宁
蔡怡秦
冯秀丽
《畜牧与兽医》
北大核心
2022年第4期93-101,共9页
为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA...
为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响。构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞,采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化。结果证实,H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12 h时,病毒NP蛋白表达减少;而在感染24和36 h时,病毒NP蛋白表达上升。荧光定量PCR结果亦显示,在AIV感染后12 h时,HA基因表达水平明显降低。siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高,24 h时差异较小,36 h时有所升高。纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞,在病毒感染36 h时,H9N2亚型AIV的NP蛋白表达显著被抑制。荧光定量PCR结果亦证实病毒HA基因在AIV感染后36 h时表达水平明显降低。上述结果表明,H9N2亚型AIV在人源Hela细胞上的早期复制中,vimentin能起到一定程度上的抑制作用,且其重组表达蛋白孵育细胞能够阻断H9N2亚型AIV对细胞的感染,为深入研究vimentin抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗H9N2亚型AIV的药物研发提供了参考。
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关键词
波形蛋白
H9N2亚型AIV
重组蛋白表达
病毒基因表达
小干扰RNA
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职称材料
江西省部分地区鸭圆环病毒的检测与分子特点
被引量:
5
3
作者
杨行
韩瑞
+2 位作者
张文波
殷贵虎
唐云云
《畜牧与兽医》
北大核心
2020年第7期87-91,共5页
本试验旨在了解江西部分地区鸭圆环病毒(duck circovirus, DuCV)的流行情况及其优势流行基因型。通过采集病死鸭的组织样品并提取组织DNA,利用PCR对鸭圆环病毒进行检测,并对部分阳性PCR产物进行测序,用BLAST、MEGA 10和DNAstar分析序列...
本试验旨在了解江西部分地区鸭圆环病毒(duck circovirus, DuCV)的流行情况及其优势流行基因型。通过采集病死鸭的组织样品并提取组织DNA,利用PCR对鸭圆环病毒进行检测,并对部分阳性PCR产物进行测序,用BLAST、MEGA 10和DNAstar分析序列相似性,绘制系统进化树。结果,8个养鸭场中有5个鸭场检出鸭圆环病毒;42份组织样品中有18份为鸭圆环病毒阳性,阳性率为42.9%;PCR产物序列测定及BLAST分析显示均为鸭圆环病毒的基因片段,与GenBank上登录的相应序列相似性均在95%以上;序列进化分析表明,所测5条鸭圆环病毒序列均属于DuCV-1型,其中有3条序列属于DuCV-1a亚型,2条序列属于DuCV-1b亚型;5条所测序列的核苷酸相似性均在97%以上,且与其他DuCV-1型序列相似性均在95%以上,与DuCV-2型相应序列相似性均在80%~90%之间。结果表明,江西部分地区鸭圆环病毒的流行较为严重,且优势基因型为1型。本研究对了解江西地区鸭圆环病毒病的流行及开展该病的防控提供了一定的理论依据。
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关键词
鸭圆环
检测
分子特点
原文传递
一株猪源鸟肠球菌的分离鉴定及药敏试验
被引量:
1
4
作者
唐云云
杨行
+1 位作者
张文波
殷贵虎
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第7期93-96,161,共5页
为了确定引起江西省某规模化养猪场保育猪发病的病原及药物敏感性,为临床预防和控制该病提供依据,试验在无菌条件下采集病死猪的肺脏进行细菌分离,并对分离菌进行形态学观察、生化鉴定、16S rDNA基因扩增和序列测定、药敏试验、动物试...
为了确定引起江西省某规模化养猪场保育猪发病的病原及药物敏感性,为临床预防和控制该病提供依据,试验在无菌条件下采集病死猪的肺脏进行细菌分离,并对分离菌进行形态学观察、生化鉴定、16S rDNA基因扩增和序列测定、药敏试验、动物试验、临床用药观察。结果表明:分离纯化得到1株革兰氏染色阳性、呈短链状排列的球菌,在TSA培养基上形成圆形、边缘整齐、有光泽、湿润、淡黄色的小菌落;分离菌能发酵葡萄糖产酸、产气,能利用各种糖类;分离菌的16S rDNA PCR扩增结果呈阳性,16S rDNA基因序列与GenBank上登录的鸟肠球菌相应序列的同源性为100%;分离菌对头孢噻肟、环丙沙星、氨苄西林、氟苯尼考、阿莫西林和庆大霉素高度敏感;接种小白鼠后,无异常表现;选用氟苯尼考和阿莫西林进行治疗,病情得到了有效控制。说明分离得到的鸟肠球菌对猪有较强的致病性,筛选出的敏感药物在治疗该菌感染中效果较明显。
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关键词
鸟肠球菌
生化鉴定
药敏试验
序列测定
动物试验
临床用药
原文传递
题名
3株猪源大肠埃希氏菌耐药基因的初步定位
被引量:
3
1
作者
杨行
殷贵虎
张文波
唐云云
机构
江西农业大学动物科学技术学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019年第4期1244-1251,共8页
基金
江西省科技支撑计划项目(20121BBF60031)
江西省现代农业产业技术体系建设专项资金(JXARS-03)
文摘
本试验旨在对临床分离的猪源大肠埃希氏菌耐药基因进行初步定位。采用常规细菌分离培养、16S rRNA PCR扩增和序列测定方法从江西省3个规模化猪场送检的子宫脓液中分离鉴定病原菌,并通过质粒提取、转化大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞及药敏试验对临床分离株的耐药基因进行初步定位。结果显示,分离鉴定到3株大肠埃希氏菌,其中JX-22分离株仅对氧氟沙星、大观霉素敏感,JX-26分离株仅对链霉素、氧氟沙星等4种药物敏感,JX-28分离株仅对氧氟沙星等3种药物敏感,均为多重耐药菌;3株大肠埃希氏菌均可纯化到分子质量大小不一的质粒。分离株、质粒转化菌及大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞药敏试验对比结果显示,3株大肠埃希氏菌的耐链霉素、林可霉素、甲硝唑、氨苄西林、阿莫西林、大观霉素、丁胺卡那基因,JX-22和JX-26分离株的耐多西环素、氟苯尼考和复方新诺明基因,JX-22分离株的耐头孢曲松基因,JX-28分离株的耐头孢曲松、头孢噻肟、诺氟沙星基因均定位于细菌质粒上;JX-28分离株的耐多西环素、氟苯尼考和复方新诺明基因,JX-22分离株的耐诺氟沙星基因和JX-26分离株的耐头孢曲松、头孢噻肟基因均定位于其染色体上;3株分离株均无氧氟沙星耐药基因。本试验初步确定3株多重耐药猪源大肠埃希氏菌的大部分耐药基因定位于质粒上,为进一步研究猪源大肠埃希氏菌的耐药机理和有效控制措施奠定基础。
关键词
大肠埃希氏菌
多重耐药
耐药基因
药敏试验
Keywords
E.coli
mult-drug resistance
drug resistance gene
drug sensitive test
分类号
S852.61 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
波形蛋白对H9N2亚型AIV复制的影响研究
2
作者
卢安然
殷贵虎
黄翔宇
黄静雯
胡嘉宁
蔡怡秦
冯秀丽
机构
南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室/教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室
出处
《畜牧与兽医》
北大核心
2022年第4期93-101,共9页
基金
国家重点研发项目(2017YFD0500706)
国家自然科学基金(31872458)。
文摘
为研究波形蛋白(vimentin)对H9N2亚型禽流感病毒(AIV)复制的影响,构建了真核表达载体FLAG-vimentin,并采用Western blot技术验证FLAG-vimentin重组载体和病毒NP蛋白的表达情况,用荧光定量PCR技术检测病毒HA基因水平。同时,设计合成siRNA,敲低内源性vimentin,检测其对病毒HA基因表达水平的影响。构建原核表达载pCold I-vimentin,蛋白纯化后孵育细胞,采用Western blot、荧光定量PCR技术检测病毒的蛋白表达和基因水平的变化。结果证实,H9N2亚型AIV感染FLAG-vimentin重组载体转染的Hela细胞12 h时,病毒NP蛋白表达减少;而在感染24和36 h时,病毒NP蛋白表达上升。荧光定量PCR结果亦显示,在AIV感染后12 h时,HA基因表达水平明显降低。siRNA敲低Hela细胞内源性vimentin后,H9N2亚型AIV的HA基因表达水平在病毒感染12 h时明显升高,24 h时差异较小,36 h时有所升高。纯化后的vimentin重组蛋白孵育细胞,在病毒感染36 h时,H9N2亚型AIV的NP蛋白表达显著被抑制。荧光定量PCR结果亦证实病毒HA基因在AIV感染后36 h时表达水平明显降低。上述结果表明,H9N2亚型AIV在人源Hela细胞上的早期复制中,vimentin能起到一定程度上的抑制作用,且其重组表达蛋白孵育细胞能够阻断H9N2亚型AIV对细胞的感染,为深入研究vimentin抗病毒复制的机制提供了重要的试验依据,同时为开展抗H9N2亚型AIV的药物研发提供了参考。
关键词
波形蛋白
H9N2亚型AIV
重组蛋白表达
病毒基因表达
小干扰RNA
Keywords
vimentin
H9N2 subtype AIV
recombinant protein expression
viral gene expression
siRNA
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
江西省部分地区鸭圆环病毒的检测与分子特点
被引量:
5
3
作者
杨行
韩瑞
张文波
殷贵虎
唐云云
机构
江西农业大学动物科学技术学院
出处
《畜牧与兽医》
北大核心
2020年第7期87-91,共5页
基金
江西省科技支撑计划项目(2012BBF60031)
江西省现代农业产业技术体系建设专项资金(JXARS-03)。
文摘
本试验旨在了解江西部分地区鸭圆环病毒(duck circovirus, DuCV)的流行情况及其优势流行基因型。通过采集病死鸭的组织样品并提取组织DNA,利用PCR对鸭圆环病毒进行检测,并对部分阳性PCR产物进行测序,用BLAST、MEGA 10和DNAstar分析序列相似性,绘制系统进化树。结果,8个养鸭场中有5个鸭场检出鸭圆环病毒;42份组织样品中有18份为鸭圆环病毒阳性,阳性率为42.9%;PCR产物序列测定及BLAST分析显示均为鸭圆环病毒的基因片段,与GenBank上登录的相应序列相似性均在95%以上;序列进化分析表明,所测5条鸭圆环病毒序列均属于DuCV-1型,其中有3条序列属于DuCV-1a亚型,2条序列属于DuCV-1b亚型;5条所测序列的核苷酸相似性均在97%以上,且与其他DuCV-1型序列相似性均在95%以上,与DuCV-2型相应序列相似性均在80%~90%之间。结果表明,江西部分地区鸭圆环病毒的流行较为严重,且优势基因型为1型。本研究对了解江西地区鸭圆环病毒病的流行及开展该病的防控提供了一定的理论依据。
关键词
鸭圆环
检测
分子特点
Keywords
duck circovirus
detection
molecular characteristics
分类号
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
原文传递
题名
一株猪源鸟肠球菌的分离鉴定及药敏试验
被引量:
1
4
作者
唐云云
杨行
张文波
殷贵虎
机构
江西农业大学动物科学技术学院
出处
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020年第7期93-96,161,共5页
基金
江西省科技支撑计划项目(20132BF60038)
江西省生猪产业体系项目。
文摘
为了确定引起江西省某规模化养猪场保育猪发病的病原及药物敏感性,为临床预防和控制该病提供依据,试验在无菌条件下采集病死猪的肺脏进行细菌分离,并对分离菌进行形态学观察、生化鉴定、16S rDNA基因扩增和序列测定、药敏试验、动物试验、临床用药观察。结果表明:分离纯化得到1株革兰氏染色阳性、呈短链状排列的球菌,在TSA培养基上形成圆形、边缘整齐、有光泽、湿润、淡黄色的小菌落;分离菌能发酵葡萄糖产酸、产气,能利用各种糖类;分离菌的16S rDNA PCR扩增结果呈阳性,16S rDNA基因序列与GenBank上登录的鸟肠球菌相应序列的同源性为100%;分离菌对头孢噻肟、环丙沙星、氨苄西林、氟苯尼考、阿莫西林和庆大霉素高度敏感;接种小白鼠后,无异常表现;选用氟苯尼考和阿莫西林进行治疗,病情得到了有效控制。说明分离得到的鸟肠球菌对猪有较强的致病性,筛选出的敏感药物在治疗该菌感染中效果较明显。
关键词
鸟肠球菌
生化鉴定
药敏试验
序列测定
动物试验
临床用药
分类号
S852.611 [农业科学—基础兽医学]
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
3株猪源大肠埃希氏菌耐药基因的初步定位
杨行
殷贵虎
张文波
唐云云
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2019
3
下载PDF
职称材料
2
波形蛋白对H9N2亚型AIV复制的影响研究
卢安然
殷贵虎
黄翔宇
黄静雯
胡嘉宁
蔡怡秦
冯秀丽
《畜牧与兽医》
北大核心
2022
0
下载PDF
职称材料
3
江西省部分地区鸭圆环病毒的检测与分子特点
杨行
韩瑞
张文波
殷贵虎
唐云云
《畜牧与兽医》
北大核心
2020
5
原文传递
4
一株猪源鸟肠球菌的分离鉴定及药敏试验
唐云云
杨行
张文波
殷贵虎
《黑龙江畜牧兽医》
CAS
北大核心
2020
1
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