TAT-MafA融合蛋白诱导小肠细胞系IEC-6表达胰岛素

借助蛋白质转导技术,利用胰岛β细胞转录因子MafA诱导小肠细胞系IEC-6表达胰岛素,为糖尿病的治疗提供新的方法。将TAT基因与MafA基因一起插入p32a(+)载体中,构建TAT-MafA融合蛋白原核表达载体,转化BL21获得表达菌株,经IPTG诱导和Ni柱亲和层析纯化TAT-MafA融合蛋白,用1μM浓度的该融合蛋白孵育IEC-6细胞12h和24h后,分别进行进胞检测和胰岛素表达检测。实验结果表明,细胞免疫荧光和Western-blot方法检测到经TAT-MafA融合蛋白作用12h后的IEC-6细胞中有该蛋白,并经细胞免疫荧光和RT-PCR的方法检测出TAT-MafA作用24h后的IEC-6细胞中有胰岛素的表达。因此,TAT-MafA融合蛋白可以高效进入小肠细胞系IEC-6细胞,并且进胞后仍保持MafA原有的生物学活性,能启动胰岛素基因的表达,诱导IEC-6成为胰岛素表达细胞。

论小学语文课堂有效性提问方法与对策

在课程改革的大背景下，我国基础教育越来越重视课堂教学的有效性，越来越重视对学生综合素质和能力的培养，因此，教师们都在寻找最有效的教学方法。问题教学法就是小学语文教学中普遍使用的一种教学方法，但是，就目前情况来看，在小学语文课堂中问题教学法的实际效果并没有得到充分发挥。所以，当前，对于小学语文课堂教学来说，课堂提问的有效性方法和对策就是很多老师都在找寻的目标。

神经元素3蛋白(Ngn3)诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素表达细胞分化的初步研究

胰腺发育相关基因神经元素3(neurogenin3,Ngn3),属于碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)家族的转录因子,对胰腺内分泌细胞的发育及分化至关重要,且被认为是胰腺祖细胞的标志蛋白质.之前的研究发现,全长Ngn3蛋白具有蛋白质转导功能,可以高效进入多种真核细胞系.近年来多项研究显示,骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的多能干细胞.利用蛋白质转导技术,将体外表达纯化的胰腺发育重要因子Ngn3蛋白导入体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞中,诱导其向胰岛素表达细胞分化.结果显示,经Ngn3蛋白诱导的大鼠骨髓间充质干细胞出现细胞聚集生长现象,并有形状类似胰岛的细胞团出现.RT-PCR结果显示经Ngn3蛋白诱导的大鼠骨髓间充质干细胞可以有效表达胰岛素,并且一些β细胞相关基因如胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic-duodenal homeobox 1,Pdx-1),神经分化因子(neurogenic differentiation,NeuroD),同源结构域基因4(paired box gene 4,Pax4),葡萄糖转运体-2(glucose transporter 2,Glut-2)都有表达.细胞免疫荧光也可检测到胰岛素的表达.通过Ngn3蛋白质诱导分化大鼠骨髓间充质干细胞的初步研究,探索了应用骨髓间充质干细胞体外诱导分化获得胰岛素表达细胞的可行性,为糖尿病治疗提供一定的实验依据.