1,25(OH)_(2)D_(3)对小鼠皮肤创伤愈合的作用及机制研究

目的探讨1,25(OH)_(2)D_(3)参与皮肤全层切割伤小鼠创面愈合的作用及机制。方法将40只5周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为5组,包括皮肤创伤组、皮肤创伤+维生素D受体(VDR)抑制剂组、皮肤创伤+维生素D受体(VDR)激动剂组、皮肤创伤+维生素D药粉(VD)组、正常对照组,每组8只。观察创面愈合情况,拍照并记录创面大小,计算创面愈合率。在创面处理第9天时,ELISA检测各组小鼠血清中1,25(OH)_(2)D_(3)的浓度;取创缘组织,HE染色检测创面组织病理变化,免疫荧光染色检测组织中VDR、CD31的表达情况,分别用qRT-PCR、Western Blot检测小鼠组织中VDR、Notch1、TNF-α、IL-17A、IL-17F和IL-22的mRNA和蛋白的表达。结果在小鼠伤口愈合第9天时,与正常对照组比较,皮肤创伤组血清1,25(OH)_(2)D_(3)浓度、创面组织VDR、CD31表达降低(P<0.05),TNF-α、IL-17A、IL-17F和IL-22表达升高,Notch1表达差异无统计学意义(P>0.05);与皮肤创伤组比较,皮肤创伤+VDR激动剂组、皮肤创伤+VD组小鼠皮肤创面愈合率、血清1,25(OH)_(2)D_(3)浓度、创面组织VDR、CD31、Notch1表达升高(P<0.05),创面组织TNF-α、IL-17A、IL-17F、和IL-22表达降低(P<0.05),皮肤创伤+VDR抑制剂组小鼠皮肤创面组织TNF-α、IL-22的蛋白表达升高(均P<0.01),创面愈合率、血清1,25(OH)_(2)D_(3)浓度、创面组织VDR、CD31、Notch1、TNF-α、IL-17A、IL-17F、IL-22的mRNA和Notch1、IL-17A、IL-17F的蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,皮肤创伤+VDR激动剂组、皮肤创伤+VD组小鼠的伤口组织炎性细胞浸润减轻且血管生成增加、真皮结缔组织较致密,表皮基本完成再上皮化。结论1,25(OH)_(2)D_(3)能够促进皮肤全层切割伤小鼠创面愈合,可能是通过减轻创面炎症因子TNF-α、IL-17A、IL-17F和IL-22的表达,促进Notch1受体和VDR的表达和血管生成实现的。

维生素D治疗小鼠狼疮性肾炎的机制:基于上调miR145的表达进而抑制TGF-β1/Smad3通路

目的研究1,25(OH)_(2)D_(3)是否通过上调miR145从而抑制TGF-β1/Smad3通路,探讨其在狼疮性肾炎中的可能治疗机制。方法共42只8周龄雌性ApoE^(-/-)小鼠,分为7组,每组6只。空白对照组1、2每天予腹腔注射0.5 mL无菌0.9%生理盐水至实验结束;空白模型组1、2予腹腔注射降植烷0.5 mL/只1次后高脂饲料喂养3个月建立狼疮性肾炎小鼠模型;1,25(OH)_(2)D_(3)治疗组、miR145过表达组、miR145空载体组在空白模型组的基础上,分别予灌胃维生素D、载入miR145空载腺病毒、载入miR145过表达腺病毒。CBB法检测各组小鼠第8周尿蛋白含量,ELISA法分别检测各组小鼠外周血ANA抗体、抗dsDNA抗体,评估小鼠模型建立情况。通过RT-qPCR检测各组小鼠外周血PBMCs中miR145表达,观察1,25(OH)_(2)D_(3)处理后miR145表达情况。通过Western blot检测各组小鼠外周血PBMCs及肾脏中TGF-β1、Smad3、p-smad3表达,观察上调1,25(OH)_(2)D_(3)、miR145过表达对TGF-β1/Smad3通路的影响。对空白对照组1、空白模型组1、miR145过表达组、miR145空载体组小鼠肾脏进行病理检测,比较miR145过表达后肾脏病理变化。结果miR145对小鼠狼疮性肾炎的作用实验组:miR145过表达组中小鼠肾脏损害减轻;外周血PBMCs中miR145表达水平显著高于miR145空载体组(P<0.01),TGF-β1、Smad3、p-smad3表达均显著低于miR145空载体组(均P<0.01),肾脏中TGF-β1、Smad3、p-smad3表达均显著低于miR145空载体组(均P<0.01)。1,25(OH)_(2)D_(3)对小鼠狼疮性肾炎的治疗作用实验组:第24周,1,25(OH)_(2)D_(3)治疗组尿蛋白量明显低于空白模型组(P<0.01);1,25(OH)_(2)D_(3)治疗组小鼠血清1,25(OH)_(2)D_(3)浓度明显高于空白模型组(P<0.01),外周血PBMCs中miR145表达水平显著高于空白模型组(P<0.01),而TGF-β1、Smad3、p-smad3表达明显低于空白模型组(均P<0.01)。结论1,25(OH)_(2)D_(3)通过上调miR145表达,从而负性调节TGF-β1/Smad3通路,减轻小鼠狼疮性肾炎肾脏损害。miR145可能是治疗狼疮性肾炎的新靶点。

固有淋巴细胞3在皮肤创伤愈合中的作用及功能研究

目的探讨固有淋巴细胞3(ILC3)在皮肤创伤愈合中的作用机制。方法24只5周龄C57BL/6雄性小鼠随机分为皮肤创伤+ILC3抑制剂组(简称ILC3抑制剂组)、皮肤创伤组和对照组,每组8只;建立创伤模型前4 d给予ILC3抑制剂组小鼠腹腔注射1μg ILC3抑制剂每2天1次共2次,皮肤创伤组注射等体积生理氯化钠溶液,对照组小鼠正常喂养。构建小鼠皮肤创伤模型:腹腔注射麻醉后,以背部中线中点为圆点,用环钻压切出直径0.6 cm的皮肤全层圆形切口,并经组织学证明为全层损伤。观察记录创面大小,分别于创伤第0、1、3、5、7、9天对创面拍照并计算相应的创面愈合率。术后第9天取创缘组织用流式细胞仪分析皮肤创周ILC3浸润数量,并行HE染色,观察创面皮肤组织愈合情况,qRT-PCR检测创缘组织维生素D受体(VDR)、Notch1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-17A、IL-17F、IL-22 mRNA表达水平,Western印迹法检测其蛋白表达水平。组间比较采用单因素方差分析及t检验。结果创伤后第9天,与对照组比较,皮肤创伤组创缘组织ILC3数量升高(5.31%±1.47%比3.10%±0.54%,P<0.01),TNF-α、IL-22、IL-17A、IL-17F mRNA及蛋白表达水平较高(均P<0.05),VDR mRNA及蛋白表达水平较低(P<0.05),Notch1蛋白表达水平较高(P<0.05),但其mRNA表达水平两组间差异无统计学意义(P>0.05)。第1、3、5天,ILC3抑制剂组创面愈合率(45.17%±9.90%、61.58%±11.61%、75.61%±9.12%)均高于皮肤创伤组(25.87%±10.96%、47.78%±13.81%、64.55%±10.29%,均P<0.05),第9天创周ILC3数量(2.69%±0.95%)低于皮肤创伤组(P<0.01),创缘组织TNF-α、IL-22、IL-17A、IL-17F mRNA及蛋白表达均低于皮肤创伤组(均P<0.05),Notch1、VDR mRNA及蛋白表达均高于皮肤创伤组(均P<0.05)。创伤后第9天组织病理检查显示,ILC3抑制剂组上皮结构连续、完整,胶原纤维更加密集且排列整齐,毛囊、血管、皮脂腺等各组织结构更接近对照组皮肤。结论皮肤ILC3浸润于局部创面,通过TNF-α、IL-17A、IL-17F、IL-22等炎症因子参与皮肤创伤愈合的进程。下调ILC3数量可能通过激活VDR、Notch1并抑制TNF-α信号通路及下游炎症因子表达,促进皮肤创口愈合。