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响应面优化即食风味鲟鱼加工工艺及其贮藏品质分析
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作者 王辅霞 毕保良 +4 位作者 李秀芬 赫明漪 邹钰萱 皇水芝 赵冰 《中国调味品》 CAS 北大核心 2024年第3期8-14,共7页
为开发小包装即食风味鲟鱼零食,以感官评分、色值和质地为评价指标,通过响应面法优化即食鲟鱼的加工工艺,并对其常温贮藏品质进行分析。结果显示,最佳工艺参数为香葱粉0.2%、生姜粉0.4%、八角粉0.3%、桂皮0.3%、黑胡椒粉0.2%、酱油4.0%... 为开发小包装即食风味鲟鱼零食,以感官评分、色值和质地为评价指标,通过响应面法优化即食鲟鱼的加工工艺,并对其常温贮藏品质进行分析。结果显示,最佳工艺参数为香葱粉0.2%、生姜粉0.4%、八角粉0.3%、桂皮0.3%、黑胡椒粉0.2%、酱油4.0%、老抽11%、食盐2.0%、味精1.0%、牛肉膏3.0%、玉米淀粉1.0%、白砂糖5.0%、脱腥时间29 min、煮制时间15 min。此时即食风味鲟鱼香味浓郁,口感细腻,色泽诱人,是一款优质的休闲零食。即食风味鲟鱼贮藏25 d无胀袋和发霉,并且保鲜处理对产品的贮藏品质有一定提升作用。 展开更多
关键词 即食鲟鱼 加工工艺 响应面法 贮藏品质
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四种不同食性鱼类的消化酶活性及肠道组织形态学比较研究 被引量:2
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作者 荣华 张雷 +6 位作者 王晓雯 武祥伟 王金浩 胡青 毕保良 孔令富 豆腾飞 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2023年第2期29-35,共7页
为了探讨食性与鱼类消化酶分泌及肠道组织形态学的关系,通过比较分析滇池高背鲫(Carassius auratus)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鳜(Siniperca chuatsi)和昆明裂腹鱼(Shizothorax grahami)4种不同食性鱼类鱼体近似成分、血液生... 为了探讨食性与鱼类消化酶分泌及肠道组织形态学的关系,通过比较分析滇池高背鲫(Carassius auratus)、草鱼(Ctenopharyngodon idellus)、鳜(Siniperca chuatsi)和昆明裂腹鱼(Shizothorax grahami)4种不同食性鱼类鱼体近似成分、血液生化指标、消化酶活性及肠道组织形态的差异。结果表明,鳜的全鱼水分显著低于其他鱼类,粗蛋白含量显著高于其他鱼类;谷草转氨酶GOT、白蛋白AIB、甘油三酯TG、总胆固醇TCH等部分血液生化指标受食性影响显著;鳜肠道蛋白酶显著高于草鱼,淀粉酶活性显著低于草鱼;鱼类肠道形态(绒毛高度、绒毛宽度和肌层厚度)与食性相关,如鳜肠道微绒毛分支较多,结构复杂。肠道结构的复杂性加大了食糜在肠道中的保留时间,促进了鱼类对营养物质的充分吸收。综上所述,食性与鱼类消化酶活性及肠道组织形态相适应,通过分析消化酶活性和肠道组织形态,有助于界定鱼类食性,改进饲料配方和饲养方法。 展开更多
关键词 食性 体成分 血液生化指标 消化酶活性 肠道形态
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模糊数学评定结合响应面法优化核桃鲟鱼肠的工艺 被引量:1
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作者 王辅霞 毕保良 +4 位作者 赵冰 赫明漪 皇水芝 邹钰萱 李秀芬 《中国调味品》 CAS 北大核心 2023年第6期111-117,共7页
以鲟鱼肉为原料,开发高品质的核桃鲟鱼肠。以感官评分、白度和质构性质为指标,研究食盐、美藤果油、核桃分离蛋白、玉米淀粉的添加量以及蒸煮时间对鲟鱼肠品质的影响,通过模糊数学感官评定结合响应面法优化鲟鱼肠的加工工艺。结果表明,... 以鲟鱼肉为原料,开发高品质的核桃鲟鱼肠。以感官评分、白度和质构性质为指标,研究食盐、美藤果油、核桃分离蛋白、玉米淀粉的添加量以及蒸煮时间对鲟鱼肠品质的影响,通过模糊数学感官评定结合响应面法优化鲟鱼肠的加工工艺。结果表明,影响核桃鲟鱼肠感官评分的因素主次顺序为核桃分离蛋白添加量>玉米淀粉添加量>食盐添加量。核桃鲟鱼肠的最佳工艺条件:以鲟鱼肉100 g为基准,核桃分离蛋白添加量为4.4%,玉米淀粉添加量为19%,食盐添加量为3.0%,美藤果油添加量为5%,蒸煮时间为40 min。在此条件下加工的核桃鲟鱼肠感官评分最高,风味独特,质地细腻有弹性。该研究结果可为鲟鱼肉的有效利用提供参考。 展开更多
关键词 鲟鱼 鱼肉肠 核桃 模糊数学 感官评价 响应面法
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浅色黄姑鱼Ⅰ型胶原蛋白α2(COL1A2)基因的克隆及表达分析
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作者 荣华 凌钰 +5 位作者 豆腾飞 黄英 王晓雯 孔令富 毕保良 王金浩 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第5期786-794,共9页
【目的】通过克隆浅色黄姑鱼(Nibea coibor)Ⅰ型胶原蛋白α2(COL1A2)基因,分析其分子特征、组织分布及表达差异,为鱼类胶原蛋白代谢机制研究奠定理论基础。【方法】通过cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获... 【目的】通过克隆浅色黄姑鱼(Nibea coibor)Ⅰ型胶原蛋白α2(COL1A2)基因,分析其分子特征、组织分布及表达差异,为鱼类胶原蛋白代谢机制研究奠定理论基础。【方法】通过cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得浅色黄姑鱼COL1A2基因全长序列,利用生物信息学分析方法对其进行系统分析,探讨其分子特征及组织表达谱。【结果】COL1A2 cDNA序列长5826 bp,编码1352个氨基酸。BLAST同源性比对和系统进化树分析表明:浅色黄姑鱼与大黄鱼(Larimichthys crocea)同属石首鱼科(Sciaenidae),亲缘关系最近,且两者COL1A2的氨基酸序列同源性最高(96.60%)。生物信息学分析显示:COL1A2多肽链包含脊椎动物Ⅰ型胶原蛋白的所有特征,如相同的信号肽、C-前肽和N-前肽结构域以及三重螺旋结构域等。qRT-PCR结果显示:鱼鳔中COL1A2基因的表达显著高于其他组织(P<0.05),且胶原蛋白在不同组织中的分布规律与其一致。【结论】本研究首次克隆了浅色黄姑鱼COL1A2基因(GenBank登录号:MK641513),该基因的组织表达特异性是引起胶原蛋白差异化沉积的原因之一。研究结果有助于深入探究胶原蛋白的生物合成途径及调控机制。 展开更多
关键词 浅色黄姑鱼 COL1A2 CDNA克隆 表达分析 组织分布
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低盐驯化对西杂鲟幼鱼生长发育的影响
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作者 陈会琴 胡青 +3 位作者 孔令富 严晖 赵耀 毕保良 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2023年第2期50-60,共11页
为探讨低盐环境对西杂鲟幼鱼(西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂)(Acipenser baerii♀×A.schrenckii♂)生长发育的影响,本研究设置了3个盐度组(0‰、4‰、8‰),驯化15 d后,分析盐度对西杂鲟幼鱼血清生化指标、抗氧化指标,鳃、肾、肠Na^(+... 为探讨低盐环境对西杂鲟幼鱼(西伯利亚鲟♀×施氏鲟♂)(Acipenser baerii♀×A.schrenckii♂)生长发育的影响,本研究设置了3个盐度组(0‰、4‰、8‰),驯化15 d后,分析盐度对西杂鲟幼鱼血清生化指标、抗氧化指标,鳃、肾、肠Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性、激素水平及免疫、生长发育相关基因表达的影响。结果显示:(1)低盐驯化对西杂鲟幼鱼血糖、总蛋白、总胆固醇、甘油三酯、过氧化氢酶、还原型谷胱甘肽、总抗氧化能力、丙二醛、Na^(+)和肾、肠Na^(+)-K^(+)-ATP酶活均无显著影响,但低盐驯化对西杂鲟幼鱼鳃Na^(+)-K^(+)-ATP酶活和血清Cl-的影响呈“U”型变化,为先下降后升高的表达趋势;(2)利用ELISA法测定血清甲状腺激素(T 3、FT 3)和皮质醇水平后,随着盐度的升高,两者呈先升后降的趋势,但各组间无显著差异;(3)利用qRT-PCR测定免疫和生长发育相关基因的表达量,随着驯化盐度的升高,西杂鲟幼鱼hsp70、hsp90、igf-Ⅱ、fshr、erα表达水平呈先下降后升高趋势,tnf-α、igf-Ⅰ、vtg表达水平呈先升高后降低趋势,lysozyme、gst表达水平逐渐升高,fsh、lhr、erβ表达水平逐渐下降,但各组间均无显著差异,S 8处理组lh的表达水平显著低于对照组。综上所述,在适应低盐的过程中,西杂鲟幼鱼鳃Na^(+)-K^(+)-ATP酶被激活,参与渗透压平衡调节,表明15 d的低盐驯化可能提高了西杂鲟幼鱼的耐盐性,但未显著影响西杂鲟幼鱼的生长发育和免疫性能。 展开更多
关键词 低盐驯化 西杂鲟(Acipenser baerii♀×A.schrenckii♂)幼鱼 Na^(+)-K^(+)-ATP酶活性 抗氧化指标 免疫、生长发育相关基因
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本科生参与科研的途径及建议 被引量:14
6
作者 毕保良 陈颖 +1 位作者 吕霞 孔令富 《云南农业大学学报(社会科学版)》 2011年第5期87-91,共5页
本科生参加科研有利于培养学生的创新精神、提高学生的创新能力和实践能力,能够全面提高学生的综合素质,是培养创新型人才的有效途径。文章采用文献法等研究方法,阐述了本科生参与科研活动的三种途径,针对当前本科生参与科研的问题,提... 本科生参加科研有利于培养学生的创新精神、提高学生的创新能力和实践能力,能够全面提高学生的综合素质,是培养创新型人才的有效途径。文章采用文献法等研究方法,阐述了本科生参与科研活动的三种途径,针对当前本科生参与科研的问题,提出应创新本科生科研管理体制,出台并完善本科生科研活动的评价激励机制的建议。 展开更多
关键词 科研 本科生 参与 建议
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分子生物学技术在猪瘟诊断中的应用 被引量:11
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作者 毕保良 李进涛 +1 位作者 刘旭川 张以芳 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2009年第2期106-108,共3页
猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、发热性、接触性传染病,可引起各种年龄猪发病。随着对猪瘟病毒研究的深入,猪瘟在一定程度上得到有效的控制。但是近年来,世界各国流行的猪瘟在流行病学、临床症状和病理变化等方面出现了一些新的变化,... 猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、发热性、接触性传染病,可引起各种年龄猪发病。随着对猪瘟病毒研究的深入,猪瘟在一定程度上得到有效的控制。但是近年来,世界各国流行的猪瘟在流行病学、临床症状和病理变化等方面出现了一些新的变化,猪瘟的防控出现了许多新的情况。早已宣布消灭了猪瘟的一些欧洲国家又报道有猪瘟发生。我国猪瘟的发病率亦呈上升趋势,严重威胁着我国养猪业的发展,给养猪业造成极大的经济损失。论文综述了猪瘟分子生物学诊断技术的研究进展,为猪瘟的及时诊断提供参考。 展开更多
关键词 猪瘟 诊断技术
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浅议高校科研档案管理的问题及对策 被引量:20
8
作者 毕保良 郝一沁 吕霞 《农业科技管理》 2010年第6期61-63,共3页
随着高校科学研究事业的不断深入和发展,科研工作对科研档案的建立健全以及管理提出了更高的要求。文章分析了高校科研档案利用率低、缺乏行之有效的科研档案管理制度和制约手段、科研档案管理人员配备不足、工作任务重等问题,提出了相... 随着高校科学研究事业的不断深入和发展,科研工作对科研档案的建立健全以及管理提出了更高的要求。文章分析了高校科研档案利用率低、缺乏行之有效的科研档案管理制度和制约手段、科研档案管理人员配备不足、工作任务重等问题,提出了相应的解决对策,如利用现代技术规范科研档案管理、制定并完善科研档案的管理制度和办法、处理好"存"与"用"的关系等,以更好地指导科研管理工作。 展开更多
关键词 高校 科研档案管理 问题 对策
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地方农业院校科研项目申报渠道及建议 被引量:2
9
作者 毕保良 吕霞 +3 位作者 郝一沁 杨生超 谢世清 杨志雷 《云南农业大学学报(社会科学版)》 2011年第4期46-49,60,共5页
科学研究是高校三大社会职能之一。阐述了项目申报渠道,提出了科研管理部门应早动员、早组织、做好服务工作;项目申报人要早做准备,加强项目设计、做好项目论证、多渠道开展合作、多写多报、勇于尝试等对策与建议。
关键词 农业院校 科研项目 申报 渠道 建议
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猪流感诊断技术研究进展 被引量:10
10
作者 毕保良 李进涛 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期179-183,共5页
猪流感是由甲型流行性感冒病毒感染引起的一种急性呼吸道传染病。除常规的临床症状及病理变化诊断外,猪流感的确诊依赖于实验室诊断方法,方法主要有电镜技术、病毒分离和鉴定、血清学试验、免疫学试验、分子生物学方法等。作者从传统的... 猪流感是由甲型流行性感冒病毒感染引起的一种急性呼吸道传染病。除常规的临床症状及病理变化诊断外,猪流感的确诊依赖于实验室诊断方法,方法主要有电镜技术、病毒分离和鉴定、血清学试验、免疫学试验、分子生物学方法等。作者从传统的实验室诊断技术和分子生物学诊断技术两个方面综合阐述了猪流感的诊断研究进展,为SIV的临床快速诊断和深入研究提供科学依据。 展开更多
关键词 猪流感 诊断技术
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水产养殖学专业课程思政元素探索--以水生生物学为例
11
作者 胡青 毕保良 《现代农业科技》 2023年第22期157-161,共5页
思想政治工作是建设高水平人才培养体系中的重要环节,这就要求高校教师在讲授专业知识的同时,也必须抓好课程思政建设。本文以水产养殖学专业课程水生生物学为例,深入挖掘课程思政元素,建立课程思政案例库,在新农科背景下将课程思政与... 思想政治工作是建设高水平人才培养体系中的重要环节,这就要求高校教师在讲授专业知识的同时,也必须抓好课程思政建设。本文以水产养殖学专业课程水生生物学为例,深入挖掘课程思政元素,建立课程思政案例库,在新农科背景下将课程思政与专业知识有机融合,实现教书与育人的统一,为培养服务地方经济发展,具有较强实践能力、创新精神和终身学习能力的高素质复合型人才贡献力量。 展开更多
关键词 课程思政 水生生物学 人才培养
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云南多重耐药猪源大肠杆菌的分离鉴定及其耐药机制初步研究 被引量:4
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作者 毕保良 李富祥 +2 位作者 胡骑 宋建领 李华春 《上海畜牧兽医通讯》 2012年第5期6-7,共2页
从云南省3个规模化猪场仔猪黄白痢病猪病例分离到7株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验和致病性试验对分离菌株进行鉴定,并提取细菌的质粒,分析质粒与细菌耐药性之间的相关性。结果表明:7株分离株经生理生化试验鉴定为仔猪黄... 从云南省3个规模化猪场仔猪黄白痢病猪病例分离到7株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验和致病性试验对分离菌株进行鉴定,并提取细菌的质粒,分析质粒与细菌耐药性之间的相关性。结果表明:7株分离株经生理生化试验鉴定为仔猪黄白痢大肠杆菌,对小白鼠有强致病性,分离株对15种抗生素表现为多重耐药,其中14耐1株、13耐2株、11耐2株、8和8耐以下2株,头孢类抗生素是治疗仔猪黄白痢的首选药物,表明云南猪大肠杆菌已经呈现出十分严重的耐药性。质粒图谱分析表明,4株分离株均携带分子量约为5000bp的一个质粒,而另外3株不携带任何质粒。质粒转化实验表明,分离株所携带的质粒为非耐药性质粒,与细菌耐药性无直接相关性。 展开更多
关键词 仔猪黄白痢 多重耐药大肠杆菌 分离 鉴定 质粒
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论地方农业院校科研项目的申报与管理——以云南农业大学为例
13
作者 毕保良 吕霞 +3 位作者 郝一沁 杨志雷 杨生超 谢世清 《沈阳农业大学学报(社会科学版)》 2011年第5期532-535,共4页
科学研究项目申报是高等学校保持科学活力的重要源泉。地方农业院校科研项目申报扎堆现象突出,学科分布不平衡;人文社会科学研究不足,科研项目申报重自然科学轻人文科学;前期研究基础薄弱,持续研究连续性不够;合作研究项目数量不足,科... 科学研究项目申报是高等学校保持科学活力的重要源泉。地方农业院校科研项目申报扎堆现象突出,学科分布不平衡;人文社会科学研究不足,科研项目申报重自然科学轻人文科学;前期研究基础薄弱,持续研究连续性不够;合作研究项目数量不足,科研创新团队协作能力较弱。因此,地方农业院校科研项目申报应该加强多学科、跨部门协作联合,促进多学科交叉合作;出台科研项目激励机制,加强人文社会科学研究;以重大项目为纽带,加强科研创新团队建设。 展开更多
关键词 农业院校 科研项目 项目申报 项目管理 自然科学 人文社会科学
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干旱形势下农业院校科技服务实践及建议
14
作者 毕保良 吕霞 +1 位作者 杨生超 谢世清 《云南农业大学学报(社会科学版)》 2011年第2期9-13,共5页
2010年春,云南遭遇百年一遇的全省性特大旱灾,给全省城乡各族群众生产、生活带来了严重影响,对工、农业生产造成极大威胁。本文以干旱形势下地方农业院校科技服务实践及建议为题,针对云南冬春干旱频繁发生的特点,阐述了农业院校开展科... 2010年春,云南遭遇百年一遇的全省性特大旱灾,给全省城乡各族群众生产、生活带来了严重影响,对工、农业生产造成极大威胁。本文以干旱形势下地方农业院校科技服务实践及建议为题,针对云南冬春干旱频繁发生的特点,阐述了农业院校开展科技服务的主要途径和做法,提出了应发挥农业高校的人才、技术和资源优势,开展主要粮食作物耐旱品种筛选与选育、抗旱栽培关键技术集成创新、生物多样性间套作种植技术的示范推广等对策与建议。 展开更多
关键词 农业院校 抗旱 科技服务
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滇南小耳猪髂骨穿刺的初步探讨
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作者 毕保良 李进涛 +4 位作者 刘汝文 陈丽玲 何保丽 李波 角建林 《云南畜牧兽医》 2012年第2期16-17,共2页
骨髓穿刺是使用穿刺针穿刺骨髓腔抽取骨髓的一种常用的医疗诊断技术,通过对骨髓的检查可对细胞学、细菌和寄生虫等疾病进行诊断或者提供诊断的线索及观察一些疾病的治疗效果[1]。但在实验动物方面,尤其是小型猪的骨髓穿刺主要是为了获... 骨髓穿刺是使用穿刺针穿刺骨髓腔抽取骨髓的一种常用的医疗诊断技术,通过对骨髓的检查可对细胞学、细菌和寄生虫等疾病进行诊断或者提供诊断的线索及观察一些疾病的治疗效果[1]。但在实验动物方面,尤其是小型猪的骨髓穿刺主要是为了获得骨髓来分离骨髓干细胞供科学研究用。 展开更多
关键词 穿刺针 小耳猪 骨髓干细胞 滇南 诊断技术 治疗效果 实验动物 科学研究
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尼西鸡遗传多样性微卫星标记分析 被引量:23
16
作者 叶朗惠 霍金龙 +5 位作者 苗永旺 朱胜全 陈涛 刘丽仙 潘伟荣 毕保良 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期68-74,共7页
尼西鸡抗病力强,产蛋性能高,适应高海拔及寒冷的气候条件,是具有独特群体遗传特性的高原地方鸡种。为了对其有效保护和合理利用提供遗传背景资料,筛选了家鸡基因组24条染色体上的33个微卫星标记,对随机选取的50个尼西鸡个体进行多态性检... 尼西鸡抗病力强,产蛋性能高,适应高海拔及寒冷的气候条件,是具有独特群体遗传特性的高原地方鸡种。为了对其有效保护和合理利用提供遗传背景资料,筛选了家鸡基因组24条染色体上的33个微卫星标记,对随机选取的50个尼西鸡个体进行多态性检测,共检测到122个等位基因,每个座位平均等位基因数为3·7个。该群体平均多态信息含量和平均杂合度分别为0·5514和0·6350,大染色体较小染色体的微卫星多态性程度高。表明尼西鸡属多态性较丰富的群体。 展开更多
关键词 尼西鸡 微卫星标记 遗传多样性 多态信息含量 杂合度
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黄芪多糖对奶牛乳房炎主要致病菌的体外抑菌作用 被引量:23
17
作者 杨玉艾 杨林富 +3 位作者 杨亮宇 初晓辉 毕保良 孙永科 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第6期47-49,共3页
采用水提醇治法提取黄芪多糖,并应用琼脂扩散法研究了黄芪多糖对几种奶牛乳房炎主要致病菌的抑制效果。结果表明,10 mg/mL的黄芪多糖对3种细菌都有一定的抑制效果,其中对大肠埃希菌的抑制作用最强,抑菌圈达11.05 mm±0.31 mm,对链... 采用水提醇治法提取黄芪多糖,并应用琼脂扩散法研究了黄芪多糖对几种奶牛乳房炎主要致病菌的抑制效果。结果表明,10 mg/mL的黄芪多糖对3种细菌都有一定的抑制效果,其中对大肠埃希菌的抑制作用最强,抑菌圈达11.05 mm±0.31 mm,对链球菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈分别为8.50 mm±0.71 mm和9.32 mm±0.21 mm。3种细菌的最小抑菌浓度不同,对大肠埃希菌的最小抑菌浓度为6.6 mg/mL,而对金黄色葡萄球菌和链球菌则为10.0 mg/mL。 展开更多
关键词 黄芪多糖 奶牛 乳房炎 致病菌 抑菌
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云南省罗氏沼虾养殖建议
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作者 毕保良 毕润 +3 位作者 陈培赟 任潇潇 严晖 孔令富 《科学养鱼》 2019年第3期1-3,共3页
一、云南发展罗氏沼虾养殖情况1.云南省罗氏沼虾养殖简况云南省罗氏沼虾养殖面积、产量等没有详细文献记录。根据部分文献记载,云南试养罗氏沼虾最早于1996年,当时昆明市宜良县水产发展服务中心在昆明市水利局水产处及水产技术推广站等... 一、云南发展罗氏沼虾养殖情况1.云南省罗氏沼虾养殖简况云南省罗氏沼虾养殖面积、产量等没有详细文献记录。根据部分文献记载,云南试养罗氏沼虾最早于1996年,当时昆明市宜良县水产发展服务中心在昆明市水利局水产处及水产技术推广站等部门的支持下,于1996年5月27日从广西水产研究所引进罗氏沼虾苗7万尾,投放于南羊镇1.6亩试验塘内混养. 展开更多
关键词 罗氏沼虾养殖 罗氏沼虾苗 云南省
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从鸡血中快速提取高质量基因组DNA方法的研究 被引量:30
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作者 苗永旺 霍金龙 +5 位作者 李莲军 刘丽仙 刘建平 潘伟荣 叶朗惠 毕保良 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2005年第12期10-12,共3页
介绍了一种经改进建立的从鸡血中快速提取高纯度基因组DNA的方法.该方法提取DNA耗时较短,只需2.5~3 h即可拿到DNA样品.提取的DNA样品经紫外分光光度计检测,DNA样品的A260/A280达1.782±0.009 3;经琼脂糖凝胶电泳检测,DNA样品的带... 介绍了一种经改进建立的从鸡血中快速提取高纯度基因组DNA的方法.该方法提取DNA耗时较短,只需2.5~3 h即可拿到DNA样品.提取的DNA样品经紫外分光光度计检测,DNA样品的A260/A280达1.782±0.009 3;经琼脂糖凝胶电泳检测,DNA样品的带型清晰、整齐,无拖尾现象;微卫星PCR扩增效果理想.结果表明,该方法所提DNA纯度较高,质量好,分子片段完整,完全能满足分子生物学实验的要求. 展开更多
关键词 版纳斗鸡 DNA 琼脂糖凝胶电泳 微卫星PCR
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猪瘟病毒E0和E2蛋白融合表达的重组腺病毒构建及免疫保护性研究 被引量:10
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作者 杨玉艾 初晓辉 +4 位作者 毕保良 杨亮宇 吴翱 邱春富 孙永科 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期419-423,共5页
为评价重组腺病毒融合表达猪瘟病毒(CSFV)E0和E2蛋白的免疫保护效果,本研究以CSFV基因组为模板,应用RT-PCR扩增E0和E2蛋白的编码基因,通过pET-32a载体将E0和E2基因串联,形成pET-E0-E2重组质粒。用KpnⅠ和NotⅠ双酶切pET-E0-E2得到E0-E2... 为评价重组腺病毒融合表达猪瘟病毒(CSFV)E0和E2蛋白的免疫保护效果,本研究以CSFV基因组为模板,应用RT-PCR扩增E0和E2蛋白的编码基因,通过pET-32a载体将E0和E2基因串联,形成pET-E0-E2重组质粒。用KpnⅠ和NotⅠ双酶切pET-E0-E2得到E0-E2融合基因,定向亚克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,采用"两步转化法"在细菌内同源重组,构建携带E0-E2基因的重组腺病毒转移载体质粒pAdEasy-E0-E2,经PacⅠ酶切线性化后转染人胚胎肾细胞(HEK293),成功包装出重组腺病毒(rAd-E0-E2),PCR和western blot检测表明,E0-E2基因已重组于腺病毒基因组中并获得表达。将rAd-E0-E2接种于小鼠和猪,并通过ELISA进行抗体检测。另外,将rAd-E0-E2经肌肉2次(间隔7d)免疫接种6周龄~7周龄猪,3周后用103TCID50CSFV石门株攻毒。结果表明,rAd-E0-E2免疫组6/7头存活,各组织器官带毒时间不超过10d,而非重组腺病毒rAd-CMV免疫组和空白对照组全部死亡,各组织器官均能分离到CSFV。结果提示,rAd-E0-E2能使免疫猪抵抗CSFV强毒攻击,为进一步研制猪瘟基因工程疫苗提供了实验依据。 展开更多
关键词 重组腺病毒 猪瘟病毒 E0-E2基因 保护效果
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