Wnt5a基因对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响

目的探讨Wnt5a基因对人肝癌细胞MHCC97L生物学行为的影响。方法脂质体法介导Wnt5a表达及阴性对照质粒转染MHCC97L细胞;RT-PCR及Western blot法检测质粒DNA片段插入和Wnt5a蛋白的表达;借助生长曲线、平板克隆形成、细胞周期和划痕试验对转染细胞的生物学活性进行检测。结果 pcDNA3.1组细胞生长速度明显快于Wnt5a表达组细胞;pcDNA3.1组细胞克隆形成率明显高于Wnt5a表达组(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示Wnt5a表达能抑制细胞由G1期→S期的进程;划痕试验显示,Wnt5a表达组较阴性对照组细胞迁移速度明显减慢,当加入Wnt5a抗体阻遏信号通路时,细胞迁移速度加快。结论 Wnt5a可抑制人肝癌细胞MHCC97L的增殖和迁移能力,在肿瘤生长过程中发挥肿瘤抑制基因样作用。

支气管上皮-肌上皮癌1例报道

上皮-肌上皮癌（epithelial-myoepithelial carcinoma,EMC）是一种低度恶性的涎腺肿瘤,好发于中老年女性,80%发生在腮腺,小涎腺少见[1]。发生于支气管的上皮-肌上皮癌是支气管恶性肿瘤中罕见的类型,组织学特征类似于涎腺的上皮-肌上皮癌。肿瘤由伴有梭形细胞、透明细胞或形态类似浆细胞样的肌上皮细胞和不等量的导管上皮组成。

IL-33/ST2激活人肺成纤维细胞表达纤维黏连蛋白1和1型胶原蛋白参与哮喘气道重塑

目的检测IL-33刺激下人肺成纤维细胞(HLF-1)纤维黏连蛋白1(FN1)及1型胶原蛋白(Col1)的表达。方法选取哮喘组28例,健康对照组25例,ELISA检测血清IL-33的表达;同时对其中8例哮喘患者及8例健康对照者行电子气管镜下气道黏膜活检,HE染色观察哮喘患者气道重塑,免疫组织化学染色观察IL-33在气道黏膜的分布;培养HLF-1人肺成纤维细胞,分别给予不同浓度IL-33细胞因子刺激,通过实时定量PCR和Western blot法分别检测人肺成纤维细胞FN1和Col1的mRNA、蛋白表达。结果 ELISA检测结果显示哮喘病人组血清IL-33表达水平明显高于健康对照组(P<0.01);HE染色显示哮喘患者基底膜明显增厚且哮喘患者基底膜厚度与血清IL-33成正相关性(r=0.829,P<0.05);免疫组化结果显示IL-33主要来自受损的气道上皮细胞;不同浓度IL-33细胞因子刺激下的HLF-1人肺成纤维细胞FN1、Col1的表达呈浓度依赖性增高(P<0.05),丙酸氟替卡松及阻断IL-33受体ST2可以部分抑制FN1和Col1的表达(P<0.05)。结论 IL-33/ST2可能通过激活人肺成纤维细胞过度表达FN1和Col1参与哮喘气道重塑。

Wnt-5a基因在胃癌中的表达及意义

目的:探讨Wnt-5a基因在胃癌发生发展过程中的表达及意义.方法:采用实时定量RT-PCR方法对10例胃癌和癌旁组织Wnt-5amRNA进行检测;免疫组织化学SP法检测84例胃癌、癌旁组织及20例正常胃黏膜Wnt-5a和β-catenin蛋白的表达.结果:胃癌和癌旁组织中Wnt-5amRNA表达的相对含量分别为5.919±1.869和1.281±0.744(P<0.05);Wnt-5a蛋白在胃癌和癌旁组织的表达阳性率分别为40.54%(34/84)和14.29%(12/84),差异具有统计学意义(P<0.01),肿瘤中Wnt-5a上调表达相关于高的TNM分期和淋巴结转移(P<0.01).β-catenin在胃癌及癌旁组织中异常表达率分别为70.23%(59/84)、38.1%(32/84),两者差异表达具有统计学意义(P<0.01),癌组织中β-catenin的异常表达相关于肿瘤的TNM分期和淋巴结转移(P<0.05).胃癌中Wnt-5a和β-catenin蛋白表达呈负相关关系(P<0.05).结论:Wnt-5a在胃癌中可能发挥癌基因样作用,其异常活化可能部分参与了胃癌发生的始动过程,并可能相关于肿瘤差的预后.Wnt-5a与β-catenin在胃癌发生过程可能经由不同的信号途径在胃癌进展中发挥作用.

肝细胞癌中Wnt-5a、Ror2蛋白的表达及临床意义

目的探讨肝细胞癌(HCC)中Wnt-5a、Ror2蛋白表达的关系及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测Wnt-5a及Ror2在62例HCC癌与癌旁组织中的表达。结果对比于癌旁组织,Wnt-5a在85.49%的HCC癌组织内表达明显减低或缺失(P<0.001);Ror2在80.65%的HCC癌组织内表达明显减低或缺失(P<0.001),两者表达呈正相关性(r=0.462,P=0.04);并且均相关于高的肿瘤分期(P<0.05)、高的AFP水平(P<0.05)以及高的Ki-67指数(P<0.05)。结论 Wnt-5a和Ror2在HCC中可能发挥抑癌基因样作用,其减低或缺失表达可能与HCC的发生、发展有关。

乳头状肾细胞癌Ⅱ型下腔静脉栓塞并心脏转移1例

患者男性,40岁,因下腹痛？腹胀伴肢体水肿入院。影像学检查：超声示心房内实性占位,下腔静脉栓塞综合症,右肾增大并有异常信号。CT平扫见右肾增大,下腔静脉自右肾门水平至右心房段明显扩张,下腔静脉血栓形成并布-加综合征;增强扫描显示,右肾不均匀强化,局部有囊性密度病灶,右心房及下腔静脉内见不均匀强化的癌栓（图1）。

涎腺嗜酸细胞癌合并胸腺瘤1例报道

嗜酸细胞癌又称恶性嗜酸细胞腺瘤、大嗜酸粒细胞癌等,以细胞的异型性、核分裂活性与浸润性生长为特点,可以发生在人体许多部位（如乳腺、甲状腺、胰腺、肺和鼻腔等）[1],临床上极少见,占所有涎腺上皮性恶性肿瘤的0.5%和所有涎腺上皮性肿瘤的0.18%[2]。

小胶质细胞在兔减压病脊髓损伤中的作用

目的探讨小胶质细胞的活化在减压病脊髓损伤中的作用。方法成年健康雄性新西兰兔21只,按简单随机抽样法分为正常对照组、减压病(DCS)组、安全减压组,每组7只。DCS组:5 min空气加压至0.8 MPa(绝对压),停留60 min,5 min匀速减至常压;安全减压组,参考我国海军空气潜水减压表减至常压。借助光镜观察胸腰段脊髓的病理形态学改变,免疫组化方法观察钙离子接头蛋白-1(IBA1)蛋白标记小胶质细胞。结果 DCS组脊髓白质内空泡形成,IBA1结果显示阳性细胞数量增加,突起粗而短且分支变少,胞体肥大且内含粗颗粒状深棕色物质。与对照组和安全减压组组间差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论小胶质细胞在减压病脊髓损伤的病理生理过程中发挥重要作用,在DCS的早期即由静息状态快速向活化状态转变,参与减压病致脊髓损伤的过程。

缺失突变型HBx蛋白介导PDK2在肝细胞肝癌中的差异表达及机制

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)中自然缺失突变型乙型肝炎病毒X(HBx)蛋白介导的丙酮酸脱氢酶激酶2(PDK2)的差异表达情况以及可能参与调控长链非编码RNA(lncRNA)的机制。方法将Huh7细胞随机分为空载体pcDNA3.1组和HBx-128w组,分别转染pcDNA3.1和pc DNA3.1-HBx-128w。采用Western blotting法检测HBx蛋白的表达。使用lncRNA芯片对两组稳转细胞进行检测,明确pc DNA3.1-HBx-128w转染的Huh7细胞的m RNA表达谱和lncRNA表达谱,筛选相关差异表达基因,利用RT-qPCR方法在稳转细胞中进行验证。利用生物信息学预测可能参与调控的lncRNA,并利用RT-q PCR方法在稳转细胞中进行验证。结果PDK2在HBx-128w组Huh7细胞中呈上调表达,Fold Change为3.219。HBx-128w组Huh7细胞中PDK2的浓度比pcDNA3.1组升高(P<0.05),两组间差异倍数为3.591。HBx-128w组中的lncRNA ENST0000511361表达量较pc DNA3.1组升高(P<0.05),两组间差异倍数为3.742。结论自然缺失突变型HBx-128w转染的Huh7细胞中,PDK2呈上调表达;LncRNA ENST0000511361可能参与HCC发展过程中PDK2表达的调控。

野生型和自然缺失突变型HBx蛋白对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探讨野生型和自然缺失突变型乙型肝炎病毒X(HBx)蛋白对肝癌细胞生物学行为的影响。方法取人肝癌细胞系SMMC-7721,常规培养、传代。取对数生长期、生长状态良好的SMMC-7721细胞,随机分为空载体组、HBx-FJ组、HBx-128w组,分别转染pcDNA3.1、pcDNA3.1-HBx-FJ和pcDNA3.1-HBx-128w。Western blotting法检测HBx蛋白表达。采用MTT法检测细胞增殖活性,平板克隆实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期变化,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,裸鼠成瘤实验检测体外成瘤能力。结果HBx-FJ组和HBx-128w组细胞增殖活性、增殖能力、侵袭能力及体外成瘤能力均高于空载体组(P均<0.05);HBx-128w组细胞增殖活性、增殖能力、迁移能力、侵袭能力及体外成瘤能力均高于HBx-FJ组(P均<0.05);与空载体组相比,HBx-FJ组和HBx-128w组G1期细胞减少,S期细胞增多(P均<0.05)。结论野生型和自然缺失突变型HBx蛋白均具有促进肝癌细胞恶性进程的作用,但自然缺失突变型HBx-128w较野生型HBx具有更强的致癌作用。HBx可通过缺失突变影响其生物学功能,促进肝癌的进展。

β连环素表达缺失结直肠癌的临床病理学分析

目的探讨β连环素缺失结直肠癌的临床病理学表现及分子特征。方法收集2012年1月至2022年11月解放军第九六〇医院诊断为结直肠癌且β连环素丢失表达的病例标本11例,分析其临床、病理和分子改变。结果11例病例中,男性3例,女性8例;年龄43~74岁,中位年龄59岁;左半结肠6例,右半结肠5例;有淋巴结转移1例,无淋巴结转移10例;高~中分化腺癌10例,黏液腺癌1例;TNM分期T4期8例,T1期2例,Tis期1例。肿瘤细胞免疫组织化学染色均不表达β连环素。Sanger测序显示CTNNB1基因第3号外显子存在片段缺失突变,导致蛋白缺失表达。结论β连环素缺失结直肠癌是一类少见的亚群,可能与CTNNB1基因第3号外显子突变相关。

减压病兔脑和脊髓组织损伤机制及高压氧疗效

目的 探讨实验性减压病兔脑和脊髓组织损伤机制及高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）的治疗作用.方法 成年健康雄性新西兰大耳白兔28只,按数字表法随机分为正常对照组、减压病（DCS）组、安全减压组、HBO组,每组7只.DCS组,5 min空气加压至0.8 MPa（绝对压）,停留60 min,5 min匀速减至常压;HBO组按DCS组操作,出舱后立刻用加压舱行HBO治疗;安全减压组参考我国海军空气潜水减压表减至常压.动物出舱后30 min内迅速处死,取各组胸腰段脊髓和脑,借助光镜观察脊髓和脑的病理形态学改变,用原位末端脱氧核糖核酸转移酶介导DUTP标记法（TUNNEL法）观察胸腰段脊髓和脑组织凋亡情况.结果 DCS组脊髓白质内空泡形成,损伤区周围胶质细胞增生;TUNNEL标记阳性凋亡细胞数为每高倍镜视野下（28.29 ±2.56）个,较正常对照组（0.57±0.54）个、安全减压组（2.29±1.11）个、HBO组（3.71±1.1 1）个均明显增多,差异均有统计学意义（P ＜0.05）;HBO组阳性凋亡细胞数较正常对照组多,但较DCS组明显减少,差异均有统计学意义（P ＜0.05）;HBO组与安全减压组阳性细胞数差异无统计学意义（P ＞0.05）;DCS组脑组织凋亡细胞数[（1.43±0.54）个]较脊髓组织中凋亡细胞数[（28.29 ±2.56）个]明显减少,但多于正常对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 脊髓是减压病中枢神经系统损伤的主要部位;细胞凋亡是减压病脊髓损伤的原因之一;高压氧治疗能明显抑制大鼠脊髓损伤后的细胞凋亡,对减压病有良好的治疗作用.

肝细胞癌Wnt信号通路相关基因的表达及其意义

目的 观察肝细胞癌（HCC）中Wnt信号通路相关基因的表达状态,探讨HCC与该信号通路的关系.方法 应用基因芯片对5例HBV感染相关HCC癌和癌旁组织进行检测,并采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术对芯片筛选结果进行验证.结果 芯片（含126个Wnt信号途径相关基因）杂交结果显示,对比癌旁组织,癌组织内3组以上同时出现上调的基因数为7个（5.56%）,其中Fzd2基因在4组出现明显上调（19.21倍）;癌组织内3组同时出现下调的基因数为9个（7.14%）,其中PYGO2基因（14.76倍）和SHFM3基因（16.97倍）在4组出现明显下调.HCC和癌旁组织差异表达基因主要涉及Wnt信号途径中相关Frizzled信号传导、细胞周期、转录和蛋白降解等方面.实时定量RT-PCR的结果显示,对比癌旁癌组织Fzd2和DVL3分别上调为22.11倍和17.12倍,PYGO2下调14.69倍,一致于芯片杂交实验的结果,说明结果的可靠性.结论 HBV感染相关性HCC的发生发展涉及Wnt信号通路,该通路中一些关键基因的异常表达为此提供了证据.

减压病兔脑与脊髓的TNF-α和GFAP变化

目的 探讨TNF-α、GFAP基因在减压病过程中的表达变化及作用机制.方法 成年健康雄性新西兰兔21只,随机分为正常组、减压病组、安全减压组,每组7只.采用快速减压方法制备减压病模型.借助光镜、荧光实时定量RT-PCR法和免疫组化方法观察脑和脊髓的病理形态学及TNF-α,GFAP基因mRNA和蛋白的表达变化.结果 减压病组脊髓白质内空泡形成,脊髓中TNF-α、GFAP基因mRNA和蛋白表达量明显增加,与正常对照组和安全减压组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）;脑内减压病组、正常对照组和安全减压组之间TNF-α、GFAP基因mRNA和蛋白的表达量未见明显差异（P＞0.05）.结论 脊髓是减压病致中枢神经系统损伤的主要部位,减压病早期即可引起TNF-α和GFAP基因活化及相应蛋白大量表达,星形胶质细胞及促炎因子TNF-α在减压病脊髓损伤病变进程中发挥了重要作用.

肿瘤坏死因子在减压病兔脊髓组织损伤中的作用

目的观察减压病（DCS）导致兔脊髓组织损伤的病理学改变，探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）在减压病脊髓损伤中的作用。方法家兔随机分为正常对照组、DCS组、安全减压组。制备DCS模型，借助光学显微镜、荧光实时定量法和免疫组化方法观察胸腰段脊髓病理形态学改变、TNF-α mRNA和蛋白表达变化；用脱氧核苷酸末端转移酶介导的脱氧尿三磷酸缺口末端标记（TUNEL）法观察脊髓组织细胞凋亡情况。结果DCS组脊髓白质内空泡形成，损伤区周围胶质细胞增生，TNF-α mRNA和蛋白表达量较正常对照组和安全减压组均明显增加，差异有统计学意义（P〈0．01）；TUNEL标记阳性凋亡细胞数较正常对照组及安全减压组均明显增多，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论细胞凋亡是DCS致脊髓损伤的重要方式，在DCS早期TNF-α即可大量释放并可启动凋亡程序，参与DCS脊髓损伤的病变进程。

急性减压病兔脊髓病变的基因表达谱分析

目的 初步探讨急性减压病兔脊髓损伤组织基因表达谱的变化.方法 新西兰大耳白兔10只,5只按文献方法制备急性减压病模型,为急性减压病组;另5只参照空气潜水减压表减至常压,为安全减压组.2组出舱后30 min内各随机选取2只兔,麻醉后解剖,留取胸腰段脊髓,迅速置于液氧中保存.应用基因表达谱芯片对4只兔的脊髓组织进行检测,采用实时定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）方法对部分芯片筛选的差异表达基因结果进行验证.结果 芯片杂交结果显示,与安全减压组比较,急性减压病组上调2倍以上的基因9个,下调2倍以上的基因17个,差异表达基因主要涉及炎症、离子通道、细胞周期、物质转运和凋亡等方面.实时定量RT-PCR结果显示,与安全减压组比较,急性减压病组甲状旁腺激素和肿瘤细胞坏死因子分别上调平均6.18倍和6.46倍,酰基辅酶A合成酶和电压门控性离子通道基因分别下调平均2.28倍和3.16倍,与芯片杂交实验结果一致.结论 急性减压病兔脊髓病变差异表达基因主要涉及炎症、细胞周期和凋亡等方面,其意义需要进一步研究.

星型胶质细胞与小胶质细胞在家兔减压病脊髓损伤中的作用

目的 探讨星型胶质细胞与小胶质细胞的活化在家兔减压病脊髓损伤中的作用. 方法 成年健康雄性新西兰家兔21只,按随机数字表法分为对照组、安全减压组和减压病（decompression sickness,DCS）组,每组7只.实验动物置于加压舱内.安全减压组参考我国海军空气潜水减压表减至常压;DCS组5 min匀速加压至0.8 MPa（绝对压）,停留60 min后,再5 min匀速减至常压.光镜观察胸腰段脊髓的病理形态学改变;荧光实时定量法测定肿瘤坏死因子-a（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）基因mRNA表达;免疫组织化学方法测定TNF-α、GFAP和钙结合蛋白（ionized calcium binding adapter molecule 1,IBA1）的表达.结果 DCS组脊髓白质内空泡形成,脊髓中TNF-α基因mRNA相对表达量（6.28＆#177;1.73）与对照组（1.00＆#177;o.14）和安全减压组（1.34＆#177;0.42）相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）;GFAP基因mRNA相对表达量（7.39＆#177;2.04）与对照组（1.02＆#177;0.26）和安全减压组（1.63＆#177;0.90）相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）.TNF-α蛋白表达量（24.14＆#177;2.61）较对照组（6.71＆#177;1.25）和安全减压组（8.28＆#177;1.11）明显增加,差异均有统计学意义（P＜0.01）;GFAP蛋白表达量（18.20＆#177;4.38）较对照组（4.30＆#177;2.70）和安全减压组（6.20＆#177;2.92）明显增加,差异均有统计学意义（P＜0.01）;IBA1蛋白表达量（21.53＆#177;1.37）较对照组（5.94＆#177;0.36）和安全减压组（6.69＆#177;0.81）明显增加,差异均有统计学意义（P＜0.01）. 结论 星形胶质细胞和小胶质细胞在减压病脊髓损伤的病理生理过程中发挥重要作用,在DCS的早期即可被激活,释放大量的TNF-α,引起过度炎症反应,导致脊髓损伤.