经典名方中山药的本草考证

山药原名"藷藇"最早见于《山海经·北山经》,古称薯蓣,《神农本草经》中列为上品。考证历代本草,山药基原、药材性状均与当今薯蓣科植物薯蓣Dioscorea opposita Thunb.一致,为历代主流品种,建议经典名方开发时选用。其道地产区集中到河南怀庆府已历史悠久,如今河南仍为山药主产区。山药炮制方法多样,总体来看以炒制为主,主要为清炒和麸炒,不同经典名方炒制规格需具体考证。该研究通过查阅历代本草、医籍、方书等古代资料,结合现代文献资料对山药药材的名称、基原、产地、采收加工、炮制进行系统梳理与考证,为包含该类药材的经典名方的开发提供依据。

辽宁产三种苍术苍术素及叶绿素的含量比较分析

目的:比较相同栽培产地不同品种及生长时期苍术之间苍术素与叶绿素含量的差异,探讨苍术素、叶绿素含量与质量的相关性。方法:采用HPLC法对同一产地3种不同品种的苍术药材进行苍术素的含量测定,叶绿素仪测定同一生长时期苍术叶片的叶绿素含量,结合形态描述,综合比较苍术质量。结果:同一生长时期3种苍术中苍术素含量存在很大差异,茅苍术含量最高,北苍术次之,关苍术最低;茅苍术不同生长时期,苍术素的含量高低依次为苗期(0.35%),果期(0.23%),花期(0.07%)。同一生长时期3种苍术叶绿素含量明显不同,趋势与苍术素含量测定结果一致。结论:结合叶绿素含量、苍术素含量综合比较,清原县栽培的英山茅苍术质量最高,可考虑在东北栽培驯化,创造更高的经济价值。

Box-Behnken响应面法优化芍药甘草汤的提取工艺

目的优选与物质基准标准指标性成分含量、出膏率和指纹图谱相似度均接近的芍药甘草汤提取工艺。方法以芍药苷、甘草苷、甘草酸含量和出膏率加权得到的综合评分为指标,在单因素试验基础上,通过Box-Behnken响应面法和Design-Expert 10软件统计分析,考察加水倍量、提取时间、提取次数3个因素对芍药甘草汤的影响,优选提取工艺。结果最佳提取工艺为5倍加水量回流提取40 min,所得芍药苷、甘草苷和甘草酸含量分别为0.61%、0.61%、0.64%,出膏率均值为17.68%,综合评分为0.508,与物质基准相接近。结论应用响应面法优化法得到的芍药甘草汤提取工艺稳定可靠,与物质基准质量一致,可为后续颗粒剂的研究开发奠定基础。

薄荷醇、苏合香挥发油对川芎嗪纳米粒跨血脑屏障模型转运行为的影响

目的以bEnd. 3细胞单层模拟血脑屏障,研究薄荷醇、苏合香挥发油对血脑屏障的生物相容性及二者对川芎嗪纳米粒跨细胞单层转运行为的影响。方法以细胞存活率为指标,采用MTT法研究薄荷醇、苏合香挥发油对血脑屏障细胞的生物相容性;采用乳化—溶剂挥发法制备川芎嗪纳米粒并进行表征;采用bEnd. 3细胞单层模型研究配伍薄荷醇、苏合香挥发油对川芎嗪纳米粒跨膜转运的影响,并对转运过程中细胞单层跨膜电阻值(transepithelial electrical resistance,TEER)进行检测。结果生物相容性实验结果显示薄荷醇在25、50、75μg/mL浓度下不具有细胞毒性,苏合香挥发油在25、50μg/mL浓度下不具有细胞毒性,相对于薄荷醇,苏合香挥发油具有更高的细胞毒性。实验成功制备了川芎嗪纳米粒,平均粒径为(152.9±2.6) nm,稳定性良好。跨膜转运实验结果显示,川芎嗪纳米粒的跨细胞单层转运表观渗透系数(Papp)值为(15.9199±0.3677)×10^(-6)cm/s,配伍薄荷醇(50μg/mL)、苏合香挥发油(50μg/mL)后川芎嗪纳米粒的转运Papp值为(15.5661±0.3242)×10^(-6)cm/s、(15.1416±0.2451)×10^(-6)cm/s,三者无差异。TEER值结果显示在给予50μg/mL薄荷醇、苏合香油后,细胞单层TEER值的变化趋势与单独给予川芎嗪纳米粒组相近,整体均呈现下降趋势。结论薄荷醇相对于苏合香挥发油具有更好的细胞相容性。在保障生物相容性的配伍浓度范围内,配伍薄荷醇、苏合香挥发油对川芎嗪纳米粒的跨细胞单层转运无影响。

Box-Behnken响应面法结合基准关联度和AHP-EWM优化经典名方易黄汤的提取工艺

基于质量源于设计(quality by design,QbD)理念,应用Box-Behnken设计-响应面法结合基准关联度(standard relation,SR)和层次分析法(analytic hierarchy process,AHP)-熵权法(entropy weight method,EWM),对经典名方易黄汤(Yihuang Decoction)的提取工艺进行优化。以易黄汤中指标性成分京尼平苷酸、盐酸黄柏碱、盐酸小檗碱的含量及出膏率和指纹图谱相似度作为提取工艺的关键质量属性(critical quality attributes,CQAs);以提取时间、加水量、提取次数作为关键工艺参数(critical process parameters,CPPs)。采用单因素试验确定各因素水平后,按Box-Behnken原理设计响应面试验,对试验结果进行分析,计算不同提取参数的各种评价指标下各样品与基准样品的基准关联度,采用AHP-EWM确定5项评价指标的权重系数后进行综合评分,建立CPPs与综合评分表征的CQAs之间的函数模型,预测优选最佳提取工艺参数。在最终确定的综合权重系数中,出膏率指标占比43.1%,盐酸小檗碱含量指标占比35.1%,盐酸黄柏碱含量指标占比6.3%,京尼平苷酸含量指标占比15.5%,结合基准关联度进行综合评分分析后,建立的二阶多项式模型具有统计学意义(P<0.01且失拟项不显著)。预测确定易黄汤的最佳提取工艺条件为全方饮片加8倍量水,提取1.5 h,提取1次。验证试验的综合评分均值为85.77,RSD为0.99%,且符合易黄汤基准样品质控标准的要求。结果说明优化后的易黄汤提取工艺稳定可靠,所得水提液与基准样品质量属性接近,可为后续颗粒剂的研究开发奠定基础,Box-Behnken响应面法结合基准关联度和AHP-EWM综合赋权的设计方法能够为其他经典名方的现代提取工艺研究提供参考。

半夏泻心汤的基准物质量值传递研究

目的:研究半夏泻心汤基准物质的量值传递关系,建立半夏泻心汤基准物质的质量标准。方法:通过制备20批基准物质,建立指标性成分含量测定方法及特征图谱,进行特征峰的归属,评价其相似度并测定出膏率。结果:20批基准物质的特征图谱相似度均>0.98。确定20批基准物质的出膏率范围为14.45%~17.67%;指标性成分黄芩苷含量为3.96%~7.35%,转移率为35.29%~65.55%;小檗碱含量为0.15%~0.28%,转移率为8.77%~16.29%;甘草酸含量为1.00%~1.85%,转移率为35.89%~66.65%。结论:半夏泻心汤的出膏率、指标性成分含量和特征图谱在饮片-基准物质中均能稳定传递。同时建立了半夏泻心汤基准物质的质量标准。

经典名方易黄汤物质基准的量值传递分析

目的:以指纹图谱、指标成分含量及出膏率为评价指标探索饮片-物质基准的量值传递关系,考察15批易黄汤物质基准的关键质量属性,初步建立其物质基准的质量标准。方法:制备15批易黄汤物质基准冻干粉样品,采用高效液相色谱法(HPLC)对15批饮片和物质基准进行指纹图谱、指标成分含量测定,流动相选择乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0~6 min,97%B;6~12 min,97%~92%B;12~25 min,92%~90%B;25~35 min,90%~89%B;35~50 min,89%~82%B;50~75 min,82%~72%B;75~85 min,72%~35%B),检测波长230 nm,结合出膏率明确特征峰的归属及其与对照图谱的相似度范围,京尼平苷酸、盐酸小檗碱的含量范围及转移率范围,物质基准的出膏率范围及变化幅度等。结果:建立的HPLC指纹图谱检测方法精密度、重复性和稳定性均良好,能同时适用于饮片、物质基准指纹图谱的检测。15批易黄汤物质基准指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均>0.99;共归属15个特征峰,经对照品比对后指认了8个特征峰信息,其中6个来自盐黄柏,1个来自酒车前子,1个来自炒山药。15批易黄汤物质基准中京尼平苷酸、盐酸小檗碱质量分数范围分别为0.10%~0.16%,0.63%~1.05%,转移率范围分别为20.91%~32.65%,19.60%~29.59%;物质基准出膏率范围8.45%~9.92%。结论:采用指纹图谱、出膏率及指标成分含量测定相结合的模式,对经典名方易黄汤物质基准的量值传递过程进行分析,可初步拟定易黄汤物质基准的质量标准,可为该经典名方的质量控制及相关制剂开发提供依据。

经典名方半夏泻心汤水煎液的HPLC指纹图谱及黄芩、黄连量值传递研究

目的建立半夏泻心汤水煎液的HPLC指纹图谱,研究处方中黄芩、黄连药材-饮片-全方水煎液的量值传递关系。方法以《伤寒论》中记载的煎煮方法制备半夏泻心汤水煎液,建立半夏泻心汤HPLC指纹图谱,对特征峰进行归属;以转移率、出膏率、指纹图谱的相似度为指标,对处方中黄芩、黄连药材-饮片-全方水煎液的量值传递关系进行分析。结果黄芩中指标性成分黄芩苷从药材到饮片的转移率为81.08%~119.82%;饮片到全方水煎液的黄芩苷的转移率为44.55%~59.05%,黄连中指标性成分小檗碱从药材到饮片的转移为66.65%~97.51%;饮片到全方水煎液的小檗碱的转移率为7.83%~22.93%;全方的出膏率为12.99%~17.21%;15批全方指纹图谱的相似度为0.978~0.999。结论该指纹图谱所建立的质量评价方法适用于黄芩、黄连药材-饮片-全方水煎液质量控制,可为经典名方等质量评价办法的制定提出一定的参考。

通俗环毛蚓抗血栓活性蛋白成分的快速富集及活性考察

目的:以地龙品种中的通俗环毛蚓为研究对象,对其蛋白总提物进行纯化富集以获得抗血栓活性蛋白成分(PvQ),对PvQ进行抗血栓活性研究,以期为地龙的抗血栓物质基础研究提供参考。方法:采用AKTA-Pure型蛋白纯化系统,以体外活性为导向,富集通俗环毛蚓PvQ;采用纤维蛋白平板法、纤维蛋白原-凝血酶时间法(Fibg-TT法)对PvQ的纤溶及抗凝活性进行测定;利用体外血栓溶解试验评价PvQ对体外血栓的溶解能力,同时,考察了不同温度及pH对PvQ活性的影响。结果:成功富集得到通俗环毛蚓PvQ,活性测定表明其具有显著的纤溶及抗凝活性。体外血栓试验结果显示,37℃孵育5 h后PvQ可水解超过80%的血栓块。此外,温度和pH对于PvQ活性影响显著,在≥60℃或酸性条件(pH<7)下PvQ活性显著降低或失活,而在≤50℃和碱性条件下PvQ活性则不受影响或受较少影响。结论:建立了可行的通俗环毛蚓PvQ制备方法,PvQ可同时作用于纤维蛋白和纤维蛋白原,从而发挥双重纤溶作用,表现出良好的纤溶及抗凝活性,为其用于治疗血栓性疾病提供了科学阐释,并可为地龙抗血栓蛋白类产品的开发提供参考。

基于药辅合一的葛根素川芎油亚微乳的研究

依据葛根和川芎的配伍作用研究药辅合一的亚微乳制剂的制备工艺,并对其物理药剂学性质进行评价。固定川芎油为油相,以微乳区面积为指标,采用滴水法绘制伪三元相图,筛选合适的乳化剂及助乳化剂制备川芎油亚微乳;以载油量为指标,优选最大载油的处方;再以葛根素替代部分表面活性剂,构建药辅合一的亚微乳制剂。测定所得亚微乳剂的粒径、电位、离心稳定性及放置稳定性,同时采用透析袋法对所得亚微乳制剂的释药行为进行考察,从而综合评价制得乳剂的质量。通过此法成功制备川芎油亚微乳剂,确定以聚氧乙烯蓖麻油-40为乳化剂,不添加助乳化剂;最大载油处方为川芎油∶聚氧乙烯蓖麻油-40∶水3∶7∶90;并成功进行葛根素对亚微乳制剂中乳化剂的替换,最大替换率为10%,最终确定的载药处方为葛根素∶川芎油∶聚氧乙烯蓖麻油-40∶水7∶30∶63∶900。对所得亚微乳剂的质量进行评价,结果显示所得乳滴的平均粒径为333.9 nm,PDI为0.26,Zeta电位为-10.12 mV,且离心稳定性良好。所得亚微乳放置50 d未见分层及析出等现象,稳定性良好。对其体外释药行为进行评价,亚微乳剂可完全释药。通过此法制得的葛根素-川芎油亚微乳制剂质量稳定,该乳剂体系可在一定程度上增大葛根素的溶解度,并体现一定的缓释作用。