美洲大蠊提取物CⅡ-3调控p16^(INK4a)诱导SKOV3细胞衰老

目的探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3调控p16^(INK4a)蛋白诱导卵巢癌细胞SKOV3衰老的作用。方法通过CCK-8法测定不同浓度和时间美洲大蠊提取物CⅡ-3对SKOV3细胞增殖的作用;运用细胞集落形成实验测定美洲大蠊提取物CⅡ-3对SKOV3细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞周期的变化;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞衰老变化;Western Blotting检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达的变化。结果美洲大蠊提取物CⅡ-3可有效抑制SKOV3细胞增殖,最佳作用浓度为80μg/mL,作用时间为48 h;CⅡ-3作用后,SKOV3细胞集落形成能力下降;阻滞于G_(0)/G_(1)期细胞比例增高,S期细胞比例减少;SA-β-Gal阳性细胞百分比增加;衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达上调。结论美洲大蠊提取物CⅡ-3通过调控衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达诱导SKOV3细胞衰老。

美洲大蠊提取物CⅡ-3调控p53蛋白抑制K562细胞增殖

目的:探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3对人白血病细胞K562增殖的影响。方法:以不同浓度的美洲大蠊提取物CⅡ-3作用于K562细胞,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响,集落形成实验检测其对细胞增殖能力的影响,流式细胞术检测K562细胞的细胞周期,蛋白质印迹法检测细胞中磷酸化p53蛋白的表达。结果:美洲大蠊提取物CⅡ-3可抑制K562细胞增殖,其最佳作用浓度为80μg/mL,作用时间72 h;CⅡ-3能降低K562细胞集落形成率;使阻滞在G0/G1期的K562细胞比例增高,S期的细胞比例减少;促进磷酸化p53蛋白表达上调。结论:CⅡ-3通过调控p53蛋白抑制K562细胞增殖。

骨髓间充质干细胞对K562细胞衰老的作用及Raf/MEK/ERK信号通路的影响

目的探究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对慢性髓细胞性白血病K562细胞衰老的作用及Raf/MEK/ERK信号通路的影响。方法从30只6~8周SPF级、体重20~30 g的C57BL/6J雄性小鼠骨髓中分离BMSCs,采用流式细胞术检测其表面抗原CD29、CD244、CD45的表达,使用成脂、成骨分化诱导液诱导后,采用油红O、茜素红染色鉴定其分化能力。将BMSCs与K562细胞按1∶4、1∶2、1∶1、2∶1的比例分别培养24、48、72 h,选择K562细胞增殖率最低的共培养时间及细胞比例作为BMSCs组,常规培养的K562细胞作为对照组进行后续实验。采用SA-β-Gal染色检测两组细胞衰老情况,Western blot检测两组p16^(INK4a)、p-Raf、p-MEK、p-ERK蛋白的表达情况。结果BMSCs表面标志物CD29、CD44、CD45的阳性表达率分别为89.18%、87.65%、1.16%,其在体外成功分化为脂肪细胞和骨细胞。BMSCs∶K562细胞比例为1∶2、1∶1、2∶1时,共培养各时间点的K562细胞增殖率均低于同一时间点的对照组,比例为2∶1时各时间点的K562细胞增殖率均低于同一时间点的1∶2、1∶1(P<0.05)。BMSCs∶K562细胞比例为2∶1时,共培养48 h后K562细胞增殖率均低于共培养24、72 h后(P<0.05)。BMSCs组衰老细胞阳性率及p16^(INK4a)蛋白表达水平均高于对照组,p-Raf、p-MEK、p-ERK蛋白表达水平均低于对照组(P<0.01)。结论BMSCs可诱导K562细胞衰老,其作用机制可能与Raf/MEK/ERK信号通路有关。

美洲大蠊提取物CⅡ-3调控SIRT1/mTOR信号通路诱导白血病K562细胞衰老

该研究旨在探讨沉默信息调节因子2相关酶1(slient mating-type information regulation 2 homolog 1,SIRT1)/结节性硬化症复合物Ⅱ(tuberous sclerosis complex 2,TSC2)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路在美洲大蠊提取物CⅡ-3诱导人白血病细胞K562细胞衰老中的作用。体外培养K562细胞,设对照组(0μg·mL^(-1))及美洲大蠊提取物CⅡ-3不同剂量组(5、10、20、40、80、160μg·mL^(-1)),细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测CⅡ-3对K562细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测CⅡ-3对K562细胞周期分布的影响;β-半乳糖苷酶染色试剂盒(senescence-associatedβ-galactosidase stain kit,SA-β-gal)检测衰老细胞染色阳性百分率;流式细胞术检测线粒体膜电位的改变;荧光定量PCR检测端粒酶逆转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)的表达;荧光定量PCR和免疫印迹法(Western blot)检测SIRT1、TSC2和mTOR mRNA及蛋白的表达。结果显示,经美洲大蠊提取物CⅡ-3诱导作用后,CⅡ-3组细胞增殖抑制率高于对照组,当CⅡ-3质量浓度为80μg·mL^(-1),作用时间为72 h时,CⅡ-3对K562细胞的增殖抑制率最高,故选为实验标准进行后续研究。与对照组相比,CⅡ-3组阻滞在G0/G1的细胞比例升高,S期细胞比例降低;细胞SA-β-Gal衰老染色阳性率升高;线粒体膜电位降低;端粒酶TERT mRNA表达下调;SIRT1和TSC2 mRNA的表达下调,mTOR mRNA的表达上调;SIRT1和p-TSC2蛋白的表达下调,p-mTOR蛋白的表达上调。以上研究结果表明,美洲大蠊提取物CⅡ-3可通过SIRT1/mTOR信号通路诱导K562细胞衰老。