水稻CaM和Ca^(2+)-ATPase基因的原位杂交物理定位

ＣａＭ为重要的调控蛋白，Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ则是重要的ＣａＭ结合蛋白，它和ＣａＭ一起构成信号传递通路中的重要组成部分，是功能上密切相关的两个基因。以生物素标记这两个基因的ｃＤＮＡ为探针，用原位杂交技术将它们定位到了水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）染色体上，检出率为６．１８％。ＣａＭ和Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ基因被分别定位于第５染色体长臂的末端和第５染色体短臂紧靠着丝粒处。所检出染色体的臂比及标准差分别为１．７９±０．０６和１．９１±０．０８。二者在遗传图中相距较近，而在基因组物理图中位于同一染色体上不同的染色体臂上，说明基因的遗传图和物理图之间存在差异。并对短片段，低拷贝或单基因的技术进行了讨论。

一种优化的植物组织RNA原位杂交技术

一种优化的植物组织ＲＮＡ原位杂交技术①陈绍荣毕学知吕应堂杨弘远（武汉大学生命科学学院，武汉４３００７２）ＡＯｐｔｉｍｉｚｅｄｉｎＳｉｔｕＲＮＡＨｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎＴｅｃｈｎｉｑｕｅｉｎＰｌａｎｔＴｉｓｕｅｓＣＨＥＮＳｈａｏｒｏｎｇＢＩＸｕｅｚｈ...

玉米(ZeamaysL.)cdc2和prh1基因的染色体原位杂交物理定位

首次报道了玉米两个低拷贝基因ｃｄｃ２和ｐｒｈ１生物素标记的染色体原位杂交结果。供试探针为这两个基因的ｃＤＮＡ克隆ｃｄｃ２ＺｍＡ和ＺｍＰＰ１，其长度分别为１．３ｋｂ和１．７ｋｂ。结果表明，ｃｄｃ２ＺｍＡ的信号分布在第４、８和９染色体长臂，与着丝粒的百分距离分别为５７．８７±２．６８、２８．４２±１．４５和８８．１６±３．２８，检出率为１０．０７％．３．１３％和８．３３％。ｐｒｈ１ＺｍＰＰ１的信号分布在第４、６和８染色体长臂，与着丝粒的百分距离分别为５３．６２±１．１７．６０．７７±２．９０和１７．１０±１．６１，检出率为１２．０７％．５．１７％和６．４７％。对非放射性原位杂交技术以及基因ｃｄｃ２和ｐｒｈ１的物理位置与功能间的关系作了讨论。

玉米cyclin Ⅲ基因的染色体原位杂交物理定位

本文首次报道了玉米低拷贝基因ｃｙｃｌｉｎⅢ（Ｂ－类）生物素标记的染色体原位杂交定位结果。供试探针为该基因的ｃＤＮＡ克隆，其长度仅为１６ｋｂ。结果表明，探针的信号分布在第６染色体短臂和第９染色体长臂，与着丝粒的百分距离分别为７００５±３３１和８６８６±１６４，检出率分别为８２９％和６８３％。文中对基因的物理位置与功能间的关系等作了讨论。

水稻蛋白质的双向电泳分析技术

在O′Farrell(1975)和Anderson(1978)等人的基础上对双向电泳方法进行改进得到了一种适合于分析水稻种子胚、黄化芽、绿色幼苗及成熟叶斤等不同组织蛋白质的双向电泳方法。用这一方法对15个水稻品种的种子胚、黄化芽、二叶期绿色幼苗及雌雄蕊形成期成熟叶片的蛋白质进行双向电泳分离,经考马斯亮蓝R250染色后,均获得了清晰而稳定的图谱。以200μg左右的蛋白质进行电泳,从上述组织可分辨出的蛋白质(多肽)点分别达到550、500和350个。由此建议在分子水平上研究水稻等禾谷类作物的遗传学、发育生理学以及品种资源鉴定时采用本方法。

水稻抗稻瘟病、绿叶蝉和黄萎病基因BAC克隆的物理定位

植物单拷贝短序列的染色体原位杂交的检出率一直很低．水稻ＢＡＣ克隆作为一种大容量载体的基因组克隆因其独特的优点已被应用于水稻基因组研究．用生物素标记了两个水稻ＢＡＣ克隆，这两个克隆分别含与抗稻瘟病基因Ｐｉ－５（ｔ）、抗稻绿叶蝉基因Ｇｌｈ和抗稻黄萎病基因ＲＴＳＶ在连锁图中等位的ｃＤＮＡ标记ＲＺ５６５和ＲＺ２６２，并用其进行了水稻染色体原位杂交．它们分别被定位在水稻第四染色体长臂距着丝粒百分距离４０％和短臂１００％处．由于供杂交ＢＡＣ克隆含与３种抗病基因等位的标记，因此这些克隆的位置也就是供测抗病基因的位置．杂交检出率由迄今沿用的质粒克隆探针杂交的１０％以下提高到了４６．８％和５９．２％．检出染色体的号数与遗传图确定的染色体相符，证实了用ＢＡＣ克隆进行染色体原位杂交的优越性，为广泛利用水稻ＢＡＣ克隆进行单拷贝小片段基因的定位打下了基础．

玉米（Zea mays L．）cdc2基因的染色体原位杂交物理定位

首次报道了玉米低拷贝ｃｄｃ２基因非放射性标记的探针染色体原位杂交的物理定位．供试探针为玉米，ｐ３４ｃｄｃ２的ｃＤＮＡ克隆ｃｄｃ２ＺｍＡ，片段长度仅为１．３ｋｂ．原位杂交检测结果表明，该基因位置在第４染色体及第９染色体长臂，同时在第８染色体长臂亦有杂交信号检出．３处信号检出位置距着丝粒距离和长臂长度百分比分别为５４．７９±２．５１６，８７．９４±１．５３７和２５．８６±０．８５６在第４、９和８染色体上信号检出率分别为２４．６％，１２．３％和６．６％．

水稻光敏素基因(phyA)和-1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶小亚基基因(rbcS)的染色体定位

以生物素标记的水稻单拷贝光敏素基因（ｐｈｙＡ） 和１ ，５二磷酸核酮糖羧化酶／ 加氧酶小亚基基因（ｒｂｃＳ） 的基因组克隆为探针，其大小分别为６ ．６ 和１ ．１ ｋｂ ，通过原位杂交技术将它们分别定位到水稻染色体上。ｐｈｙＡ 和ｒｂｃＳ基因的检出率分别为２９ ．７９ ％ 和２１ ．５６ ％ 。ｐｈｙＡ在第３ 染色体上有３ 个座位：长臂近着丝粒、短臂末端、长臂中部。ｒｂｃＳ分别定位于第７ 染色体长臂近着丝粒（８ ．６２ ％ ） 、第５ 染色体长臂末端、第６ 染色体长臂距着丝粒近２／３ 处。此外，对信号转导相关基因定位的意义，水稻染色体的准确识别、功能基因在染色体上的分布及位置意义等也进行了讨论。

水稻体内两种甾类性激素的研究

以三系杂交水稻的不育系（珍汕97A，丛广41A和马协A）为实验材料，以其相应的保持系（珍汕97B，丛广41B和马协B）为对照，用放射免疫分析法测定不同发育时期的叶片和幼穗中睾酮和雌二醇含量。结果表明，在供试水稻各时期叶片中睾酮和雌二醇含量均比穗中高，同时不论是叶片还是穗中，睾酮含量均高于雌二醇；但是睾酮和雌二醇在供试的3个组合的不育系和保持系内没有明显差异。