循环血中长链非编码RNA作为肝癌诊断标志物的研究进展

肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种侵袭性很强的恶性肿瘤,具有较高的致死率。对肝癌进行早期诊断,有助于改善患者的预后。然而,目前的影像学技术和肿瘤标志物检测对肝癌早期诊断的效果还不理想。越来越多的证据显示,肿瘤细胞能够向血中释放大量不被核糖核酸酶降解的RNAs,并且这些RNAs的含量足以用于定量分析。长链非编码RNA(long non-coding RNAs,lncRNAs)在肝癌发生发展过程中具有重要作用。研究显示,循环血中某些lncRNAs表达水平的异常变化与肝癌的病程进展密切相关,提示循环血中的lncRNAs具有作为肝癌诊断标志物的潜在价值。本文就循环血中lncRNAs作为肝癌诊断标志物的研究进展作一综述。

循环肿瘤细胞检测研究进展:从单纯计数到表型与功能分析

随着靶向治疗、免疫治疗等新技术的发展,肿瘤诊疗已经步入精准医疗的新时代。液体活检作为一种便捷、无创、能够动态反映肿瘤基因谱全貌的方法在肿瘤精准医疗中发挥着越来越重要的作用。血液循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)检测是最早开展的液体活检技术,在肿瘤早期诊断、预后判断、疗效评估等方面获得了广泛应用。初级阶段CTC的检测以单纯计数为主,但人们逐渐发现单纯计数无法真实反映肿瘤的负荷及变化情况。随着单细胞测序等技术的不断发展,人们对CTC的认识也不断深入,逐渐转向以分子表型和功能分析为主的高级阶段。本文结合近年来的临床实践,重点阐述CTC检测从初级阶段发展到高级阶段及其在肿瘤精准医疗中应用的研究进展。

靶向沉默PPP1R16A基因可抑制肝癌细胞的增殖

目的观察和比较在人肝癌与癌旁组织中蛋白磷酸酶1调节亚基16A(protein phosphatase 1regulatory subunit 16A,PPP1R16A)基因在基因组和转录水平的差异,探讨靶向沉默PPP1R16A基因对肝癌细胞HCC LM3增殖能力的影响。方法收集106例肝癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR技术检测PPP1R16A基因的基因组和转录水平。体外合成PPP1R16A序列特异性小干扰RNA(siRNA),使用脂质体法转染肝癌细胞株HCC LM3。实验分si-16A组(针对PPP1R16A的特异性siRNA转染的HCC LM3细胞)、NC组(非特异性siRNA转染的HCC LM3细胞)、空白组(未转染siRNA的HCC LM3细胞),用实时荧光定量PCR检测PPP1R16A基因拷贝数和转录水平,用蛋白质印迹法检测PPP1R16A蛋白表达,用CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,用流式细胞术检测细胞周期。结果人肝癌组织中PPP1R16A基因的拷贝数和转录表达水平均高于癌旁组织(P<0.01),且两者具有相关性(P=0.015)。CCK-8实验和克隆形成实验显示,转染siRNA后,si-16A组细胞增殖低于NC组和空白组(P<0.001)。流式细胞术结果显示,si-16A组较NC组和空白组细胞周期被抑制。结论肝癌组织中PPP1R16A的拷贝数发生扩增,基因转录上调。靶向沉默PPP1R16A能抑制肝癌细胞HCC LM3的增殖能力。提示PPP1R16A基因在肝癌中发挥癌基因的作用。

粒状头样蛋白2下调诱导上皮间质转化促进肿瘤细胞对吉非替尼耐药

目的探讨粒状头样蛋白2(GRHL2)在肿瘤靶向治疗药物表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)吉非替尼获得性耐药中的作用和可能机制。方法利用吉非替尼浓度逐步递增的体外诱导方法培养人结直肠癌细胞DiFi和人肺腺癌细胞HCC4006,获得吉非替尼耐药细胞株。通过RNA测序方法筛选在耐药细胞株与其亲代细胞中差异表达的基因并进行实时荧光定量PCR验证。使用pcDNA3.1-GRHL2质粒转染耐药细胞株使GRHL2过表达,用CCK-8法检测细胞对吉非替尼的敏感性。采用蛋白质印迹法检测耐药细胞株中上皮标志物E-cadherin和间质标志物Vimentin的表达变化,并通过CellMinerTM数据库分析60株人肿瘤细胞系中GRHL2表达与E-cadherin和Vimentin表达的关系。结果成功获得DiFi和HCC4006的耐药细胞株。通过RNA测序和实时荧光定量PCR验证发现GRHL2在耐药细胞株中表达下调,而在耐药细胞株中过表达GRHL2后细胞恢复了对吉非替尼的敏感性。蛋白质印迹分析表明耐药细胞株中上皮标志物E-cadherin表达下调,而间质标志物Vimentin表达上调;CellMinerTM数据库分析表明GRHL2的表达与E-cadherin/Vimentin比值高度一致。结论 GRHL2表达下调通过诱导上皮间质转化介导肿瘤细胞对吉非替尼的耐药。

PATL2基因的复合杂合突变导致以卵母细胞成熟停滞为特征的不孕

目的探索卵母细胞成熟停滞的遗传学病因。方法收集2018年在海军军医大学附属长海医院生殖医学中心一对患有原发性不孕症的姐妹的临床资料。用二代测序的方法对患者做全基因组测序,检测到PATL2基因的两个突变位点。然后对该家庭中所有成员和健康人的两个突变位点附近区域扩增并进行一代测序验证。进一步通过生物信息学分析,探索疾病的发病机制。结果这对姐妹中鉴定了PATL2基因的复合杂合突变:一个错义突变(p.V260M)和一个剪接突变(p.R75Vfs*21),这两个突变已经被报道过。这两个突变都通过引起mRNA异常剪接导致基因功能异常。结论本案例验证了PATL2基因突变与人卵母细胞成熟停滞之间的相关性,并为卵母细胞和胚胎的质量评价提供分子生物标志物。