二甲苯对妊娠小鼠及胚胎发育的毒性作用

目的探讨二甲苯对妊娠小鼠及胚胎发育的影响。方法对妊娠初期的雌性小鼠采用静式吸入染毒法进行二甲苯染毒,观察胎鼠体重变化;原子吸收分光光度测定法(atomic absorption spectroscopy,AAS)检测妊娠母鼠血清Fe2+、Mg2+含量;单细胞凝胶电泳法(single cell gel electrophoresis,SCGE)检测妊娠母鼠外周血有核细胞DNA损伤程度。结果染毒各组妊娠母鼠血清Fe2+、Mg2+含量下降(P<0.01,P<0.05),并具有统计学意义;染毒组妊娠母鼠外周血有核细胞发生DNA断裂并形成彗尾图像;染毒各组胎鼠体重较正常组相比均显著下降,且存在显著性差异(P<0.05);部分胎鼠表现为胚胎被吸收、脑膜脑膨出、椎骨发育不全等。结论二甲苯可造成妊娠母鼠血清Fe2+、Mg2+含量下降、外周血有核细胞DNA损伤并致使流产发生;二甲苯引起胎鼠体重下降,并影响生长发育。

同型半胱氨酸诱导基因HCY-2在大鼠体内的表达与分布

目的 :研究同型半胱氨酸诱导基因 (homocysteineinducedgene,HCY 2 )在大鼠体内的表达及分布 ,为进一步探讨该新基因的功能奠定形态学基础。方法 :用免疫组织化学ABC法染色 ,对成年Wistar大鼠心、肝、脾、肺、肾、大脑、小脑及脊髓等器官中HCY 2基因的表达与分布状况进行形态学观察与半定量分析。结果 :发现心脏中HCY 2阳性反应物质主要在心肌纤维、Pukinje纤维、大动脉中膜平滑肌和外膜营养血管平滑肌中 ;肾中HCY 2表达强烈 ,分布较广泛 ;脊髓前脚运动神经元和中央管室管膜细胞、肺内小支气管至肺泡管上皮及肺泡Ⅱ型细胞HCY 2均高表达 ;肝、大脑、小脑中表达很弱 ;胰腺和脾几乎没有表达。结论 :同型半胱氨酸诱导基因在大鼠体内分布广泛 ,但在不同器官中的表达强弱不甚相同 ,同一器官内HCY

同型半胱氨酸对大鼠胚胎发育的毒性作用

目的 研究同型半胱氨酸 (homocysteine ,HCY)和同型半胱氨酸诱导基因 (homocysteine inducedgene ,HCY 2 )与心脏畸形的关系。 方法 大鼠妊娠 8、9、10 3d尾静脉注射同型半胱氨酸 ,分别于第 13、15、17、19d取材 ,用组织学和免疫组织化学ABC法观察心脏畸形和基因Hcy 2在心脏上的表达并进行图像定量分析。 结果HCY对大鼠胚胎心脏有明显致畸作用 ,主要为心脏偏位 ,心脏过小 ;室间隔缺损 ,心房缺失等 ;ABC法显示基因Hcy 2在给药组胚胎心脏中表达增强。 结论 HCY对心脏发育是一种新的毒性因子 ;Hcy 2基因的过度表达与心脏畸形发生可能有一定关系。

小针刀对移植于裸鼠的人皮肤增生性瘢痕组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的影响

目的探讨小针刀对移植于裸鼠皮下人增生性瘢痕真皮组织Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的作用。方法将6例人无表皮的增生性瘢痕组织分别移植于24只裸鼠背部皮下,建立增生性瘢痕裸鼠动物模型。术后10天,分为对照组、0.1mg/ml曲安奈德组、0.2mg/ml曲安奈德组和小针刀组,每组6只,14天取材,利用免疫组织化学染色检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的变化。结果Ⅰ、Ⅲ型胶原分布于各组成纤维细胞的胞浆及组织中。图像分析结果,0.1mg/ml曲安奈德组和0.2mg/ml曲安奈德组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量(0.09±0.03,0.11±0.05;0.12±0.02,0.11±0.01)低于对照组(0.17±0.04,0.19±0.03)(P<0.05);小针刀组Ⅰ、Ⅲ型胶原含量(0.12±0.02,0.12±0.02)与曲安奈德组差异无显著性(P>0.05)。结论小针刀可降低移植于裸鼠皮下增生性瘢痕真皮组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的含量。

体外研究整合素α_5对小鼠胚泡着床的作用

目的 在人蜕膜细胞与小鼠胚泡共培养过程中 ,研究整合素α5(integrinα5)在小鼠胚泡着床中的作用 ,分析其作用机制。 方法 利用人蜕膜细胞与小鼠胚泡共培养模型 ,模拟胚泡在体内的着床过程 ,加入integrinα5抗体及其配体纤粘连蛋白 (FN)抗体 ,对胚泡的粘附、外延生长、着床率进行形态学观察和统计学分析。 结果 人子宫蜕膜经分离纯化后 ,检测活细胞比例 >92 % ,贴壁的蜕膜细胞比例 >95 % ,小鼠胚泡可在蜕膜上粘附、生长 ;integrinα5抗体及配体FN的抗体均能抑制小鼠胚泡的侵入、外延生长 ,但不抑制胚泡的孵出和粘附。 结论 建立了小鼠体外着床模型 :integrinα5在着床中促进小鼠胚泡的侵入与铺展 ,但对胚泡孵出、子宫内膜的识别与粘附不产生影响。

阿糖胞苷对肺腺癌细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的探讨阿糖胞苷(Ara-C)对人肺腺癌细胞株A549的凋亡诱导作用及其机制。方法Ara-C体外作用于A549细胞,噻唑蓝还原法(MTT法)检测Ara-C对A549细胞增殖的抑制作用;Hoechst33258荧光染色观察细胞核形态学的变化;单细胞凝胶电泳技术(comet assay)测定A549细胞DNA的损伤程度;以Western blotting进一步证明A549细胞发生凋亡。结果Ara-C对A549细胞的增殖有明显抑制作用;观察到特异性的凋亡小体;Ara-C导致A549细胞发生DNA链断裂,并呈明显剂量依赖性增强:Western blotting显示caspase 8,9,3都不同程度被激活,多聚ADP核糖聚合酶(PARP)被剪切降解。结论揭示了Ara-C明显诱导A549细胞凋亡;细胞凋亡通路不仅通过线粒体途径,还通过膜受体途径,两条通路协同作用使凋亡信号增强;提示Ara-C对A549细胞有明显的化疗作用。

水通道蛋白1在生后小鼠精囊腺与前列腺发育过程中的表达与分布

目的探讨水通道蛋白1(AQP1)在雄性小鼠出生后不同发育阶段精囊腺和前列腺的表达与分布。方法应用RT-PCR、免疫印迹和免疫组织化学染色方法,检测出生后15d、35d、70d小鼠精囊腺、前列腺AQP1 mRNA、蛋白表达水平及细胞定位。结果RT-PCR与免疫印迹结果均显示,出生后70d小鼠精囊腺、前列腺AQP1 mRNA及蛋白表达量较出生后15d显著增强(P<0.05);免疫组织化学染色显示,AQP1蛋白仅表达于出生后15d、35d小鼠精囊腺平滑肌细胞、前列腺腺泡上皮细胞基膜及间质细胞,而此时期精囊腺上皮细胞AQP1蛋白表达呈阴性;出生后70d,AQP1蛋白强烈表达于精囊腺和前列腺上皮细胞。结论AQP1 mRNA及蛋白在雄性小鼠精囊腺、前列腺的表达与分布随年龄增长而改变,此变化可能与雄性附属性腺发育相关。

针刀松解法对移植于裸鼠的人皮肤增生性瘢痕组织中成纤维细胞的影响

目的观察针刀松解法对移植于裸鼠皮下人增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclearantigen,PCNA)、Ⅰ、Ⅲ型胶原、bcl-2和bax的作用,探讨其对移植于裸鼠皮下的人增生性瘢痕组织中成纤维细胞生物学特性的影响。方法取6例人增生性瘢痕组织,削去瘢痕表皮及皮下组织,将每例增生性瘢痕组织分成重约0.2 g的3块,每只裸鼠移植1块,共移植于18只裸鼠背部皮下,建立增生性瘢痕裸鼠动物模型。移植后10 d在瘢痕组织内分3点分别注射生理盐水0.1 ml(对照组)、注射0.1 mg/ml曲安奈德0.1 ml(曲安奈德组)、将小针刀刺进瘢痕组织内,在瘢痕内向四周切割剥离至瘢痕周边(针刀松解组)进行治疗,每组6只。治疗后14 d取材,利用HE染色计数分析各组成纤维细胞的含量;免疫组织化学染色检测各组PCNA、Ⅰ、Ⅲ型胶原、bcl-2和bax表达阳性成纤维细胞数的变化。结果 HE染色结果:与对照组成纤维细胞数量(913.33±148.95)个/mm2相比,曲安奈德组(853.33±62.82)个/mm2和针刀松解组(863.33±75.28)个/mm2均降低,但是差异无显著性(P>0.05)。免疫组织化学染色结果:曲安奈德组和针刀松解组PCNA、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白阳性的成纤维细胞数量减少,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);3组bcl-2和bax阳性的成纤维细胞数量以及bcl-2/bax比率差异无显著性(P>0.05)。结论 针刀松解法具有抑制移植于裸鼠皮下人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和分泌合成的能力;针刀松解对增生性瘢痕成纤维细胞中bcl-2和bax表达及其比率没有影响。

严重急性呼吸综合征患者肾内免疫细胞的免疫组织化学观察

目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者肾内免疫细胞的免疫组织化学变化并对其作用进行分析。方法应用免疫组织化学方法显示6例SARS死亡患者和3例意外死亡者肾内免疫细胞,进行其形态观察,并采用图像分析系统进行定量分析。结果6例SARS患者肾内CD68+单核/巨噬细胞显著增多(P<0.05),CD3+T细胞、CD20+B细胞和S-100+树突状细胞与对照组无差别(P>0.05)。结论SARS患者肾内单核/巨噬细胞为主要免疫应答细胞,提示单核/巨噬细胞在SARS肾病变中起着重要作用。而T细胞、B细胞以及树突状细胞可能受到SARS冠状病毒的攻击,其功能可能遭到破坏。

大鼠胚胎心脏的发育过程及基因HCY-2在大鼠胚胎心脏内的表达

目的 研究大鼠胚胎心脏的发育过程和同型半胱氨酸诱导基因 (HCY 2 )在大鼠胚胎心脏上的表达 ,为进一步探讨该基因与心血管疾病之间的关系奠定形态学基础。方法 分别于大鼠妊娠 11～ 19d取胚胎 ,用组织学和免疫组织化学方法 ,观察大鼠胚胎心脏的发育过程和Hcy 2基因的表达并进行图像分析。结果 大鼠胚胎心脏 11d出现第一房间隔 ,13d出现第二房间隔 ,14d心房不完全分隔完成 ;12d出现室间隔肌部 ,16d心室已分隔完成。Hcy 2在大鼠胚胎心脏不同发育时期表达不同 ,11、12d表达强 ,13d表达减弱 ,14、15、16d表达又逐渐增强 ,17、18、19d表达强。结论 大鼠胚胎心脏内部分隔晚于小鼠 ;基因Hcy

量子点在小鼠腹腔巨噬细胞内的定位及对其超微结构的影响

目的观察体外实验量子点在小鼠腹腔巨噬细胞内的分布和对其超微结构的影响。方法利用量子点与小鼠腹腔巨噬细胞体外共孵育和电子显微镜技术,观察量子点在小鼠腹腔巨噬细胞内的分布及对其超微结构的影响。结果透射电镜下,量子点被小鼠腹腔巨噬细胞内吞入细胞质内,形成单位膜包被的空泡样结构。扫描电镜下,可见与量子点体外共孵育的小鼠腹腔巨噬细胞的表面有较多的片状细胞突起。结论量子点可使巨噬细胞活化,并使其表面突起增多;量子点被巨噬细胞内吞后,分布在细胞质内,并形成单位膜包被的空泡样结构。

人树突状细胞摄取量子点后的表面标志与超微结构

目的：观察人树突状细胞体外摄取量子点后,其形态、表面标志、超微结构的变化.方法：两种量子点与人未成熟树突状细胞体外共孵育,荧光显微镜下观察量子点在树突状细胞内的分布;免疫细胞化学方法检测树突状细胞表面标志;扫描电镜及透射电镜观察树突状细胞超微结构的改变.结果：与量子点共培养的树突状细胞的细胞质内充满了较强荧光颗粒,共培养前后的树突状细胞表面标志均呈阳性反应.扫描电镜下可见树突状细胞表面有丰富的典型树枝样的突起.透射电镜下可见树突状细胞以胞饮的方式摄入量子点,形成有膜包被的囊泡分布在细胞质内.结论：树突状细胞是通过胞饮作用摄取量子点,且量子点对树突状细胞的形态、表面标志及超微结构没有影响,生物相容性好.

人胚心肌细胞的分离与体外培养

由于在体内研究人心肌细胞具有一定的局限性,因此心肌细胞的分离与体外培养成为一项重要技术.

骨髓涂片中核仁组织者区与细胞核DNA的双重显示方法

血细胞发生中,对各期造血细胞准确无误地识别、分类和计数比较困难,而且人们对各期造血细胞的划分标准不一.因此,寻找区分各期造血细胞的标志十分重要.

同型半胱氨酸对大鼠胚胎发育的毒性影响

各种内外因素所致的出生缺陷性疾病中以先天性心脏病和神经管畸形最为常见，对人口质量的威胁最大，迄今其病因和发病机理仍不十分清楚。近年研究发现同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)是高同型半胱氨酸血症、心血管疾病、动脉粥样硬化以及出生缺陷(先天性心脏病和神经管畸形)的一个独立的危险因素。有研究报道HCY能诱发鸡胚发生心脏缺陷，

同型半胱氨酸、同型半胱氨酸诱导基因-2抗体和叶酸对人胚心肌细胞超微结构的影响

目的研究同型半胱氨酸(HCY)、同型半胱氨酸诱导基因-2抗体(HCY-2Ab)及叶酸对人胚心肌细胞超微结构的影响。方法取培养的人胚心肌细胞,进行HE染色,常规电镜包埋,透射电镜观察。结果当HCY的浓度小于1·0mmol/L时,随着HCY浓度的升高,心肌细胞核内常染色质增多、细胞质内线粒体和粗面内质网均多于空白对照组,而糖原颗粒减少;当浓度超过1·0mmol/L时,心肌细胞逐渐退化,细胞核内常染色质减少,异染色质增多,核膜包裹染色质形成凋亡小体,细胞质内线粒体肿胀、数目减少,粗面内质网减少;加入外源性的HCY-2Ab或叶酸,心肌细胞形态较相同HCY浓度下的好转。结论HCY对培养的人胚心肌细胞超微结构的维持具有正调节和负调节双相作用;外源性的HCY-2Ab和叶酸在一定程度上可以逆转HCY的作用。

小鼠皮肤表皮快速剥离法及对郎格罕细胞的影响

小鼠皮肤表皮快速剥离法及对郎格罕细胞的影响唐岩，唐军民，毕振伍，热娜（北京医科大学组织学与胚胎学系北京１０００８３）皮肤是一个具有独特免疫功能，并与全身免疫系统密切相关的器官。除表皮角质形成细胞外，在表皮基底层细胞间还分布着少量来源于骨髓的树突状细胞...

肿瘤细胞成瘤模型的建立与制片的体会

裸鼠体内成瘤实验是检验肿瘤细胞系成瘤能力的金标准，通过培养肿瘤细胞株建立裸鼠荷瘤模型是研究肿瘤生长、转移生物学特性及其分子调控机制，以及寻找治疗新药、新方法的重要手段。目前用于建立模型的肿瘤细胞株种类较多，如大肠癌、胃癌、宫颈癌、黑色素瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌、肾癌、鼻咽癌，但对不同成瘤模型的建立、成瘤特点、取材、固定及制片应注意的细节等报道较少。