小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreen1慢病毒载体的构建及神经干细胞转染

目的构建共表达小鼠Wnt3a(mWnt3a)与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体,感染神经干细胞(NSCs),观察mWnt3a在NSCs中的表达。方法利用同源重组技术将mWnt3a基因插入慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1,构建pLVX-Wnt3a-IRES-Zs-Green1慢病毒重组质粒,通过瞬时转染法包装出病毒上清,感染NSCs,设为Wnt3a-NSCs组;同时设GFP感染NSCs组(GFP-NSCs组)和未感染NSCs组(NSCs组)作为对照。免疫荧光染色法对Wnt3a-NSCs组NSCs进行nestin鉴定;Real-Time PCR检测各组细胞mWnt3a mRNA的表达;Western blotting检测各组细胞mWnt3a、β-catenin蛋白的表达。结果经限制性内切酶检测、基因测序和绿色荧光观察证实成功构建了携带mWnt3a基因的重组慢病毒,且慢病毒滴度达3×108TU/mL。Wnt3a-NSCs组NSCs在荧光显微镜下证实有绿色荧光,且nestin表达阳性。Real-Time PCR和Western blotting结果显示感染后7 d,Wnt3a-NSCs组mWnt3a mRNA和蛋白以及β-catenin蛋白均明显高于GFP-NSCs组和NSCs组(P<0.01)。结论成功构建了表达mWnt3a基因的慢病毒载体,在体外培养条件下可以成功转染NSCs。

静脉性脑梗死

静脉性脑梗死（cerebral venous infarction，CVI）是指静脉性因素导致脑组织缺血、缺氧而发生坏死、出血、软化。形成梗死灶的一类疾病。CVI的病因复杂，临床表现多样且无特异性，既往对该病的诊断非常困难，预后不佳。随着对脑静脉系统功能认识的逐步提高及先进诊断技术的应用，该病的重要性愈来愈引起研究人员的重视。

颅内压监测在老年颅脑损伤治疗中的疗效观察

目的 探讨颅内压(intracranial pressure, ICP)监测在老年颅脑损伤(traumatic brain injury, TBI)治疗中的意义。方法 回顾性分析2019年1月—2021年12月行开颅手术治疗的80例老年TBI的临床资料,采用ICP监测者为观察组,未采用ICP监测者为对照组,每组40例。对照组根据临床经验使用甘露醇等药物进行降ICP治疗;观察组根据ICP监测结果采取降ICP有效措施。结果 术后3个月,观察组预后良好率(72.5%, 29/40;格拉斯哥预后评分量表(GOS)评分4~5分)高于对照组(37.5%, 15/40;P<0.05)。观察组术后再出血、肾功能不全、电解质紊乱及肺部感染等并发症发生率均低于对照组(P<0.05)。结论 老年患者TBI术后持续ICP监测有助于临床及时采取针对性降ICP措施,减少并发症,改善患者预后。

Wnt3a影响大鼠海马神经干细胞增殖的体外研究

目的:探讨Wnt3a对胚胎大鼠海马神经干细胞(neural stem cells,NSCs)体外增殖的影响。方法:采用机械分离、无血清传代培养法,从胎鼠海马中获得NSCs,使用免疫荧光法对NSCs及其分化情况进行鉴定。将NSCs与5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)共孵育,观察Wnt3a对NSCs体外增殖情况的影响。结果:海马源胚胎NSCs具有增殖能力,可以传代培养,可分化为神经元和星形胶质细胞。与Brdu共孵育后,添加Wnt3a的实验组Brdu阳性率高于对照组(P<0.01)。结论:使用机械分离、无血清培养的方法获得的NSCs具有增殖和多向分化能力,Wnt3a可以促进大鼠海马NSCs的体外增殖。

视神经部分损伤后视网膜基质细胞衍生因子-1α表达的变化

目的研究大鼠视神经部分损伤后视网膜基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)的表达变化。方法制作大鼠视神经部分损伤模型,于损伤后1、2、3、5、7、10、14d收集视网膜组织,采用酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR分别测定损伤组(n=28)、假手术组(n=28)和正常对照组(n=12)大鼠视网膜组织中的SDF-1α蛋白及mRNA的表达。结果视神经损伤后各时间点,损伤组视网膜组织中SDF-1α蛋白和mRNA的表达较假手术组及正常对照组均明显升高(P<0.01),均在损伤后第5天出现峰值。伤后14d,损伤组视网膜组织中SDF-1α蛋白及mRNA仍维持在高表达状态。结论视神经部分损伤后SDF-1α在视网膜中的表达出现上调,并可在较长时间内维持高表达。

Wnt3a影响神经干细胞分化的体外研究

目的探讨Wnt3a对胚胎大鼠海马神经干细胞(NSCs)体外分化的影响。方法采用机械分离、无血清传代培养法从胎鼠海马中获得NSCs,使用免疫荧光法对其干细胞特性及其受体Fzd3蛋白表达进行鉴定,观察Wnt3a对NSCs体外分化的影响。结果海马NSCs表达特异性标志物巢蛋白及胞膜蛋白Fzd3;体外诱导分化,Wnt3a处理组神经元及星形胶质细胞分化的比例分别为11.25%±0.62%和56.26%±4.82%,而对照组则为8.54%±0.48%和68.42%±5.54%;组间分化差异具有统计学意义(P<0.05)。结论体外环境下Wnt3a能够促进NSCs向神经元分化,并抑制其向星形胶质细胞分化。

移植时间对大鼠视神经损伤后神经干细胞迁移的影响

目的探讨移植时间对大鼠视神经损伤后神经干细胞(NSCs)在视网膜内迁移的影响。方法 18只SD大鼠行右侧视神经损伤后按随机数字表法随机平均分为3组,并分别于损伤后当天及伤后7d和14d采用微量注射法行右眼视网膜下腔移植2μl(105个/μl)转染绿色荧光蛋白基因的NSCs(GFP-NSCs)。4周后处死大鼠,取右眼球做冰冻切片,对迁移到视网膜内的移植细胞进行计数。各组切片分别用胸腺细胞表面糖蛋白、胶质纤维酸性蛋白、β微管蛋白、视紫红质抗体进行免疫标记,观察各组移植细胞在视网膜上的分化情况。结果损伤当天及伤后7和14d移植组视网膜上的GFP阳性细胞数分别为(163441.14±16876.81)个、(145736.57±27449.07)个和(117291.33±15849.19)个,两两相较,均差异显著(P<0.01)。三组的移植细胞均可在宿主视网膜内存活、迁移,且可分化为神经胶质细胞、神经元和视网膜神经节样细胞。结论大鼠视神经损伤后随着移植时间的推迟,迁移到宿主视网膜内的移植细胞量下降。

老年自发性蛛网膜下腔出血患者MTHFR C677T基因多态性与颅内动脉瘤相关性分析

目的探讨颅内动脉瘤破裂原因导致的自发性蛛网膜下腔出血老年患者中MTHFRC677T基因TT型(纯合突变型)的分布频率特征。方法收集2018年1月—2021年12月期间在复旦大学附属闵行医院(上海市闵行区中心医院)确诊为自发性蛛网膜下腔出血的老年患者90例作为观察组(老年颅内动脉瘤破裂组62例、老年非动脉瘤SAH组28例),另选取90例体检者作为老年正常对照组。循环酶法测定3组的血清同型半胱氨酸(Hcy)水平;实时荧光定量PCR法比较3组的MTHFR C677T基因型(TT型、CT型、CC型)的频率分布特点;采用数字减影血管造影(DSA)确诊患者存在颅内动脉瘤的病例数;分析老年颅内动脉瘤破裂组患者中不同MTHFR C677T基因型的频率分布特点。结果老年颅内动脉瘤破裂组的MTHFR C677T的TT型分布频率较老年非动脉瘤SAH组、老年正常对照组高;而CC型分布频率较老年非动脉瘤SAH组、老年正常对照组低;所有入组研究对象中,MTHFR C677T的TT型分布频率显示血清低Hcy水平群体低于高同型半胱氨酸血症群体。上述比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论患者血清MTHFR C677T的TT型与颅内动脉瘤有相关性,其可能是颅内动脉瘤的独立危险因素。

PirB/ROCK信号通路与成年哺乳动物中枢神经系统再生

成年哺乳动物中枢神经系统（central nervoussystem，CNS）损伤可引起不同程度的功能障碍，修复损伤的神经功能对恢复正常的工作、生活具有重要的意义。纠正CNS再生的不利因素是实现有效修复受损神经结构和功能的研究热点之一。

去铁胺对老年颅脑损伤病人脑内血肿和水肿的促吸收作用

目的评估铁离子螯合剂去铁胺对老年颅脑损伤病人颅内血肿和水肿吸收的影响。方法收集90例经CT证实的老年创伤性颅内出血病人,经倾向评分匹配后分为实验组和对照组,每组45例。对照组病人接受常规治疗,实验组病人除常规治疗外,还接受连续5 d去铁胺静脉注射,剂量20 mg/kg,不超过2000 mg/d。治疗当天及治疗后第3、7、14天分别评估去铁胺对脑水肿和血肿吸收的影响。结果治疗后第7天,实验组血肿体积为(5.50±3.60)ml,明显小于对照组的(9.10±6.32)ml,差异具有统计学意义(P=0.001);治疗当天及之后第3、14天两组间差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后第7、14天,实验组的水肿体积均明显小于对照组(P <0.001)。两组病人治疗后6个月GOS评分差异无统计学意义(P>0.05)。结论去铁胺能加速老年颅脑损伤病人颅内血肿的吸收并抑制脑水肿,安全有效。

大鼠脑出血后脑组织PirB的表达及意义

目的:探讨大鼠脑出血(ICH)后脑组织中配对免疫球蛋白样受体B(Pir B)的动态变化。方法:将大鼠分为实验组和对照组,在脑立体定向仪下采用自体动脉血注入尾状核法制备ICH模型。用RT-PCR及Western blot法检测大鼠脑组织Pir B的表达。结果:实验组大鼠脑组织Pir B表达较对照组明显上调(P<0.01)。结论:Pir B参与了大鼠ICH后病灶周围神经元凋亡过程,可能与神经再生和功能恢复的抑制作用有关。

基质细胞衍生因子-1对神经干细胞的趋化作用

目的 观察基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对神经干细胞（NSCs）迁移的影响.方法 由GFP转基因SD大鼠胚胎脑组织获取NSCs并进行传代培养,免疫细胞化学染色法检测SDF-1特异性受体CXCR4的表达,利用Blind-Well小室体外迁移体系观察不同浓度的SDF-1（0、1、10、50、100、500、1000μg/L）对NSCs定向迁移数量的影响,随后分别使用CXCR4激动剂和阻断剂处理NSCs,再次利用上述方法观察最适浓度SDF-1时NSCs的迁移.结果 成功分离培养得到能够稳定表达GFP的NSCs,且CXCR4在该种NSCs上有表达.体外趋化实验结果表明,SDF-1对NSCs有较强的趋化作用,随着SDF-1浓度的升高,发生迁移的细胞数量也随之增加,并于SDF-1浓度为500μg/L时达到最高峰;CXCR4特异性激动剂和阻断剂分别能够增强和减弱SDF-1对NSCs定向迁移的趋化作用.结论 SDF-1与其特异性受体CXCR4相互作用,能够对NSCs的定向迁移产生靶向性作用.

基质细胞衍生因子-1诱导神经干细胞靶向性迁移的实验研究

目的 观察基质细胞衍生因子-1（SDF-1）对神经干细胞（NSCs）迁移的影响.方法 由胚胎大鼠脑组织获取NSCs并进行传代培养和分化鉴定,使用流式细胞术检测NSCs纯度及SDF-1特异性受体CXCR4的表达情况,之后利用Blind-Well小室体外迁移体系观察不同浓度的SDF-1（0 ng/L、1 ng/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL和1000 ng/mL）对NSCs迁移数量的影响,并使用μ-载片观察SDF-1对NSCs迁移距离的影响.结果成功分离培养得到了能够在体外不断分裂增殖、具有多向分化潜能的NSCs,连续传3代后绝大部分细胞nestin表达阳性,nestin和CXCR4的共表达率达到80%左右.细胞趋化实验结果表明,SDF-1对NSCs有较强的趋化作用,随着SDF-1浓度的升高,发生迁移的细胞数量也随之增加,并于SDF-1浓度为500ng/mL时达到最高峰[（256.79±38.27）个细胞/每高倍视野].在μ-载片细胞生长通道两侧的SDF-1浓度梯度（500ng/mL→0ng/mL）作用下,由细胞克隆球迁出的细胞呈不对称分布,通常有更多的迁出细胞分布于趋化因子浓度较高的一侧,且该侧细胞的最大迁移距离也比对侧远.结论 SDF-1与其特异性受体CXCR4相巨作用能够诱导NSCs发生靶向性迁移.

亚低温辅助治疗重型颅脑损伤对患者凝血、氧化应激、血清NSE的影响

目的探讨亚低温辅助治疗对重型颅脑损伤(sTBI)患者的治疗作用。方法选取2014年1月至2017年6月本院收治的重型颅脑损伤患者100例,采用随机数字表法分为观察组和对照组各50例,两组患者均给予手术治疗及一般基础治疗,观察组在术后同时给予亚低温治疗;对比两组患者入院时、术后12、24 h的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、D-二聚体(D-D),对比两组患者入院时、术后48 h超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、颅内压(ICP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、一氧化氮(NO)水平,伤后3个月对患者进行预后评价。结果治疗前,两组患者的PT、APTT、TT、D-D水平差异无统计学意义(P>0.05);治疗12 h,观察组患者的PT、APTT、TT均高于对照组(P<0.05),D-D低于对照组(P<0.05);治疗24 h,观察组的PT、APTT、TT、D-D均低于对照组(P<0.05);治疗前,两组患者的SOD、MDA、ICP、NSE、NO差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,观察组患者的MDA、ICP、NSE、NO均低于对照组(P<0.05),观察组患者的SOD高于对照组(P<0.05);治疗3个月后,观察组患者的预后良好率(68.00%)高于对照组(48.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论亚低温辅助治疗sTBI患者有助于改善患者的凝血功能、氧化应激、血清NSE水平,对于改善患者的预后具有一定的积极作用。

经皮后路全内镜下锁孔手术治疗单节段神经根型颈椎病的短期疗效

目的探讨经皮后路全内镜下锁孔手术治疗单节段神经根型颈椎病(CSR)的短期疗效。方法回顾性分析2017年4月至2019年5月复旦大学附属闵行医院神经外科采用经皮后路全内镜下锁孔手术治疗的15例单节段CSR患者的临床资料。术后复查颈椎MRI、三维CT及X线平片,并行视觉模拟评分(VAS)、日本骨科协会(JOA)颈椎评分及颈椎功能障碍指数(NDI)评估。对所有患者行临床随访,包括行VAS、JOA颈椎评分及NDI评估。至末次随访,测定颈椎生理曲度、病变椎间隙高度、椎体水平位移及角度位移;同时采用改良MacNab疗效评定标准评估手术疗效。结果15例患者的手术均成功,术后均未出现感染、椎管内血肿及神经功能障碍。术后复查颈椎MRI显示,所有患者的神经根松解满意。术后2 d,15例患者的VAS评分[(2.1±1.1)分]和NDI[(32.3±8.2)%]均较术前[分别为(6.2±1.4)分、(68.9±9.1)%]下降(均P<0.001),JOA颈椎评分较术前升高[(17.0±1.5)分、(12.7±1.6)分,P<0.05]。15例患者的随访时间为(17±5)个月(12~22个月)。随着随访时间推移,15例患者的VAS评分呈下降趋势、JOA颈椎评分呈上升趋势、NDI呈下降趋势(F值依次为157.604、306.701、47.309,均P<0.001)。至末次随访,15例患者的颈椎生理曲度较术前增加[(9.60±1.84)°、(7.93±1.53)°,t=-5.801,P<0.05],而病变椎间隙高度、椎体水平位移及角度位移与术前的差异均无统计学意义(均P>0.05);15例患者的改良MacNab疗效评定结果为,优13例、良1例、可1例。结论采用经皮后路全内镜下锁孔手术治疗单节段CSR的术后并发症少、短期疗效较好,不影响颈椎稳定性,并可改善脊髓神经功能。

经皮脊柱内镜完全可视化椎间孔成形术治疗腰椎间盘突出症的短期疗效

目的探讨经皮脊柱内镜完全可视化椎间孔成形技术治疗腰椎间盘突出症的短期疗效。方法回顾性分析2016年6月至2018年12月复旦大学附属闵行医院神经外科(18例)和复旦大学附属中山医院神经外科(14例)采用经皮脊柱内镜完全可视化椎间孔成形技术治疗的32例腰椎间盘突出症患者的临床资料。术后复查腰椎MRI,并行疼痛视觉模拟评分(VAS)、日本骨科协会(JOA)腰椎评分及Oswestry功能障碍指数(ODI)评估疗效。对所有患者行门诊随访,随访内容包括VAS、JOA评分、ODI评估及改良MacNab疗效评估。结果32例患者均顺利完成手术,术后均未出现感染、椎管内血肿及神经功能障碍。术后复查腰椎MRI显示突出的髓核摘除基本满意。与术前比较,32例患者术后2 d的VAS评分[分别为(2.21±1.18)分、(6.25±1.46)分]和ODI[(30.28±7.42)%、(68.63±11.04)%]均下降(均P<0.001),JOA评分升高[分别为(16.66±1.58)分、(12.43±1.85)分,P<0.001]。32例患者的随访时间为(15±5)个月(10~20个月)。随着随访时间的推移,32例患者的疼痛VAS评分呈下降趋势、JOA评分呈上升趋势、ODI呈下降趋势(F值分别为187.43、72.54、564.38,均P<0.001)。术后12个月随访时,32例患者的改良MacNab疗效评定结果为,优20例、良9例、可2例、差1例;优良率为90.6%(29/32)。结论经皮脊柱内镜完全可视化椎间孔成形技术治疗腰椎间盘突出症可改善疼痛和神经功能,帮助患者恢复生活和工作,短期疗效较好,远期效果需进一步随访观察。