胰岛素-磷脂复合物的制备及其理化性质的研究

目的研究胰岛素-磷脂复合物的制备及理化性质。方法采用非水溶剂-冷冻干燥法制备胰岛素-磷脂复合物,并对其红外光谱、X-射线衍射以及表观油-水分配系数等理化性质进行表征。另外采用降血糖试验评价磷脂复合胰岛素生物活性的变化。结果通过三相图的绘制确定的复合物形成的较优处方和工艺为(质量分数):二甲亚砜90%~100%,冰醋酸0%~10%,磷脂0%~5%。红外光谱显示胰岛素与磷脂结构中的某些基团发生了相互作用,但无新的特征吸收峰产生,即无新共价键生成。X-射线衍射分析显示,复合物呈现无定型特征。复合物中胰岛素的表观油-水分配系数与介质的离子强度及pH值有关,低离子强度和胰岛素等电点处的介质pH值有利于复合物在水相中的结合稳定性。大鼠降血糖实验表明,制备工艺对胰岛素的生物活性无明显影响,胰岛素复合物组和溶液组对大鼠的降血糖作用无显著性差异。结论胰岛素与磷脂形成复合物后,其理化性质发生显著变化,亲脂性增加并能较好地保持其生物活性。

核磁共振波谱法测定盐酸卡替洛尔等9种洛尔类药物对照品的绝对含量

目的采用核磁共振波谱法测定盐酸卡替洛尔、盐酸塞利洛尔、盐酸贝凡洛尔、盐酸艾司洛尔、盐酸索他洛尔、阿替洛尔、盐酸普萘洛尔、盐酸拉贝洛尔和酒石酸美托洛尔共9种洛尔类药物对照品的绝对含量。方法以三聚甲醛、对苯二酚和苯甲酸分别为9种洛尔类药物对照品的内标,与待测物混合并同时测定,通过比较洛尔类药物定量峰与内标物定量峰峰面积的比值确定待测物的含量。采用核磁定量的方法,波谱条件以zg30脉冲序列获取"H-NMR谱,5 mm BBO(宽带观测)探头,延迟时间2 s,采样次数32次,谱宽9 615.385 Hz。结果核磁共振法测定结果与各对照品标示值误差约为1%。结论该方法准确、专属、快速,适用于标定药物基准物质的绝对含量。

海因酶法制备L-氨基酸研究进展

随着应用于农药、医药和食品中的光学活性氨基酸的广泛发展,海因酶法成为一种很有发展前途的生物转换方法。目前已分离出适合制备脂肪族-L-氨基酸和芳香族L-氨基酸的菌株,但由于海因类化合物不易溶于水,寻找合适的有机溶剂,使之既能提高底物在反应体系中的溶解度,又对海因酶不造成伤害,筛选海因消旋酶或氨甲酰氨基酸消旋酶,提高海因酶的耐热性都是海因酶法制备L-氨基酸的主要研究方向。

氨基酸对映体的手性拆分

氨基酸对映体的分离是生命科学的基础,主要方法有高效毛细管电泳法、高效液相色谱法、薄层色谱法和气相色谱法等,高效液相色谱法是广泛应用的手性氨基酸拆分方法。本文介绍了间接法和直接法手性拆分的分离机理,并详细介绍了Pirkle手性固定相、胶束手性固定相、包合手性固定相、配体交换手性固定相、蛋白质手性 j固定相等5类手性固定相的应用。

球晶化长效干扰素的自组装及其体内外性质评价

采用物理化学方法延长蛋白多肽类药物的体内半衰期是一项具有挑战性和重要性的前沿课题。蛋白质结晶化为改善此类药物的稳定性和在体内传递提供了新的方向。本文以干扰素为模型药物制备了蛋白质的球形晶体,对其进行理化性状表征及体外释放特性考察,并进行家兔皮下注射给药的体内药动学评价。所得干扰素晶体外观呈单分散球状,回收率>80%,平均粒径约为16μm,结晶度23.2%。体外释放2 h时突释量为21%,累积释放时间可维持72 h,且在释放过程中能较好地保持原有抗病毒生物活性。家兔皮下注射溶液型和结晶型干扰素(剂量分别为7.5×106和1.5×107U.kg 1)后,血药达峰时间(Tmax)和消除半衰期(t1/2)分别由(1.80±0.45)h和(1.35±0.35)h延长至(13.20±2.68)h和(10.68±1.97)h,相应血药峰浓度由(1 411.10±575.28)U.mL 1降为(721.37±206.55)U.mL 1,相对生物利用度为(96.87±20.30)%。本文研究结果对提高蛋白多肽类药物的临床治疗效果及促进生物大分子传递系统的发展,将有着重要的学术价值和广阔的应用前景。

结晶度对球形化自组装干扰素体内外释放行为的影响

目的研究结晶度对球形化自组装干扰素体内外释放行为的影响。方法采用静态结晶技术制备球形化干扰素，以结晶度为指标表征不同自组装物的分子有序度；对其体外溶出特性进行考察，并比较家兔皮下注射给药的体内药动学行为。结果调节自组装过程中的蛋白质过饱和度，可获得无定形及结晶化的球形干扰素。无定形聚集体回收率达到96．5％，平均粒径约0．6μm；两种结晶化干扰素外观呈单分散球形颗粒，回收率均大于80％，平均粒径10～20μm，结晶度分别为23．2％和30．8％。随着结晶度的提高，自组装物的体外溶出速率显著降低。家兔皮下注射无定形和结晶化球形干扰素后，血药达峰时间（tmax）由（6．00±1．40）h推迟至（13．20±2．68）和（22．40±3．57）h，消除半衰期（t1/2）由（4．75±0．82）h延长至（10．68±1．97）和（29．17±4．93）h。结论结晶化球形自组装干扰素能够显著改善其体内外释药性能，可作为一种新型蛋白质类药物缓释传递系统。

壳-核结构多柔比星脂质磷酸钙纳米粒的制备及体外性能评价

脂质体作为一种重要的药物载体,具有生物相容性高、免疫原性低等优点,已被广泛应用于药物传递领域,尤其是肿瘤的靶向治疗。然而传统脂质体由流动的动态磷脂膜构成,极易发生相互融合从而导致聚集和药物泄露。此外,较低的聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修饰程度也限制了该载体在体内的靶向递药性能。鉴于传统脂质体存在的问题,本文设计了一种将无机载体磷酸钙与脂质体相结合的纳米粒靶向药物递送系统,即脂质磷酸钙(lipid coated calcium phosphate,LCP)。以多柔比星(doxorubicin,DOX)为模型药物,采用反相微乳液法制备载药脂质磷酸钙纳米粒(DOX/LCP),并对制备条件进行考察。采用红外光谱、能量色散光谱和透射电镜对磷酸钙内核进行结构表征和形态观察,并对DOX/LCP的粒径、包封率、载药量、稳定性及体外释放行为进行了考察。在此基础上,采用共聚焦显微镜和流式细胞仪分别对LCP介导DOX在耐药肿瘤细胞株MCF-7/DOX中的摄取进行了定性和定量评价,并采用噻唑蓝比色法考察了其细胞毒性作用。结果表明:制得的LCP具有典型的核-壳结构,且尺寸均一、分散性良好,粒径为(48.6±3.9)nm,zeta电位为(-12.1±1.2)m V,包封率>80%,在模拟血浆中具有良好的粒径稳定性。体外释放具有明显的p H依赖性,当环境p H为7.4时,24 h累计释放度低于20%;随着释放介质p H值的降低,DOX/LCP释放速度逐渐加快,在p H为4.5介质中,24 h累计释放量超过90%。LCP可以显著促进耐药细胞对DOX的摄取和蓄积,且体外对耐药肿瘤的抑制率显著提高,DOX/LCP组和游离DOX组的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为4.6和11.8μg·m L-1,两者相比具有显著性差异(P<0.05)。综上,本研究制备的LCP粒径小、包封率高、稳定性好,具有环境响应性及潜在的逆转肿瘤耐药性能,有应用于临床研究的潜力。