Annexin A1在胃癌中的表达及其与胃癌预后的关系

【目的】通过检测Annexin A1蛋白在胃癌原发灶和转移灶中表达,探讨Annexin A1表达的病理临床意义及对预后的影响。【方法】构建组织芯片包含胃癌原发灶及相应的转移灶70对、癌旁组织30例,应用免疫组化方法检测Annexin A1在胃癌组织芯片中的表达,结合病理临床资料及生存资料,分析Annexin A1表达与病理临床参数的相关性。【结果】Annexin A1在癌旁组织中不表达,在胃癌原发灶中的阳性表达率为4/70(5.7%),淋巴结转移灶中的表达率为17/70(24.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移灶ANXA1的表达与TNM高分期相关(P<0.05)。Kaplan-Meier分析显示淋巴结转移灶ANXA1表达阳性组患者生存时间较阴性组短,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归多因素分析ANXA1表达阳性是胃癌早期死亡的危险因素。【结论】Annexin A1的表达与肿瘤的远处转移、胃癌患者的早期死亡密切相关。

骨髓基质干细胞在骨形成蛋白诱导下异位成骨及应用于人造骨的实验研究

目的 研究经分离培养的骨髓基质干细胞 (MSC)在骨形成蛋白 (BMP)诱导下在体内外的异位成骨效应 ,为研制一种本身具有成骨能力的人造骨材料提供实验依据。方法 分离、培养 Wistar大鼠 MSC,体外实验将 MSC+ BMP分别在培养板和弥散小室内培养 ,体内实验将 MSC+ BMP与人工珊瑚骨 (CHA)制成复合移植体 ,种植在大鼠背肌内 ,用形态学、组织化学和免疫组化方法观察其成骨效应。结果 MSC在体外 (培养板和弥散小室 )只形成软骨基质 ,在体内复合移植体 (CHA + BMP+ MSC)形成骨质 ,其成骨效应比对照组 A(CHA + MSC)和对照组 B(CHA )强。结论 复合移植体 (CHA+ BMP+ MSC)有可能被研制成本身具有成骨能力的人造骨材料。除 BMP外 ,移植体植入的机体和局部还存在其它诱导成骨的因子 ,进一步探讨这些因子的作用 ,将对研制这种理想的人造骨材料具有重要意义。

应用顺序特异性引物聚合酶链反应检测华南人群HLA-B座位第4外显子变异

目的 为探明中国华南人群中因HLA B座位发生基因突变而引起表达变异存在的可能性。方法 用顺序特异性引物聚合酶链反应 (PCR SSP)对 75例经血清学分型为纯合型样本再次分型 ,对有差异的结果使用PCR SSP方法检测第四外显子突变情况。结果 75例血清学指定为纯合型标本经DNA分型证实有 1 2例为杂合型。 1 2例结果有差异的样本经PCR SSP法表达变异的筛查发现有 1例存在第四外显子额外胞嘧啶插入 ,经DNA分型发现的第二基因为沉默基因。结论 应用PCR SSP方法可检测HLA B等位基因突变 ,该突变导致HLA B基因表达无效 ,进行HLA基因表达变异的检测可提高HLA分型的准确性 ,更加有效的指导临床进行器官和骨髓的选配。

毛细管参考链介导的构象分析法在HLA-DRB1等位基因分型中的应用

目的 :探讨应用参考链构象分析法对HLA DRB1等位基因分型的准确性及实用性。方法 :应用毛细管参考链介导的构象分析法建立 31个等位基因的标准迁移率 ,对 5 0例样本进行分型 ,并与SBT法检测结果进行比较。结果 :5 0例样本中 4 7 5 0与测序法测得的等位基因一致 ,以DRB1 0 80 32、DRB1 0 90 12为参考链无法检测出DRB1 110 1、DRB1 14 0 3。结论 :毛细管参考链介导的构象分析法具有准确性高、分辨率高、成本低、高通量的特点 。

应用毛细管参考链介导的构象分析法进行HLA-DR4等位基因分型

目的 应用毛细管参考链构象分析法对HLA DR4进行等位基因分型,并与测序分型结果相比较,评价该方法的准确性及实用性。方法 首先应用FAM标记的引物扩增HLA DRB1等位基因为纯合型的样本DRB1 0 80 3、DRB1 0 90 1的第二外显子作为参考链,与标准样品HLA DRB1第二外显子杂交获得异源双链,借助测序仪通过毛细管电泳建立中国人HLA DR4 8个高频率等位基因的标准迁移率,再对30例DR4样本进行分型,并与测序分型法检测结果进行比较。结果 30例样本中2 8例与测序法测得的等位基因结果一致。结论 毛细管参考链介导的构象分析法具有准确性高、分辨率高的优势,与测序法相比具有成本低、高通量的特点,值得在移植、相关疾病等领域的HLA分型中推广应用。

结直肠癌人源性肿瘤组织异种移植模型(PDX)的构建及^(18)F-FDG PET/CT活体成像监测

目的构建结直肠癌人源性肿瘤组织异种移植模型(Patient-derived Xenograft,PDX),并探讨18F-FDG PET/CT成像技术用于监测结直肠癌PDX模型肿瘤生长的有效性。方法取外科手术切除的新鲜结直肠癌组织,接种到免疫缺陷小鼠皮下构建PDX模型。采用HE染色法、免疫组织化学染色法进行模型评价。选取部分构建成功的PDX模型进行PET/CT活体成像监测。结果接种结直肠癌患者新鲜肿瘤组织35例,成功构建PDX模型20例,成功率为57%;成瘤所需的中位时间为54.5天,四分位间距为47.5天。HE染色结果表明结直肠癌PDX模型可以较好地保留原发肿瘤的组织学特性。Ki67、p53在第一代PDX模型移植瘤与原发肿瘤组织中均呈强阳性表达,具有高度相似性。结直肠癌的成瘤能力与患者的性别、年龄、以及肿瘤的部位、大小、分期、分化程度等均没有相关性。PDX模型的PET/CT活体显像表明,18F-FDG PET/CT可以获得较好的显像效果。结论结直肠癌PDX模型构建成功率较高,模型可以较好地保留原发肿瘤的组织学、生物学特性。18F-FDG PET/CT成像技术可用于监测结直肠癌PDX模型肿瘤的生长情况。

骨形成蛋白诱导成骨性分化的实验研究

通过动物实验和细胞培养的方法,观察到骨形成蛋白在体内诱导异位成骨,在体外诱导人胚骨间质细胞、动脉瘤样骨囊肿间质细胞及其转化细胞成软骨分化的效应,本实验为解释临床上动脉瘤样骨囊肿中骨肉瘤的伴发提供了一定的实验依据.

混合抗原板和细胞板联合应用筛选群体反应性抗体及其意义

目的：探讨联合应用混合抗原板和细胞板对肾移植受者群体反应性抗体检测的应用前景。方法：将９０份肾脏病患者血清分成３组，包括首次移植术前、术后１个月及肾功能稳定期者。分别以混合抗原板和细胞板作群体反应性抗体检测。按照试剂盒的规定操作和判断结果。结果：混合抗原板检测操作简便、耗时１５０ｍｉｎ，９０份样本中检测出１９例阳性，包括３例可疑阳性；细胞板检测耗时 １３０ ｍｉｎ，１７例阳性，其中１６例阳性与混合抗原板方法检测的阳性一致，另１例是混合抗原板方法检测到３例可疑阳性中的１例。结论：混合抗原板检测筛选群体反应性抗体具有操作简便、结果直观、易于判断、重复性好的优点，可与细胞板联合应用检测群体反应性抗体，为肾移植受者筛选群体反应性抗体提供新的方法。

乌司他丁对术后早期移植肾功能恢复的临床观察

目的探讨乌司他丁(UTI)对早期移植肾功能恢复尤其在促进急性肾小管坏死(ATN)恢复中的作用及其机制分析。方法普通尸肾移植患者30例,随机分成 A 组(用药组,15例)和 B 组(对照组,15例)。再选取具有急性肾小管坏死(ATN)高危因素的供肾,接受移植的患者共40例,按随机配对原则分成 C 组(用药组,20例)和 D 组(对照组,20例)。用药组于围手术期使用 UTI,观察术后早期尿量、血肌酐(sCr)、血α_1-微球蛋白(α_1-MG)、尿α_1-MG、IL-8、IL-10。结果 A 组与 B 组相比术后尿量增加,其中第2、6、7、9、10天比较差异有统计学意义(均 P<0.05);A 组术后第1、3天血IL-8分别为(93.8±31.5)ng/L 及(42.0±24.0)ng/L,显著低于 B 组(135.0±31.2)ng/L 及(178.3±76.4)ng/L,均 P<0.05;A 组术后第1、3天尿α1-MG 分别为(69.9±32.6)mg/L 及(35.3±34.5)mg/L,显著低于 B 组(91.2±28.4)mg/L 及(65.8±33.4)mg/L,P<0.05。C 组术后第7、10天血α_1-MG(118.3±41.2)mg/L、(99.5±68.6)mg/L 显著低于 D 组(187.2±55.2)mg/L、(151.3±87.4)mg/L,均 P<0.05;尿α1-MG 在术后第7天(39.9±22.3)mg/L 及第10天(38.2±20.4)mg/L,亦显著低于 D 组(67.3±21.6)mg/L 及(62.3±29.2)mg/L,均 P<0.05;C 组与 D 组比较术后血IL-8的升高趋势得到抑制,多尿期提前。结论 UTI 在肾移植术后能起到明显的改善微循环,保护移植肾小管,增加尿量,抑制炎症反应以及促进 ATN 恢复的作用。

细胞因子基因多态性与肾移植急性排斥反应的关系

目的 探讨肾移植患者外周血中细胞因子基因多态性与急性排斥反应的关系。方法 应用聚合酶链反应测定 89例肾移植患者外周血中肿瘤坏死因子 (TNF α)、转化生长因子 (TGF β)、白细胞介素 6(IL 6)及干扰素 (IFN γ)的基因型 ,并结合HLA配型情况 ,比较各基因型别的急性排斥反应发生率。结果 在HLA DR错配的情况下 ,TNF α和IFN γ等位基因为高分泌型者 ,其术后急性排斥反应发生率较低分泌型者高 (P <0 .0 5) ;未能显示TGF β及IL 6基因表达与急性排斥反应的相关性。结论 术前检测肾移植患者细胞因子基因型 ,有助于发现可能发生急性排斥反应的高危人群 。

肝移植术后免疫抑制剂引起肝损害的病理学改变(附26例肝活检报告)

目的探讨肝活检在肝移植术后药物性肝损害诊断中的作用。方法回顾26例肝穿提示药物性肝损害的样本,将组织学改变按肝细胞损伤、淤胆、以上两种方式并存的混合型、纤维淤胆性肝炎等类型进行分类,结合临床病史及相关辅助检查排除其他引起肝功能损害的因素,分析不同免疫抑制剂引起肝组织病理学改变的特点。结果大剂量的糖皮质激素易引起肝细胞的肿胀和脂肪变性,FK506或环孢霉素相关肝损害以淤胆为主,纤维淤胆性肝炎存在时肝细胞内有大量的 HBV 病毒复制。结论肝活检可提示与药物损伤有关的组织学表现,判断损伤的严重程度,并能排除一些引起肝功能异常的其他因素,在临床的诊断和鉴别诊断中有着重要的价值。

miR-338-3p在肝癌组织中的表达及意义

目的检测miRNA在肝癌中的表达谱,探讨miR-338-3p在肝癌组织中的表达及与肝癌临床病理参数的关系和意义。方法采用液相芯片技术分析20对肝癌组织与其癌旁组织中114种miRNA表达谱的差异。Real-timeRT-PCR验证另36对肝癌组织中miR-338-3p下调表达及其与肝癌临床参数的相关性。结果 31种miRNA在肝癌组织与非肝癌组织间呈现差异表达,其中12种miRNA在癌组织的表达较癌旁组织上调,19种miRNA在癌组织中表达下调。miR-338-3p下调表达程度与肝癌恶性程度、肿瘤分化程度、肝内和肝外转移及门静脉癌栓有关,与患者性别、AFP、HBsAg、是否合并肝硬变等不相关(P<0.01)。miR-338-3p的表达量肝癌组织低于非肿瘤组织,转移性肝癌低于非转移性癌组织,miR-338-3p的表达量随着肿瘤级别的增加而逐近降低(P<0.01)。结论肝癌组织与癌旁组织之间存在miRNA差异表达,其中miR-338-3p下调表达程度与肝恶性行为相关。

RNA干扰对肝癌细胞巨噬细胞移动抑制因子基因表达的抑制作用

目的观察特异性小干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞巨噬细胞移动抑制因子（MIF）基因表达的抑制作用。方法脂质体方法将siRNA转染肝癌细胞PLC、Hep3B。定量RT-PCR、Western blot检测MIF mRNA和蛋白、MAPK信号分子的表达。噻唑蓝（MTT）比色法、体外细胞侵袭实验检测细胞增殖和对重组基底膜（matrigel）穿透能力。结果100nmol／L的MIF siRNA使MIF mRNA表达下调81．3％和89．1％，蛋白水平降低69．50％、72．31％，与对照组比较其差异有统计学意义（P均〈0．01）。细胞增殖率下降16．79％和47．14％（P均〈0．05）。穿透matrigel的细胞数为51．00±11．27和18．56±4．72，与对照组比较差异有统计学意义（P均〈0．05）。磷酸化MAPK下调。结论MIF siRNA有效抑制MIF表达及肝癌细胞增殖和迁移，可能部分通过抑制MAPK磷酸化起作用。

152例肝移植术后肝功能异常的肝活检

目的评价肝活检在明确肝移植术后肝损害病因中的作用，分析组织学诊断存在误差的常见原因，进一步提高肝活检的准确性，以利临床治疗。方法260例肝活检来自于152例肝移植受者，术后出现临床无法解释的肝功能异常，肝功能检测结果高于正常值的2倍以上。回顾组织学改变及最终的临床诊断，评价相符程度。结果大部分的组织学诊断与最终的临床诊断相符，有7例组织学改变为胆管炎后经进一步临床检查证实4例为血管并发症、2例为败血症、1例为保存性损伤。2例组织学诊断为保存性损伤的病例后证实为药物性肝损害。结论移植后肝活检可明确许多肝功能异常的原因；评判病变的严重程度，指导临床治疗；对一些复杂病例应将以往的活检和整个临床病程、其他实验室检查及影像学检查进行综合考虑，可提高诊断的准确性。

siRNA沉默巨噬细胞移动抑制因子基因对肝癌细胞血管内皮生长因子表达的影响

巨噬细胞移动抑制因子（MIF）是最早发现的炎症因子之一。近年来的研究结果显示MIF在多种肿瘤细胞中过表达，参与肿瘤的发生及进展。MIF蛋白和mRNA于肝硬化组织和肝细胞癌（HCC）癌细胞的胞质中过表达，重组的MIF可促进肝癌细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）。本研究比较了10对HCC的癌及癌旁组织中MIF和VEGF的蛋白质和mRNA表达差异，进一步应用化学合成特异性的小干扰RNA，阻断MIF基因在肝癌细胞株PLC、HEN32细胞表达并探讨MIF对VEGF表达的影响。