牛精原干细胞的分离和纯化及体外培养的一般特性

采用两步酶消化法制备5月龄的牛生殖细胞悬液，用Percoll不连续密度梯度法分离精原细胞，接种于含10％胎牛血清的DMEM／F12培养基中，37℃，5%CO2饱和湿度培养，观察培养细胞的生长和形态变化。结果5月龄牛的曲细精管主要包含细胞为精原细胞、Sertoli细胞，每克睾丸实质收获生精上皮细胞总数平均为3．18×10^6个细胞，精原细胞纯化后纯度达69．27％，精原细胞主要分布于27％～35％的Percoll梯度中。牛精原干细胞体外培养6～7d后开始分裂，20d后精原干细胞形成小集落。结果表明用两步酶消化、Percoll不连续密度梯度法分离的精原细胞能满足体外培养的需要，可以存活并发生增殖。

GDNF和SCF促进小鼠精原干细胞增殖与分化的研究

目的探讨小鼠精原干细胞增殖扣分化体外控制的可行性。方法采取7—8日龄雄性小鼠睾丸，分离纯化精原干细胞接种在添加神经营养因子的培养基内进行增殖培养，7d后更换添加干细胞生长因子的培养基。结果SSCs接种于Sertoli细胞饲养层上4d后，出现了增殖现象，可见增殖产生SSCs克隆，AKP染色阳性，β1整合素免疫细胞化学染色阳性，RT—PCR扩增出长度约为120bp的Oct-4和280bp的c—kit条带。结论小鼠精原干细胞在添加50ng／mLGDNF的培养基内培养7d后更换添加10ng／mLSCF的培养基可以实现小鼠SSCs从增殖到分化的转变。

猪源性链球菌的耐药性分析

用平皿二倍稀释法,以肺炎链球菌ATCC49619为质控菌株,测定了11种抗菌药物对临床分离的36株猪源性链球菌的最低抑菌浓度(MIC)。耐药性监测的结果表明,链球菌对81.82%(9/11)药物产生了不同程度的耐药性。只有氟苯尼考和罗红霉素对临床所分离的链球菌比较敏感,MIC50为0.5μg/mL。

辽西地区禽大肠杆菌耐药性分析

禽大肠菌病是由埃希氏菌属中的大肠埃希氏菌的某些血清型引起各种禽的肠道或肠道外感染的一种传染病.本病可导致胚胎和幼雏死亡.禽大肠杆菌病在国内外均有报导,随着养禽业的迅猛发展,本病的发病率与死亡率也大为增加,鸡群中普遍流行,给养禽业带来巨大的损失.由于抗菌药物的广泛使用,使禽大肠杆菌的耐药菌株大量出现给此病的临床治疗带来了困难.我们从辽西分离到56株禽大肠杆菌,并进行了耐药性的测试和分析,希望能为辽西地区甚至是辽宁省的禽大肠杆菌病临床合理用药提供参考.

哺乳动物精卵融合机制

最近基因打靶研究揭示出了参与精卵结合和融合的各种分子。精子中ADAMs因子(是含 有裂解蛋白和金属蛋白酶结构域蛋白质家族),包括繁殖因子α、繁殖因子β以及cyritestin,经过 研究已经发现它们对精卵结合有重要作用,而对精卵的融合不重要。通过研究推测出其受体为 卵母细胞整合蛋白,其对精卵交互作用是必需的。最近,一些研究表明CD9和卵母细胞上GPI锚 定蛋白(glycosyl plaosphatidyl inositol糖基磷脂酰肌醇),以及精子上的附睾蛋白DE均是精卵融合 过程中的侯选因子,如果缺乏这些蛋白质分子或其作用受到干扰将导致精卵融合机制紊乱。综 述重点讨论了参与精卵交互作用的相关分子的最新研究进展。

新生小鼠精原干细胞诱导分化精子样细胞

目的探讨小鼠精原干细胞体外诱导分化精子样细胞的可行性。方法以7—8日龄小鼠睾丸为材料，采用小鼠睾丸支持细胞作为饲养层，应用雏甲酸诱导、成年小鼠睾丸组织液诱导以及低温诱导精原干细胞分化，应用流式细胞仪分析诱导精子样细胞的染色体倍性。采用显微注射法将精子样细胞注射到卵母细胞和去核卵母细胞，观察受精卵的发育状况。结果三种方法诱导精子样细胞比例分剐为5．9％、1．6％、0．35％；流式细胞仪分析维甲酸诱导单倍体比率为19．3％；诱导精子样细胞能激活卵母细胞，囊胚发育率20．36％。结论新生小鼠精原干细胞体外可以诱导分化为精子样细胞，并具有激活卵母细胞的能力。

氟苯尼考长效制剂对鸡大肠杆菌病的疗效试验

用试管二倍稀释法测定了氟苯尼考与丁胺卡那霉素对大肠杆菌质控菌株ATCC2 5 92 2 ,菌株K88、HD10 4 7和临床分离的 36株大肠杆菌的体外抗菌活性 ,进行了鸡大肠杆菌病的临床疗效试验。结果质控菌株和K88、HD10 4 7株对氟苯尼考均敏感 ,36株临床分离菌株对氟苯尼考的敏感率为 96 .2 %。在临床疗效试验中 ,氟苯尼考长效口服液和注射剂组的死亡率低于感染对照组和丁胺卡那霉素对照组 (P <0 .0 1) ,治愈率及有效率高于感染对照组和丁胺卡那霉素对照组 (P <0 .0 1) 。

pEGFP-hTERT载体的构建及其在牛A型精原细胞中的表达

为了构建端粒酶逆转录酶表达载体,用带有绿色荧光蛋白报告基因的载体pEGFP-C1和带有hTERT cDNA的载体pCL-Neo-hTERT,通过基因重组构建新的载体pEGFP-hTERT,转化后筛选阳性克隆进行酶切鉴定;pEGFP-hTERT载体通过脂质体介导法转染纯化后的牛A型精原细胞,观察绿色荧光表达,G418筛选阳性克隆。结果表明,pEGFP-hTERT载体与预设计的一致;pEGFP-hTERT载体转染牛A型精原细胞后,经筛选获得了1个表达绿色荧光蛋白的阳性细胞克隆。由此可见,hTERT表达载体得到了成功构建,并在牛A型精原细胞中实现了表达。

犬细小病毒VP2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达与检测

为表达犬细小病毒VP2蛋白(CPVVP2),用于犬细小病毒病的诊断、疫苗研制和VP2蛋白功能研究,根据基因库已发表犬细小病毒序列设计合成了VP2基因的1对特异引物,以细小病毒感染的犬粪样品中提取的总DNA为模板,进行PCR扩增,把扩增产物克隆至pMD18-T载体进行测序、鉴定。将克隆的VP2基因片段克隆至原核表达载体PGEX-6P-1,再将构建成功的原核表达质粒载体PGEX-6P-VP2转化至大肠杆菌BL21中,进行鉴定、测序、表达。结果表明,克隆的VP2基因片段全长1755bp,与6个VP2基因序列的同源性为98.7%～99.7%。Western-blotting分析显示,表达产物约为90kD的融合蛋白,可被犬细小病毒阳性血清所识别,具有良好的反应原性。

替米考星-新霉素对实验性鸡毒支原体病疗效研究

替米考星(Tilmicosin)是英国Elanco公司20世纪80年代开发的一种动物专用的大环内酯类抗生素[1].目前该药在世界许多国家都有上市,被批准使用治疗牛、山羊、绵羊、奶牛、猪、鸡等动物由敏感菌引起的感染性疾病,特别是畜禽呼吸道感染[2].

官方兽医与执业兽医制度下的动物医学专业临床实践教学新模式

临床实践教学新模式的开展和实施要求教师和学生从传统的临床实践教学观念向现代教育理念转变,从传统单纯提高技能和被动式教与学中得到解脱。坚持以学生为主体的教学观念,充分发挥学生学习的主动性和参与性。这种新的教学模式极大地激励了学生主动投入临床实践,有计划、有步骤地增强了动物医学专业学生诊治各种动物疾病的能力,锻炼了学生的身心素质。

黄芪多糖对肉鸡新城疫免疫效果的影响

研究黄芪多糖在新城疫(ND)La Sota疫苗免疫过程中对肉鸡免疫效果的影响。120只1日龄肉雏鸡随机分为3组,每组40只鸡。分为对照组、试验Ⅰ和Ⅱ组。所有肉鸡于21和42 d分别进行La Sota疫苗的首免和二免,胸肌注射,0.3 mL/羽。试验Ⅰ组每只鸡分别注射0.3 mL黄芪多糖注射液;试验Ⅱ组每只鸡分别注射0.6 mL黄芪多糖注射液;对照组正常饲喂全价料。试验结束时称量肉鸡质量,测定脾和法氏囊指数;分别在首免前1 d、首免7、14和21 d及二免14和21 d测定ND抗体效价。结果表明:试验Ⅰ和Ⅱ组肉鸡体质量、脾和法氏囊指数均高于对照组,差异显著;试验Ⅰ组从首免21 d开始与对照组差异显著;试验Ⅱ组首免14 d开始与对照组差异显著。从而得出黄芪多糖提高肉鸡体质量和免疫器官指数及新城疫血凝抑制试验抗体效价。

不同培养条件对牛精原干细胞增殖的影响与特性鉴定

探索血清浓度以及干细胞因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)对牛精原干细胞体外增殖的影响,并对其进行鉴定。试验1:以高糖DMEM为基础培养液,添加浓度为0%、2.5%、5%和10%的胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS),分为4个试验组。结果表明,血清浓度影响牛精原干细胞的体外增殖,添加2.5%的FBS比较合适。试验2:培养液中加入不同浓度的SCF、LIF及GDNF,可增加精原干细胞的数量,其中加入20μg/L SCF、80μg/L GDNF、10μg/L LIF后,与对照组比较能显著提高精原干细胞数(P<0.05)。采用碱性磷酸酶染色、细胞免疫组织化学染色和RT-PCR对牛精原干细胞进行鉴定,结果碱性磷酸酶染色呈弱阳性;细胞免疫组织化学染色Integrinβ1阳性、c-kit阳性;经RT-PCR扩增,获得了120 bp的Gfrα1序列和280 bp的c-kit序列,与预期的产物大小一致。因此,培养液中添加2.5%FBS、20μg/L SCF、80 ng/mL GDNF、10μg/L LIF对精原干细胞的增殖有利。

蒲公英多糖对羔羊生长性能及血清生化指标的影响

试验目的是研究日粮中不同添加剂量蒲公英多糖对羔羊生长性能及血清生化指标的影响。将120只断奶羔羊随机分为3个处理组,每处理组5个重复,每重复8只羔羊。其中试验I组为对照组,饲喂基础日粮,试验II组和III组为试验组,精料日粮中分别添加1.5%和2.5%的蒲公英多糖,预试期7 d,正试期42 d。结果表明:蒲公英多糖能对羔羊的平均日增质量有显著提高作用(P<0.05);添加蒲公英多糖料重比降低,试验III组与试验I组差异显著(P<0.05)。试验组能降低羔羊血清中尿素氮(BUN)、三酰甘油(TG)和胆固醇(CHOL)水平,说明在断奶羔羊日粮中添加蒲公英多糖能够提高其生长性能及降低血清中BUN、TG和CHOL。蒲公英多糖添加比例以精料中添加2.5%为宜。

低聚果糖对断奶仔猪消化酶活性肠道菌群及胃肠酸碱度的影响

试验旨在研究基础日粮中不同添加剂量的低聚果糖对断奶仔猪消化酶活性、肠道pH及肠道菌群的影响。试验I组为对照组,试验Ⅱ组、试验Ⅲ组和试验Ⅳ组日粮中分别添加0.2%、0.5%和0.8%的低聚果糖,试验结束时,在各重复组中随机选取1头健康的仔猪,屠宰后分别取胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠的肠道内容物,样品处理后进行相关检测分析,试验Ⅱ组、试验Ⅲ组和试验Ⅳ组较试验Ⅰ组对肠道不同部位的淀粉酶活性影响差异显著(P<0.05),其中十二指肠中的试验Ⅲ组显著高于试验I组(P<0.01)。添加不同剂量的低聚果糖可以明显降低仔猪胃肠道的pH(P<0.05),但各试验组间差异不显著(P>0.05);不同含量低聚果糖可以明显降低胃肠道大肠杆菌数量,随着添加剂量的增加降低幅度越大,提高乳酸杆菌的数量,但试验组间差异不显著(P>0.05)。由此可以说明断奶仔猪饲料中添加0.5%的低聚果糖能提高断奶仔猪的消化酶活性、降低胃肠道的pH和降低大肠杆菌数并提高乳酸菌数量。

白术等复方中草药对断奶仔猪抗氧化功能的影响

试验旨在研究日粮中不同添加剂量复方中草药对断奶仔猪抗氧化功能的影响。试验将120头断奶仔猪随机分为3个处理组,每处理组4个重复,每重复10头猪。其中1组为对照组,饲喂基础日粮,2和3组为试验组,日粮中分别添加0.8%和1.5%的复方中草药,预试期7 d,正试期21 d,分别在试验第7天、第14天和第21天测断奶仔猪血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)的含量。结果表明:3组断奶仔猪血清GSH-Px活性高于其他组,差异极显著或显著;在试验第7天时,复方中草药各剂量添加组断奶仔猪血清SOD活性显著高于1组;在试验第7天时,3组断奶仔猪血清MDA含量极显著低于1组,在试验第14天时,3组断奶仔猪血清MDA含量极显著低于1和2组。说明在断奶仔猪日粮中添加复方中草药能够提高其抗氧化功能。

虎杖蒽醌提取物对小鼠免疫功能的影响

试验旨在研究基础日粮中不同添加剂量的虎杖蒽醌提取物对小鼠免疫功能的影响。试验将80只昆明小鼠随机分为4组,其中试验Ⅰ组为对照组,饲喂基础日粮,试验Ⅱ、Ⅲ组和Ⅳ组日粮中分别添加0.5%、0.8%、1.0%的虎杖蒽醌提取物,以研究各组试验第28 d采血测定小鼠的IgG、IgE抗体水平,结果表明,血清中IgG试验Ⅲ组较对照组提高了41.72%,IgE试验Ⅲ组较对照组提高了62.46%;试验第28 d测定脾脏指数、胸腺指数,分别提高了23.66%和46.73%,试验组与对照组相比差异显著（P〈0.05）,三个不同添加剂量组间比较无显著性差异（P〉0.05）,由此可以说明,小鼠饲料中添加0.5%~1.0%的虎杖蒽醌提取物均可以提高小鼠的免疫功能,添加浓度0.8%最为合适。

辽西地区犬莱姆病血清流行病学调查

莱姆病（Lymedisease，LD）是20世纪70年代发现的一种由伯氏疏螺旋体所引起的，以硬蜱为主要传播媒介的自然疫源性疾病，我国自1986年在黑龙江省海林县首次证实有莱姆病以来，